pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2022-11-2-187-196pharmjournal-1234Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯPRECLINICAL AND CLINICAL STUDIESРазработка и валидация методики определения деферазирокса в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФDevelopment and Validation of a Method for Determining Deferasirox in Human Blood Plasma by HPLC-UVКарповаП. А.KarpovaP. A.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3; 119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246; 8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991

КомаровТ. Н.KomarovT. N.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

АрчаковаО. А.ArchakovaO. A.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

ЩелгачеваД. С.ShchelgachevaD. S.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

СувороваА. В.SuvorovaA. V.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

БагаеваН. С.BagaevaN. S.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

КарнаковаП. К.KarnakovaP. K.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3; 119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246; 8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991

ШохинИ. Е.ShohinI. E.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

ООО «Центр Фармацевтической Аналитики» (ООО «ЦФА»); ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет)РоссияLLC "CPHA"; I. M. Sechenov First MSMU of the Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University)Russian FederationООО «Центр Фармацевтической Аналитики» (ООО «ЦФА»)РоссияLLC "CPHA"Russian Federation202230052022112187196Copyright © Карпова П.А., Комаров Т.Н., Арчакова О.А., Щелгачева Д.С., Суворова А.В., Багаева Н.С., Карнакова П.К., Шохин И.Е., 20222022Карпова П.А., Комаров Т.Н., Арчакова О.А., Щелгачева Д.С., Суворова А.В., Багаева Н.С., Карнакова П.К., Шохин И.Е.Karpova P.A., Komarov T.N., Archakova O.A., Shchelgacheva D.S., Suvorova A.V., Bagaeva N.S., Karnakova P.K., Shohin I.E.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1234Введение

Введение. Деферазирокс является одним из наиболее известных комплексообразующих лекарственных средств и успешно применяется в хелатирующей терапии для лечения избытка железа в организме человека. Также деферазирокс входит в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, что свидетельствует о значимости данного лекарственного средства для российского здравоохранения. В указанном перечне присутствуют препараты только зарубежного производителя, поэтому в рамках тенденции к импортозамещению разработка препаратов деферазирокса отечественного производства является необходимым и перспективным направлением. В связи с чем возникает необходимость разработки методики, позволяющей с минимальными временными и ресурсными затратами количественно определить деферазирокс в плазме крови человека в рамках фармакокинетического исследования.

Цель

Цель. Целью исследования является разработка и валидация методики определения деферазирокса в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием (ВЭЖХ-УФ) для дальнейшего исследования фармакокинетики и биоэквивалентности лекарственных препаратов.

Материалы и методы

Материалы и методы. Определение деферазирокса в плазме крови человека проводили методом ВЭЖХ-УФ. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения белков ацетонитрилом. Раствор эрлотиниба использовался в качестве внутреннего стандарта. Подвижная фаза: 0,3%-й раствор ортофосфорной кислоты в воде, доведенный до pH 3,0 (элюент А) и 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле (элюент В). Колонка: Symmetry®, 75 × 4,6 мм (Waters, США). Аналитический диапазон методики для деферазирокса: 0,25–70,00 мкг/мл в плазме крови. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны поглощения 299 ± 2 нм.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Валидация разработанной методики проводилась по следующим валидационным параметрам: селективность, калибровочная кривая, точность, прецизионность, степень извлечения, нижний предел количественного определения, перенос пробы, стабильность (стабильность исходных и рабочих стандартных растворов аналита и внутреннего стандарта; краткосрочная стабильность; стабильность при трехкратной заморозке-разморозке аналита; долгосрочная стабильность аналита в матрице).

Заключение

Заключение. Была разработана и валидирована методика определения лекарственного средства деферазирокс в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ. Аналитический диапазон методики был подтвержден и составил 0,25–70,00 мкг/мл для деферазирокса в плазме крови. Данная методика была использована в рамках проведения исследования фармакокинетики и биоэквивалентности препаратов деферазирокса.

