Карнакова Полина К.
117246, Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3; 119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2
Polina K. Karnakova
20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246;
8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991
117246, Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3;
115409, Москва, Каширское шоссе, д. 31
Timofey N. Komarov
20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246;
31, Kashirskoe highway, Moscow, 115409
117246, Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3
Olga A. Archakova
20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246
117246, Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3
Dana S. Shchelgacheva20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246
117246, Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3
Alexandra A. Aleshina
20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246
117246, Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3
Natalia S. Bagaeva
20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246
117246, Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3;
119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2
Polina A. Karpova20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246; 8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991
117246, Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3; 115409, Москва, Каширское шоссе, д. 31
Igor E. Shohin
20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246;
31, Kashirskoe highway, Moscow, 115409
Введение. Наибольшей эффективностью и безопасностью в лечении артериальной гипертензии обладают комбинированные лекарственные препараты. Комбинация кандесартана и гидрохлоротиазида (антагонист рецепторов АТ1 и тиазидный диуретик соответственно) обеспечивает высокую эффективность антигипертензивной комбинированной терапии и находит широкое применение в медицинской практике. Разработка методики совместного определения кандесартана и гидрохлоротиазида в плазме крови человека является необходимой процедурой для выполнения аналитической части фармакокинетических исследований и исследований биоэквивалентности многокомпонентных лекарственных средств.
Цель. Целью исследования является разработка и валидация методики определения кандесартана и гидрохлоротиазида в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-селективным детектированием (ВЭЖХ-МС/МС) для дальнейшего исследования биоэквивалентности.
Материалы и методы. Определение кандесартана и гидрохлоротиазида в плазме крови человека проводили методом ВЭЖХ-МС/МС. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения белков ацетонитрилом. Внутренний стандарт: смешанный раствор валсартана и индапамида. Подвижная фаза: 0,1 % раствор муравьиной кислоты в воде (элюент А), 0,1 % муравьиной кислоты в ацетонитриле (элюент В). Колонка: Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl, 50 × 4,6 мм, 5 мкм. Аналитические диапазоны методики: 2,00–300,00 нг/мл для кандесартана, 2,00–200,00 нг/мл для гидрохлоротиазида в плазме крови. Источник ионизации: электроспрей. Условия детектирования: 441,10 → 192,00 m/z, 441,10 → 263,15 m/z (кандесартан), 295,85 → 269,00 m/z (гидрохлоротиазид), 436,00 → 207,05 m/z (валсартан), 363,85 → 132,10 m/z, 363,85 → 189,00 m/z (индапамид).
Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим валидационным параметрам: селективность, эффект матрицы, калибровочная кривая, точность, прецизионность, степень извлечения, нижний предел количественного определения, перенос пробы, стабильность (стабильность исходных и рабочих стандартных растворов аналитов и внутренних стандартов; краткосрочная стабильность; стабильность при трехкратной заморозке-разморозке аналитов; долгосрочная стабильность аналитов в матрице). Разработанная и валидированная методика соответствует требованиям правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза.
Заключение. Подтвержденный аналитический диапазон методики составил 2,00–300,00 нг/мл для кандесартана и 2,00–200,00 нг/мл для гидрохлоротиазида в плазме крови. Данная методика была использована в рамках проведения исследования биоэквивалентности комбинированных препаратов кандесартана и гидрохлоротиазида.
Introduction. Combined drugs have the greatest efficacy and safety in arterial hypertension treatment. The combination of candesartan and hydrochlorothiazide (AT1-receptor antagonist and a thiazide diuretic, respectively) provides high efficiency of antihypertensive combination therapy, therefore it is widely used in medical practice. Developing a method for simultaneous determination of candesartan and hydrochlorithiazide in human blood plasma is necessary for performing the analytical part of pharmacokinetic studies and bioequivalence studies of multicomponent drugs.
Aim. The aim of this study is to develop a method for quantitative determination of candesartan and hydrochlorothiazide in human plasma by high-performance liquid chromatography – tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) for further bioequivalence studies.
Materials and methods. Determination of candesartan and hydrochlorothiazide in human plasma by HPLC-MS/MS. The samples were processed by acetonitrile protein precipitation. Internal standard: mixed solution of valsartan and indapamide. Mobile phase: 0.1 % formic acid solution in water (eluent A), 0.1 % formic acid in acetonitrile (eluent B). Column: Phenomenex Luna Phenyl-Hexyl, 50x4.6 mm, 5 μm. Analytical range: 2.00–300.00 ng/mL for candesartan, 2.00–200.00 ng/mL for hydrochlorothiazide in human plasma. Ionization source: electrospray ionization. Detection conditions: 441.10 → 192.00 m/z, 441.10 → 263.15 m/z (candesartan), 295.85 → 269.00 m/z (hydrochlorothiazide), 436.00 → 207.05 m/z (valsartan), 363.85 → 132.10, 363.85 → 189.00 m/z (indapamide).
Results and discussion. This method was validated by selectivity, matrix effect, calibration curve, accuracy, precision, spike recovery, the lower limit of quantification, carry-over effect and stability. The developed method meets the requirements for conducting bioequivalence studies of medicinal products within the framework of the Eurasian Economic Union.
Conclusion. The analytical range was 2.00–300.00 ng/mL for candesartan, 2.00–200.00 ng/mL for hydrochlorothiazide in human plasma. The method was applied in BE study of the combination of candesartan and hydrochlorothiazide.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.