pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2021-10-3-76-81pharmjournal-1003Research ArticleМЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВANALYTICAL METHODSПрименение высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе новой субстанции VMA-10-18Use of High Performance Liquid Chromatography in the Analysis of a New Substance VMA-10-18https://orcid.org/0000-0001-7778-8391МищенкоЕ. С.MischenkoE. S.

Мищенко Екатерина Сергеевна.

357532, Пятигорск-32, пр. Калинина, д. 11.

Ekaterina S. Mischenko.

11, Kalinina av., Pyatigorsk-32, 357532.

ekaterina-mischenko1809@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-9983-8393ЛазарянД. С.LazaryanJ. S.

357532, Пятигорск-32, пр. Калинина, д. 11.

John S. Lazaryan.

11, Kalinina av., Pyatigorsk-32, 357532.

https://orcid.org/0000-0003-0364-0807ЛазарянА. Д.LazaryanA. Jh.

357532, Пятигорск-32, пр. Калинина, д. 11.

Anush Jh. Lazaryan.

11, Kalinina av., Pyatigorsk-32, 357532.

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал ФГБОУ ВО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ПМФИ, филиал ФГБОУ ВО «ВолгГМУ» Минздрава России)Pyatigorsk Medical Pharmaceutical Institute - branch of Volgograd State Medical University2021270820211037681Copyright © Мищенко Е.С., Лазарян Д.С., Лазарян А.Д., 20212021Мищенко Е.С., Лазарян Д.С., Лазарян А.Д.Mischenko E.S., Lazaryan J.S., Lazaryan A.J.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1003Введение

Введение. Лекарственные препараты производных хиназолина обладают широким спектром фармакологических свойств, что делает эту группу достаточно уникальной среди остальных классов гетероциклических соединений. Субстанция VMA-10-18, обладающая церебровазодилатирующим, антидепрессивным, анксиолитическим и ноотропным свойствами, может стать новым перспективным лекарственным препаратом. В связи с этим актуальной задачей является разработка методик стандартизации данной субстанции.

Цель

Цель. Разработка и валидация методики количественного определения родственных примесей в новой биологически активной субстанции VMA-10-18 (Хиназофен) методом ВЭЖХ.

Материалы и методы

Материалы и методы. Для разработки условий хроматографического анализа использовали высокоочищенную субстанцию 3-[2-(4-метоксифениламино)-2-оксоэтил]-хиназолин-4(3Н)-она, а также ее родственные примеси: примесь I [исходный незамещенный хиназолин-4(3Н)-он] и примесь II (4-метоксихлорацетанилид). В качестве растворителя использовали спирт этиловый 95 %. Хроматограф Dionex UltiMate 3000 (Dionex, США) со спектрофотометрическим детектором. Система сбора и обработки данных Chromeleon v.7. Подвижная фаза - смесь ацетонитрила и ортофосфорной кислоты. Анализ выполняли в изократическом режиме.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Разработаны оптимальные условия хроматографирования субстанции VMA-10-18 и ее примесей. Установлено, что для четкого разделения пиков субстанции и примесей между собой подвижная фаза должна содержать ацетонитрил и ортофосфорную кислоту в соотношении 80 : 20. Валидацию разработанной методики проводили с учетом требования ГФ XIV издания и рекомендациям ICH. Подтверждена специфичность, линейность, правильность и прецизионность разработанной методики. Линейность и правильность методики определяли на 7 уровнях концентраций. Коэффициент корреляции превысил значение 0,99. Свободный член уравнения линейной зависимости (a) для обеих примесей был меньше его доверительного интервала (Δа), что доказывает отсутствие систематической погрешности методики. При определении показателя «Сходимость» рассчитанное относительное стандартное отклонение не превышало 2 %. При определении внутрилабораторной прецизионности рассчитывали t-критерий Стьюдента и F-критерий Фишера. Оба показателя отвечали заявленным требованиям.

Заключение

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения примесей в субстанции VMA-10-18 методом ВЭЖХ.