Introduction

Introduction. Deferasirox is one of the most well-known complexing drugs chelators and is successfully used in chelating therapy for the treatment of excess iron in the human body. Deferasirox is also included in the list of vital and essential medicines, which indicates the importance of this drug for Russian healthcare. In this document, there are drugs only from a foreign manufacturer, therefore, within the framework of the trend towards import substitution, the development of deferasirox preparations of domestic production is a necessary and promising direction. In this connection, there is a need to develop a method that allows quantifying deferasirox in human blood plasma with minimal time and resource costs as part of a pharmacokinetic study.

Aim

Aim. The aim of this study is to develop a method for quantitative determination of deferasirox in human blood plasma by high performance liquid chromatography coupled with ultraviolet detection (HPLC-UV) for further bioequivalence studies.

Materials and methods

Materials and methods. Determination of the deferasirox in human blood plasma was carried out by HPLC-UV. The method of proteins precipitation by acetonitrile was used as a sample preparation. Erlotinib solution was used as an internal standard. Mobile phase: 0.3 % solution of orthophosphoric acid in water, brought to pH 3.0 (eluent A) and 0.1 % solution of formic acid in acetonitrile (eluent B). Column was Symmetry®, 75 × 4,6 mm (Waters, США). Analytical range of the technique for deferasirox was 0.25–70.00 µg/ml in human blood plasma. Detection was carried out using a UV detector at an absorption wavelength of 299 ± 2 nm.

Results and discussion

Results and discussion. This method was validated by selectivity, calibration curve, accuracy, precision, spike recovery, the lower limit of quantification, carry-over effect and stability.

Conclusion

Conclusion. A method of quantitative determination of deferasirox in human blood plasma was developed and validated by HPLC-UV. The analytical range was 0.25–70.00 µg/ml in human blood plasma. This method was used as part of a study of the pharmacokinetics and bioequivalence of deferasirox drugs.

