pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2022-11-2-197-206pharmjournal-1235Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯPRECLINICAL AND CLINICAL STUDIESРазработка и валидация методики определения инновационного препарата DD217 – ингибитора фактора Xa в плазме крови крыс с целью проведения фармакокинетического исследованияDevelopment and Validation of the HPLC Method for Quantification of the Innovative Drug DD217, Factor Xa Inhibitor, in Rat Plasma for a Pharmacokinetic Studyhttps://orcid.org/0000-0002-6171-2496ДубовикН. С.DubovikN. S.

115409, г. Москва, Каширское шоссе, д. 31

31, Kashirskoe highway, Moscow, 115409

NSDubovik@mephi.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7500-6122ГурандаД. Ф.GurandaD. F.

121596, г. Москва, ул. Горбунова, д. 2;119992, г. Москва, Ленинские горы, д. 1, стр. 40

 2, Gorbunova str., Moscow, 121596; 1/40, Leninskiye Gory, Moscow, 119992

https://orcid.org/0000-0001-8779-3573РаменскаяГ. В.RamenskayaG. V.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2

8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991

https://orcid.org/0000-0002-9917-0469ТовбинД. Г.TovbinD. G.

121205, г. Москва, тер. инновационного центра Сколково, ул. Нобеля, д. 7, помещение 146;119991, г. Москва, ул. Косыгина, д. 4

7/146, Nobel str., ter. Innovation Center Skolkovo, Moscow, 121205; 4, Kosygina str., Moscow, 119991

https://orcid.org/0000-0002-8106-9960ТарасовД. Н.TarasovD. N.

121205, г. Москва, тер. инновационного центра Сколково, ул. Нобеля, д. 7, помещение 146;119991, г. Москва, ул. Косыгина, д. 4

7/146, Nobel str., ter. Innovation Center Skolkovo, Moscow, 121205; 4, Kosygina str., Moscow, 119991

https://orcid.org/0000-0003-2734-5036СавченкоА. Ю.SavchenkoA. Yu.

143442, Московская область, Красногорский район, пос. Светлые Горы, владение 1

possession 1, Svetlye Gory settlement, Krasnogorsk district, Moscow region, 143442

https://orcid.org/0000-0003-3554-8941АрнаутовВ. С.ArnautovV. S.

121205, г. Москва, тер. инновационного центра Сколково, ул. Нобеля, д. 7, помещение 146

7/146, Nobel str., ter. Innovation Center Skolkovo, Moscow, 121205

ФГАОУ ВО «Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ» (НИЯУ МИФИ)National Research Nuclear University MEPhI (Moscow Engineering Physics Institute)ООО «Фарм ИннТех»; Научно-исследовательский институт физико-химической биологии имени А. Н. Белозерского (НИИФХБ), МГУ имени М. В. ЛомоносоваLLC "Pharm InnTech"; A. N. Belozersky Research Institute of Physical-Chemical Biology, Lomonosov Moscow State UniversityФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)I. M. Sechenov First MSMU of the Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University)ООО «ФармаДиол»; ФГБУН Институт химической физики им. Н. Н. Семёнова Российской академии наук (ИХФ РАН)LLC "PharmaDiall"; N. N. Semenov Institute of Chemical PhysicsФГБУН «Научный центр биомедицинских технологий Федерального медико-биологического агентства» (ФГБУН НЦБМТ ФМБА России)Scientific Center for Biomedical Technologies of the Federal Medical and Biological AgencyООО «ФармаДиол»LLC "PharmaDiall"202230052022112197206Copyright © Дубовик Н.С., Гуранда Д.Ф., Раменская Г.В., Товбин Д.Г., Тарасов Д.Н., Савченко А.Ю., Арнаутов В.С., 20222022Дубовик Н.С., Гуранда Д.Ф., Раменская Г.В., Товбин Д.Г., Тарасов Д.Н., Савченко А.Ю., Арнаутов В.С.Dubovik N.S., Guranda D.F., Ramenskaya G.V., Tovbin D.G., Tarasov D.N., Savchenko A.Y., Arnautov V.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1235Введение

Введение. В настоящее время актуальной задачей для фармацевтической науки является поиск и разработка инновационных препаратов. Одним из таких является N-(5-хлорпиридин-2-ил)-2-({4 [этанимидоил(метил)амино]бензоил}амино)-5-метилбензамида гидрохлорид (далее – DD217) – инновационный препарат, относящийся к классу антикоагулянтов, ингибиторов фактора Xa.