Introduction

Introduction. Quinazoline derivatives have a wide range of pharmacological properties, which makes this group quite unique among other classes of heterocyclic compounds. Substance VMA-10-18, which has cerebrovasodilating, antidepressant, anxiolytic and nootropic properties, may become a promising new drug. In this regard, an urgent task is to develop methods for standardizing this substance.

Aim

Aim. Development of a method for the quantitation of related impurities of a new biologically active substance VMA-10-18 (Quinazophene) by HPLC with subsequent statistical processing of the results.

Materials and methods

Materials and methods. To develop the conditions for chromatographic analysis, was used a highly purified substance 3-[2-(4-methoxyphenylamino)-2-oxoethyl]-quinazolin-4(3H)-one, as well as its related impurities: impurity I (unsubstituted quinazolin-4(3H)-one) and impurity II (4-methoxychloroacetanilide). Test solutions were prepared using volumetric glassware of accuracy class 1. Ethyl alcohol 95 % was used as a solvent. Chromatography was performed using a Dionex UltiMate 3000 system (Dionex, United States) with a spectrophotometric detector. The analysis was carried out at a wavelength of 231 nm. Data collection and processing was carried out using the Chromeleon v.7 system. A mixture of acetonitrile and orthophosphoric acid was used as a mobile phase. The analysis was performed in an isocratic mode. The validation of the developed method was carried out taking into account the requirements of the State Pharmacopeia of Russian Federation XIV edition and the recommendations of the ICH.

Results and discussion

Results and discussion. The optimal conditions for chromatography of the VMA-10-18 substance and its impurities have been developed. It was found that for a clear separation of the peaks of the substance and impurities among themselves, the mobile phase should contain acetonitrile and orthophosphoric acid in a ratio of 80 : 20. The specificity of the method was determined by chromatography of ethyl alcohol in order to exclude its influence on the analysis results. The linearity and correctness of the method were determined at 7 levels of concentration of impurities of the substance. The correlation coefficient has exceeded 0.99. Also, the free term of the linear dependence equation (a) for both impurities was less than its confidence interval (Δа), which proves the absence of a systematic error of the method. When determining the "Convergence" indicator, the calculated relative standard deviation did not exceed 2 %. When determining the intralaboratory precision, Student's t-test and Fisher's F-test were calculated. Both indicators met the stated requirements.

Conclusion

Conclusion. A method for the quantitative determination of impurities in the VMA-10-18 substance by HPLC has been developed and validated.