деферазироксплазмажелезоВЭЖХ-УФвалидацияопределениефармакокинетикабиоэквивалентностьdeferasiroxhuman blood plasmaironHPLC-UVvalidationpharmacokineticsbioequivalenceReferencesDíaz-García J. D., Gallegos-Villalobos A., Gonzalez-Espinoza L., Sanchez-Niño M. D., Villarrubia J., Ortiz A. Deferasirox Nephrotoxicity – the Knowns and Unknowns. Nature Reviews Nephrology. 2014;10(10):574–586. DOI: 10.1038/nrneph.2014.121.Díaz-García J. D., Gallegos-Villalobos A., Gonzalez-Espinoza L., Sanchez-Niño M. D., Villarrubia J., Ortiz A. Deferasirox Nephrotoxicity – the Knowns and Unknowns. Nature Reviews Nephrology. 2014;10(10):574–586. DOI: 10.1038/nrneph.2014.121.Yang L. P. H., Keam S.J., Keating G. M. Deferasirox. A Review of its Use in the Management of Transfusional Chronic Iron Overload. Drugs. 2007;67(15):2211–2230. DOI: 10.2165/00003495-200767150-00007.Yang L. P. H., Keam S.J., Keating G. M. Deferasirox. A Review of its Use in the Management of Transfusional Chronic Iron Overload. Drugs. 2007;67(15): 2211–2230. DOI: 10.2165/00003495-200767150-00007.Бабаева Т. Н., Поспелова Т. И., Нечунаева И. Н. Формирование избытка железа у пациентов с миелодиспластическим синдромом в группах промежуточного и низкого риска. Сибирский научный медицинский журнал. 2019;39(1):77–83. DOI: 10.15372/SSMJ20190111.Babaeva Т. N., Pospelova Т. I., Nechunaeva I. N. Formation of iron excess in patients with intermediateand lower-risk myelodysplastic syndrome. Siberian Scientific Medical Journal. 2019;39(1):77–83. (In Russ.) DOI: 10.15372/SSMJ20190111.Bollig C., Schell L. K., Rücker G., Allert R., Motschall E., Niemeyer C. M., Bassler D., Meerpohl J. J. Deferasirox for Managing Iron Overload in People with Thalassaemia. Cochrane Database Systematic Reviews. 2017;8(8):CD007476. DOI: 10.1002/14651858.CD007476.pub3.Bollig C., Schell L. K., Rücker G., Allert R., Motschall E., Niemeyer C. M., Bassler D., Meerpohl J. J. Deferasirox for Managing Iron Overload in People with Thalassaemia. Cochrane Database Systematic Reviews. 2017;8(8):CD007476. DOI: 10.1002/14651858.CD007476.pub3.Timoshnikov V. A., Kichigina L. A., Selyutina O. Y., Polyakov N. E., Kontoghiorghes G. J. Antioxidant Activity of Deferasirox and its Metal Complexes in Model Systems of Oxidative Damage: Comparison with Deferiprone. Molecules. 2021;26(16):5064. DOI: 10.3390/molecules26165064.Timoshnikov V. A., Kichigina L. A., Selyutina O. Y., Polyakov N. E., Kontoghiorghes G. J. Antioxidant Activity of Deferasirox and its Metal Complexes in Model Systems of Oxidative Damage: Comparison with Deferiprone. Molecules. 2021;26(16):5064. DOI: 10.3390/molecules26165064.Kang H., Han M., Xue, J., Baek Y., Chang J. O., Hu S., Nam H., Jo M. J., Fakhri G. E., Hutchens M. P., Choi H. S., Kim J. Renal Clearable Nanochelators for Iron Overload Therapy. Nature Communications. 2019;10(1):1–11. DOI: 10.1038/s41467-019-13143-z.Kang H., Han M., Xue, J., Baek Y., Chang J. O., Hu S., Nam H., Jo M. J., Fakhri G. E., Hutchens M. P., Choi H. S., Kim J. Renal Clearable Nanochelators for Iron Overload Therapy. Nature Communications. 2019;10(1):1–11. DOI: 10.1038/s41467-019-13143-z.Piolatto A., Berchialla P., Allegra S., De Francia S., Ferrero G. B., Piga A. Pharmacological and Clinical Evaluation of Deferasirox Formulations for Treatment Tailoring. Scientific Reports. 2021;11(1):1–12. DOI: 10.1038/s41598-021-91983-w.Piolatto A., Berchialla P., Allegra S., De Francia S., Ferrero G. B., Piga A. Pharmacological and Clinical Evaluation of Deferasirox Formulations for Treatment Tailoring. Scientific Reports. 2021;11(1):1–12. DOI: 10.1038/s41598-021-91983-w.Waldmeier F., Bruin G. J., Glaenzel U., Hazell K., Sechaud R., Warrington S., Porter J. B. Pharmacokinetics, Metabolism and Disposition of Deferasirox in β-thalassemic Patients with Transfusion-dependent Iron Overload who are at Pharmacokinetic Steady State. Drug Metabolism and Disposition. 2010;38(5):808–816. DOI: 10.1124/dmd.109.030833.Waldmeier F., Bruin G. J., Glaenzel U., Hazell K., Sechaud R., Warrington S., Porter J. B. Pharmacokinetics, Metabolism and Disposition of Deferasirox in β-thalassemic Patients with Transfusion-dependent Iron Overload who are at Pharmacokinetic Steady State. Drug Metabolism and Disposition. 2010;38(5):808–816. DOI: 10.1124/dmd.109.030833.Tanaka C. Clinical Pharmacology of Deferasirox. Clinical Pharmacokinetics. 