Шинко Татьяна Геннадьевна
630091, Россия, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52
Tatiana G. Shinko
52, Krasny av., Novosibirsk, 630091, Russia
630091, Россия, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52
52, Krasny av., Novosibirsk, 630091, Russia
630126, Россия, г. Новосибирск, ул. Вилюйская, д. 28
28, Vilyuyskaya str., Novosibirsk, 630126, Russia
630126, Россия, г. Новосибирск, ул. Вилюйская, д. 28
28, Vilyuyskaya str., Novosibirsk, 630126, Russia
630126, Россия, г. Новосибирск, ул. Вилюйская, д. 28
28, Vilyuyskaya str., Novosibirsk, 630126, Russia
630091, Россия, г. Новосибирск, Красный проспект, д. 52
52, Krasny av., Novosibirsk, 630091, Russia
630126, Россия, г. Новосибирск, ул. Вилюйская, д. 28
28, Vilyuyskaya str., Novosibirsk, 630126, Russia
Введение. Додецил(3,5-диметил-4-гидроксибензил)сульфид (T1) и бис-[3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]сульфид (T2) – совместная разработка кафедры химии Новосибирского государственного педагогического университета и Новосибирского института антиоксидантов. В исследованиях и экспериментах была показана антиоксидантная, противовоспалительная, гепатопротекторная, цитопротекторная, гемореологическая активность данных веществ, что позволяет считать их перспективными лекарственными антиоксидантами. Для контроля качества при последующем производстве субстанций указанных соединений необходимо разработать параметры стандартизации и составить Проект Нормативной документации.
Цель. Разработка и валидация методик определения примесей новых перспективных биологически активных веществ T1 и T2.
Материалы и методы. Определение примесей проводили методом ВЭЖХ с УФ-детектированием при длине волны 278 нм на колонке ZORBAX SB-C18 (5 мкм, 150 × 4,6 мм) в изократическом режиме с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрил – вода 95 : 5 при анализе T1 и ацетонитрила при анализе T2.
Результаты и обсуждение. В ходе разработки методик было установлено присутствие в исследуемых образцах Т1 двух неидентифицированных примесей, содержание которых в течение срока годности не превышает 0,1 %. На хроматограмме Т2 обнаружены побочный продукт синтеза – бис-[3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]дисульфид (Т2-ДС) с установленной биологической безопасностью и пределом содержания 2,5 %, а также неидентифицированная примесь с содержанием не более 0,1 %. Проведена валидация разработанных методик ВЭЖХ по характеристикам «Специфичность», «Предел количественного определения», «Линейность», «Прецизионность», «Правильность», «Аналитическая область».
Заключение. Методики определения примесей T1 и T2 валидированы по указанным выше параметрам. Полученные результаты удовлетворяют критериям приемлемости: вещества и примеси четко разделяются на хроматограммах между собой; коэффициент корреляции (r) при определении линейности для примесей превышает 0,980; свободный член уравнений линейной зависимости статистически значимо не отличается от нуля; величина относительного стандартного отклонения (RSD%) не более 5 %; рассчитанные значения критериев Стьюдента и Фишера не превышают табличные. Разработанные методики могут применяться для контроля качества опытных образцов и в будущем при производстве субстанций исследуемых веществ.
Introduction. Dodecyl(3,5-dimethyl-4-hydroxybenzyl)sulfide (T1) and bis-[3-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl)propyl]sulfide (T2) are the collaborative development of Novosibirsk State Pedagogical University and Novosibirsk Research Institute of Antioxidants. It was revealed in several experiments and research works that these substances have antioxidant, anti-inflammatory, hepatoprotective, cytoprotective, haemorheological activities. These facts make the objects of study promising medicinal antioxidant drugs. Consequently it’s necessary for the future production quality control to have standards and analytical methods for substances analysis.
Aim. Impurities methods development and validation for the new biologically active substances T1 and T2.
Materials and methods. HPLC method with UV-detection on 278 nm was carried out for the determination of impurities in objects of study. HPLC analysis were performed on ZORBAX SB-C18 (5 μm, 150 × 4,6 mm) column with isocratic regimen and with use of the acetonitrile:water mixture (T1) or acetonitrile (T2) as a mobile phase.
Results and discussion. It was find out, that T1 has two unidentified impurities with concentration not more than 0,1 % during the shelf life. The chromatogramm of T2 has a peak of by-product of synthesis T2 – bis-[3-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl)propyl]disulfide (T2-DS). Biologically safety of T2-DS was demonstrated in the previous works and the concentration of T2-DS was established to be not more, than 2,5 %. Furthermore, there was the one more unidentified impurity with concentration less, than 0,1 % on the chromatogram of T2. The developed HPLC methods were validated on characteristics «specificity», «linearity», «precision», «limit of quantification», «accuracy», «range».
Conclusion. Methods for the determination of impurities in T1 and T2 were validated on the listed parameters. All the results meet the acceptance criteria: peaks on the chromatogramms are clearly separated; the correlation coefficients (r) are not more, than 0,980; accuracy was proved by linearity parameters; the value of the relative standard deviation is less, than 5 %; the intermediate precision for the both methods was proved by Fisher’s criterion and Student’s t-test.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.