хиназолин-4(3Н)-онсубстанция VMA-10-18Хиназофеннезамещенный хиназолин-4(3Н)-онВЭЖХвалидацияquinazolin-4(3Н)-onesubstance VMA-10-18Quinazopheneunsubstituted quinazolin-4(3Н)-oneHPLCvalidationReferencesБартон Д., Оллис У. Д. Общая органическая химия. М.: Химия; 1985. Т. 8. 752 с.Barton D., Ollis W. D. Obshchaya organicheskaya khimiya [Comprehensive organic chemistry]. Moscow: Khimiya; 1985. V. 8. 752 p. (In Russ.)Armarego W. L. F. Chemistry of Heterocyclic Compounds: Fused Pyrimidines. Part I. Quinazolines. Volume 24. New York: John Wiley & Sons; 1967. 539 p.Armarego W. L. F. Chemistry of Heterocyclic Compounds: Fused Pyrimidines. Part I. Quinazolines. Volume 24. New York: John Wiley & Sons; 1967. 539 p.Chern J.-W., Tao P.-L., Wang K.-C., Gutcait A., Liu S.-W., Yen M.-H., Chien S.-L., Rong J.-K. Studies on quinazolines and 1,2,4-ben-zothiadiazine 1,1-dioxides. 8.1,2synthesis and pharmacological evaluation of tricyclic fused quinazolines and 1,2,4-benzothia-diazine 1,1-dioxides as potential a1-adrenoceptor antagonists. Journal of Medicinal Chemistry. 1998;41(17):3128-3141. DOI: 10.1021/jm970159v.Chern J.-W., Tao P.-L., Wang K.-C., Gutcait A., Liu S.-W., Yen M.-H., Chien S.-L., Rong J.-K. Studies on quinazolines and 1,2,4-ben-zothiadiazine 1,1-dioxides. 8.1,2synthesis and pharmacological evaluation of tricyclic fused quinazolines and 1,2,4-benzothia-diazine 1,1-dioxides as potential a1-adrenoceptor antagonists. Journal of Medicinal Chemistry. 1998;41(17):3128-3141. DOI: 10.1021/jm970159v.El-Hashash M. A. E.-A., Azab M. E., Faty R. A. E.-A., Amr A. E.-G. E. Synthesis, Antimicrobial and Anti-inflammatory Activity of Some New Benzoxazinone and Quinazolinone Candidates. Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 2016;64(3):263-271. DOI: 10.1248/cpb.c15-00904.El-Hashash M. A. E.-A., Azab M. E., Faty R. A. E.-A., Amr A. E.-G. E. Synthesis, Antimicrobial and Anti-inflammatory Activity of Some New Benzoxazinone and Quinazolinone Candidates. Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 2016;64(3):263-271. DOI: 10.1248/cpb.c15-00904.Das N., Garabadu D., Banerjee A. G., Krishnamurthy S., Shrivastava S. K. Synthesis and pharmacological evaluation of some N3-aryl/heteroaryl-substituted 2-(2-chlorostyryl)-6,7-dimethoxy-quinazolin-4(3H)-ones as potential anticonvulsant agents. Medicinal Chemistry Research. 2014;23(9):4167-4176. DOI: 10.1007/s00044-014-0990-4.Das N., Garabadu D., Banerjee A. G., Krishnamurthy S., Shrivastava S. K. Synthesis and pharmacological evaluation of some N3-aryl/heteroaryl-substituted 2-(2-chlorostyryl)-6,7-dimethoxy-quinazolin-4(3H)-ones as potential anticonvulsant agents. Medicinal Chemistry Research. 2014;23(9):4167-4176. DOI: 10.1007/s00044-014-0990-4.Alafeefy A. M., Ashour A. E., Prasad O., Sinha L., Pathak S., Alasmari F. A., Rishi A. K., Abdel-Aziz H. A. Development of certain novel N-(2-(2-(2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazinecarbonyl)phenyl)-benzamides and 3-(2-oxoindolin-3-ylideneamino)-2-substituted quinazolin-4(3H)-ones as CFM-1 analogs: design, synthesis, QSAR analysis and anticancer activity. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;92:191-201. DOI: 10.1016/j.ejmech.2014.12.048.Alafeefy A. M., Ashour A. E., Prasad O., Sinha L., Pathak S., Alasmari F. A., Rishi A. K., Abdel-Aziz H. A. Development of certain novel N-(2-(2-(2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazinecarbonyl)phenyl)-benzamides and 3-(2-oxoindolin-3-ylideneamino)-2-substituted quinazolin-4(3H)-ones as CFM-1 analogs: design, synthesis, QSAR analysis and anticancer activity. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;92:191-201. DOI: 10.1016/j.ejmech.2014.12.048.Mahdavi M., Pedrood K., Safavi M., Saeedi M., Pordeli M., Ardestani S. K., Emami S., Adib M., Foroumadi A., Shafiee A. Synthesis and anticancer activity of N-substituted 2-arylquinazolinones bearing trans-stilbene scaffold. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;95:492-499. DOI: 10.1016/j.ejmech.2015.03.057.Mahdavi M., Pedrood K., Safavi M., Saeedi M., Pordeli M., Ardestani S. K., Emami S., Adib M., Foroumadi A., Shafiee A. Synthesis and anticancer activity of N-substituted 2-arylquinazolinones bearing trans-stilbene scaffold. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;95:492-499. DOI: 10.1016/j.ejmech.2015.03.057.Yin S., Zhou L., Lin J., Xue L., Zhang C. Design, synthesis and biological activities of novel oxazolo[4,5-g]quinazolin-2(1H)-one derivatives as EGFR inhibitors. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;101:462-475. DOI: 10.1016/j.ejmech.2015.07.008.Yin S., Zhou L., Lin J., Xue L., Zhang C. Design, synthesis and biological activities of novel oxazolo[4,5-g]quinazolin-2(1H)-one derivatives as EGFR inhibitors. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;101:462-475. DOI: 10.1016/j.ejmech.2015.07.008.Петров В. И., Тюренков И. Н., Озеров А. А. Производные хиназолина, обладающие антидепрессивной, анксиолитической и ноотропной активностью. Патент РФ № 2507199. 20.02.2014. Бюл. № 5. 15 с. Доступно по: https://patents.google.com/patent/RU2507199C1/ru. Ссылка активна на 20.002.2014.Petrov V. I., Tyurenkov I. N., Ozerov A. A. Proizvodnye khinazolina, obladayushchie antidepressivnoy, anksioliticheskoy i nootropnoy aktivnost'yu [Quinazoline derivatives, possessing antidepressant, anxiolytic and nootropic activity]. Patent RUS № 2507199. 20.02.2014. Byul. № 5. Available at: https://patents.google.com/patent/RU2507199C1/ru. Accessed: 20.002.2014. (In Russ.)Тюренков И. Н., Озеров А. А., Солодунова Е. А., Арчакова Ю. В., Глухова Е. Г., Шматова Е. Н. Аномалия в ряду фармакологических свойств производных хиназолин-4(3Н)-она, имеющих фрагменты ацетанилида в качестве заместителей. Вестник ВолгГМУ. 2012;2(42):66-68.Tyurenkov I. N., Ozerov A. A., Solodunova E. A., Archakova Yu. V., Glukhova E. G., Shmatova E. N. Anomaly among pharmacological properties of quinazolin-4(3H)-one derivatives with acetanilide fragments as substituents. Vestnik VolgGMU = Journal of VolgSMU. 2012;2(42):66-68. (In Russ.)Арчакова Ю. В. Синтез и психотропные свойства новых амидов хиназолинового ряда. Инновации в современной фармакологии. Тез. докл. 4 съезда фармакологов России. 18-21 сентября 2012. Казань; 2012. 14 с.Archakova Yu. V. Sintez i psihotropnye svojstva novyh amidov hinazolinovogo ryada. Innovacii v sovremennoj farmakologii [Synthesis and psychotropic properties of new amides of the quinazoline series. Innovations in modern pharmacology]. Abstracts. report 4 congresses of pharmacologists of Russia. 18-21 September 2012. Kazan; 2012. 14 p. (In Russ.)Шатц В. Д. Сахартова О. В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология применения в лекарственной химии. Рига: Зинатне; 1988. 390 с.Shatc V. D., Sahartova O.V . Vysokoeffektivnaya zhidkostnaya hro-matografiya: Osnovy teorii. Metodologiya primeneniya v lekarstvennoj himii [High Performance Liquid Chromatography: Fundamentals of Theory. Methodology of application in medicinal chemistry]. Riga: Zinatne; 1988. 390 p. (In Russ.)Государственная фармакопея Российской Федерации. 14-е изд. Т. I. М.: Министерство здравоохранения Российской Федерации; 2018. 1814 с. Доступно по: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php. Ссылка активна на 20.002.2014.Gosudarstvennaya farmakopeya Rossiyskoy Federatsii [State Pharmacopeia of Russian Federation]. XIV edition. V. I. Moscow: Ministerstvo zdravookhraneniya Rossiyskoy Federatsii; 2018. 1814 p. Available at: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php. Accessed: 20.002.2014. (In Russ.)Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology Q2(R1). International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. Available at: https://database.ich.org/sites/default/files/q2_r1__guideline.pdf. Accessed: 10.12.2020.Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology Q2(R1). International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. Available at: https://database.ich.org/sites/default/files/q2_r1__guideline.pdf. Accessed: 10.12.2020.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.