2014;53(8):679–694. DOI: 10.1007/s40262-014-0151-4.Tanaka C. Clinical Pharmacology of Deferasirox. Clinical Pharmacokinetics. 2014;53(8):679–694. DOI: 10.1007/s40262-014-0151-4.Chen J., Xu Y., Lou H., Jiang B., Shao R., Yang D., Hu Y., Ruan Z. Effect of Genetic Polymorphisms on the Pharmacokinetics of Deferasirox in Healthy Chinese Subjects and an Artificial Neural Networks Model for Pharmacokinetic Prediction. European Journal of Drug Metabolism and Pharmacokinetics. 2020;45(6):761–770. DOI: 10.1007/s13318-020-00647-z.Chen J., Xu Y., Lou H., Jiang B., Shao R., Yang D., Hu Y., Ruan Z. Effect of Genetic Polymorphisms on the Pharmacokinetics of Deferasirox in Healthy Chinese Subjects and an Artificial Neural Networks Model for Pharmacokinetic Prediction. European Journal of Drug Metabolism and Pharmacokinetics. 2020;45(6):761–770. DOI: 10.1007/s13318-020-00647-z.Paramanindita A. S., Harahap Y., Wijayanti T. R., Lusthom W., Prasaja B., Widjaja E., Sandra M., Puspanegara G. Efficacy of Deferasirox Through Bioequivalence Study in Indonesian Healthy Volunteer. Iranian Journal of Blood and Cancer. 2021;13(2):48–53.Paramanindita A. S., Harahap Y., Wijayanti T. R., Lusthom W., Prasaja B., Widjaja E., Sandra M., Puspanegara G. Efficacy of Deferasirox Through Bioequivalence Study in Indonesian Healthy Volunteer. Iranian Journal of Blood and Cancer. 2021;13(2):48–53.Onal C., Tekkeli S. E. K., Sagiroglu A. A. Liquid Chromatographic Analysis for the Determination of Deferasirox in Pharmaceutical Formulations and Spiked Plasma Samples Using Dansyl Chloride Reagent. Journal of Chemical Metrology. 2020;14(1):35–41. DOI: 10.25135/jcm.35.20.01.1518.Onal C., Tekkeli S. E. K., Sagiroglu A. A. Liquid Chromatographic Analysis for the Determination of Deferasirox in Pharmaceutical Formulations and Spiked Plasma Samples Using Dansyl Chloride Reagent. Journal of Chemical Metrology. 2020;14(1):35–41. DOI: 10.25135/jcm.35.20.01.1518.Li T., Cui Z., Wang Y., Yang W., Li D., Song Q., Sun L., Ding L. A Simple LC–MS/MS Method for Determination of Deferasirox in Human Plasma: Troubleshooting of Interference from Ferric Ion in Method Development and its Application. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2018;151:145–150. DOI: 10.1016/j.jpba.2017.12.052.Li T., Cui Z., Wang Y., Yang W., Li D., Song Q., Sun L., Ding L. A Simple LC–MS/MS Method for Determination of Deferasirox in Human Plasma: Troubleshooting of Interference from Ferric Ion in Method Development and its Application. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2018;151:145–150. DOI: 10.1016/j.jpba.2017.12.052.Golpayegani M. R., Akramipour R., Fattahi N. Sensitive Determination of Deferasirox in Blood of Patients with Thalassemia Using Dispersive Liquid-liquid Microextraction Based on Solidification of Floating Organic Drop Followed by HPLC–UV. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2021;193:113735. DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113735.Golpayegani M. R., Akramipour R., Fattahi N. Sensitive Determination of Deferasirox in Blood of Patients with Thalassemia Using Dispersive Liquid-liquid Microextraction Based on Solidification of Floating Organic Drop Followed by HPLC–UV. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2021;193:113735. DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113735.Onal C., Tekkeli S. E. K., Sagiroglu A. A. A Liquid Chromatographic Analysis of Deferasirox in Human Breast Milk with Fluorimetric Detection. Chromatographia. 2020;83(11):1329–1333. DOI: 10.1007/s10337-020-03953-5.Onal C., Tekkeli S. E. K., Sagiroglu A. A. A Liquid Chromatographic Analysis of Deferasirox in Human Breast Milk with Fluorimetric Detection. Chromatographia. 2020;83(11):1329–1333. DOI: 10.1007/s10337-020-03953-5.De Francia S., Massano D., Piccione F. M., Pirro E., Racca S., Di Carlo F., Piga A. A New HPLC UV Validated Method for Therapeutic Monitoring of Deferasirox in Thalassaemic Patients. Journal of Chromatography B. 2012;893-894:127–133. DOI: 10.1016/j.jchromb.2012.02.047.De Francia S., Massano D., Piccione F. M., Pirro E., Racca S., Di Carlo F., Piga A. A New HPLC UV Validated Method for Therapeutic Monitoring of Deferasirox in Thalassaemic Patients. Journal of Chromatography B. 2012;893-894:127–133. DOI: 10.1016/j.jchromb.2012.02.047.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.