197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 14, лит. А
14A, Prof. Popov str., Saint-Petersburg, 197376, Russia
197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 14, лит. А
14A, Prof. Popov str., Saint-Petersburg, 197376, Russia
197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 14, лит. А
14A, Prof. Popov str., Saint-Petersburg, 197376, Russia
197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 14, лит. А
14A, Prof. Popov str., Saint-Petersburg, 197376, Russia
197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 14, лит. А
14A, Prof. Popov str., Saint-Petersburg, 197376, Russia
194223, Россия, г. Санкт-Петербург, пр. Тореза, д. 44
44, Toreza Ave., St. Petersburg, 194223, Russia
700015, Узбекистан, г. Ташкент, ул. Ойбека, д. 45
45, Oybek str., Tashkent, 700015, Uzbekistan
700015, Узбекистан, г. Ташкент, ул. Ойбека, д. 45
45, Oybek str., Tashkent, 700015, Uzbekistan
700015, Узбекистан, г. Ташкент, ул. Ойбека, д. 45
45, Oybek str., Tashkent, 700015, Uzbekistan
194223, Россия, г. Санкт-Петербург, пр. Тореза, д. 44
44, Toreza Ave., St. Petersburg, 194223, Russia
Повыдыш Мария Николаевна
197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, д. 14, лит. А
Maria N. Povydysh
14A, Prof. Popov str., Saint-Petersburg, 197376, Russia
Введение. Анализ клинической и лабораторной картины поражения вирусом SARS-CoV-2 позволяет говорить о наличии в патогенезе больных нарушений микроциркуляции и транспортировки кислорода, гемолиза эритроцитов, интраальвеолярного фибринообразования и микротромбообразования. Соответственно, поиск потенциальных антикоагулянтов, антиагрегантов эритроцитарного ряда, мембраностабилизирующих препаратов и мягких тромболитических препаратов способны предотвратить развитие угрожающих жизни осложнений и снизить смертность пациентов COVID-19.
Цель. Выделение формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида из травы стальника полевого (Ononis arvensis L.) и выявление молекулярных механизмов его влияния на активацию тромбоцитов in vitro, индуцированную TRAP-6 (Thrombin receptor activated peptide) и ADP (Аденозиндифосфат).
Материалы и методы. Надземные части стальника полевого (Ononis arvensis L.) были собраны в питомнике лекарственных растений СПХФУ (Ленинградская область, Всеволожский район, Приозерское шоссе, 38 км). Выделение формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида осуществляли методом препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографии на приборе Smartline (Knauer, Германия), оснащенном спектрофотометрическим детектором. Структуру формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида подтверждали методом одномерной и двумерной ЯМР-спектроскопии (Bruker Avance III, 400 MHz, Германия), а также масс-спектрометрией высокого разрешения (HR-ESI-MS) (Bruker Micromass Q-TOF, Германия) в сравнении с литературными данными. Изучение влияния формононетин-7-О-β-Dглюкопиранозида на индуцированную активацию тромбоцитов проводили на тромбоцитах человека, выделенных из крови здоровых добровольцев. Для исследования влияния формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида на агрегацию тромбоцитов использовали метод проточной цитофлуорометрии на приборе Cyto-FLEX (Beckman-Coulter, США).
Результаты и обсуждение. Согласно разработанной в предыдущих исследованиях методики фракционирования и очистки суммарного экстракта травы O. arvensis был выделен формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозид в индивидуальном виде для последующих биологических исследований cо суммарным выходом 30 % в сравнении с его содержанием в изначальном экстрактом. В пробах с формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозидом и ADP наблюдается выраженное ингибирование активации тромбоцитов – процент активных тромбоцитов колеблется в пределах 6,3–6,6 % при дозах формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида 1 μM, 3 μM и 30 μM. Ингибирующее действие формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида не носит дозозависимый характер (p ≤ 0,05). В пробах с формононетин-7-О-β-Dглюкопиранозидом и TRAP также наблюдается выраженное ингибирование активации тромбоцитов. Процент активных тромбоцитов равен 8 % при дозах формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида 1 μM, 15 % при дозах 3 μM, и 16 % при дозе 30 μM. У ингибирующего эффекта формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида наблюдается слабая дозозависимость (p ≤ 0,05).
Заключение. Введение формононетин-7-О-β-D-глюкопиранозида в дозах 1 μM, 3 μM, 30 μM выраженно ингибирует активацию тромбоцитов, индуцированную ADP и TRAP-6. Для ADP дозозависимого эффекта не возникает, в то время как для TRAP есть слабый дозозависимый эффект, наибольшая эффективность ингибирования достигается при минимальной исследованной дозе 1 μM. Во всех случаях полученные результаты являются статистически значимыми.
Introduction. Analysis of the clinical and laboratory picture of the SARS-CoV-2 infection suggests the presence of microcirculation and oxygen transport disorders, hemolysis of erythrocytes, intra-alveolar fibrin formation and microthrombus formation in the patient’s pathogenesis. Accordingly, the search for potential anticoagulants, erythrocyte antiplatelet agents, membrane stabilizing drugs and mild thrombolytic drugs can prevent the development of life-threatening complications and reduce the mortality of COVID-19 patients.
Aim. Isolation of formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside from the grass of Ononis arvensis L. and identification of the molecular mechanisms of its effect on platelet activation in vitro, induced by TRAP-6 (Thrombin receptor activated peptide) and ADP (adenosine diphosphate).
Materials and methods. Terrestrial parts of Ononis arvensis L. were collected in the SPCPU nursery of medicinal plants (Leningrad region, Vsevolozhsky district, Priozerskoe highway, 38 km). Isolation of formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside was carried out by preparative high performance liquid chromatography on a Smartline device (Knauer, Germany) equipped with a spectrophotometric detector. The structure of formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside was confirmed by one-dimensional and two-dimensional NMR spectroscopy (Bruker Avance III, 400 MHz, Germany), as well as high-resolution mass spectrometry (HR-ESI-MS) (Bruker Micromass Q-TOF, Germany). The study of the effect of formononetin- 7-O-β-D-glucopyranoside on induced platelet activation was carried out on human platelets isolated from the blood of healthy volunteers. To research the effect of formononetin-7-О-β-D-glucopyranoside on platelet aggregation flow cytofluorometry with Cyto-FLEX (Beckman-Coulter, USA) was used.
Results and discussion. According to the method of fractionation and purification of the total extract of O. arvensis developed in previous studies, formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside was isolated in an individual form for subsequent biological studies with a total yield of 30 % in comparison with its content in the original extract. In samples with formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside and ADP, there is a pronounced inhibition of platelet activation – the percentage of active platelets ranges from 6.3–6.6 % at doses of formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside 1 μM, 3 μM and 30 μM. The inhibitory effect of formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside is not dose-dependent (p ≤ 0.05). In samples with formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside and TRAP, there is also a pronounced inhibition of platelet activation. The percentage of active platelets is 8 % at 1 μM formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside doses, 15 % at 3 μM doses, and 16 % at 30 μM doses.
Conclusion. Administration of formononetin-7-O-β-D-glucopyranoside at doses of 1 μM, 3 μM, 30 μM strongly inhibits platelet activation induced by ADP and TRAP-6. For ADP, there is no dose-dependent effect, while for TRAP there is a weak dose-dependent effect, the greatest inhibition efficiency is achieved with the minimum investigated dose of 1 μM. In all cases, the results obtained are statistically significant.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.