Цель

Цель. Целью настоящего исследования явилась разработка и валидация методики определения DD217 в плазме крови крыс методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС) и применение разработанной методики для проведения фармакокинетических исследований.

Материалы и методы

Материалы и методы. В исследовании были использованы аутбредные крысы Wistar. Крысам вводили раствор субстанции DD217 однократно, внутрижелудочно в дозах 5, 15, 30 мг/кг. Для определения DD217 в плазме крови крыс применяли валидированную методику определения DD217 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС). В качестве внутреннего стандарта был выбран небиволол. Хроматографическое разделение проводилось с использованием колонки Phenomenex Luna С8 (3 мкм, 50 × 4,6 мм). В качестве подвижной фазы использовали 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в деионизованной воде и 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле. Общее время анализа каждого образца составляло 2,0 мин. DD217 и небиволол детектировали в режиме положительной ионизации электроспреем по ионным переходам m/z 436,1 → 119,9 и 406,0 → 151,0 соответственно. Фармакокинетические параметры и описательную статистику рассчитывали модельно-независимым методом при помощи программного обеспечения IBM SPSS Statistics v27 и Julia v1.6.0 (Mixed Models v3.8.0, ClinicalTrialUtilities v0.5.1).

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим показателям: нижний предел количественного определения, селективность, правильность и прецизионность, допустимость разведения, линейность, эффект матрицы, степень извлечения, эффект переноса и стабильность. Нижний предел количественного определения DD217 в плазме крови крыс составил 2,0 нг/мл. Разработанная методика была успешно применена для определения фармакокинетических параметров субстанции DD217 в плазме крови крыс после внутрижелудочного введения в дозах 5, 15, 30 мг/кг.

Заключение

Заключение. Методика для количественного определения DD217 в плазме крови впервые разработана, валидирована и применена для оценки фармакокинетических параметров субстанции DD217 в плазме крови крыс.

Introduction

Introduction. Nowadays, discovery and development of innovative drugs represent a relevant goal for the pharmaceutical market. One of such drugs is N-(5-chloropyridine-2-yl)-2-({4-[ethanimidoyl(methyl)benzoyl}amino)-5-methylbenzamide hydrochloride (hereinafter DD217), an innovative drug that belongs to the class of anticoagulants, namely factor Xa inhibitors.

Aim

Aim. The aim of this study was to develop and validate a method for DD217 determination in rat plasma by means of high-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS) to carry out pharmacokinetic studies.

Materials and methods

Materials and methods. Outbred Wistar rats were used in the study. Rats received a single dose of DD217 substance solution intragastrically at a dose of 5, 15, 30 mg/kg. The validated HPLC-MS/MS method was employed for DD217 determination in rat plasma. Nebivolol was chosen as the internal standard of the method. Chromatographic separation involved the use of Phenomenex Luna С8 column (3 µm, 50 × 4.6 mm) and gradient elution with water-acetonitrile solution containing 0.1 % formic acid. The total run time of each sample was equal to 2.0 min. DD217 and nebivolol were detected in positive electrospray ionization mode, the ion transitions monitored were m/z 436,1 → 119,9 and 406,0 → 151,0, respectively. Pharmacokinetic parameters and descriptive statistics were calculated through model-independent method in IBM SPSS Statistics v27 and Julia v1.6.0 (MixedModels v3.8.0, ClinicalTrialUtilities v0.5.1) software.

Results and discussion

Results and discussion. Method was validated by linearity, lower limit of quantification, selectivity, accuracy and precision, dilution integrity, matrix effect, recovery, carry-over, and stability. The lower limit of quantification of DD217 in rat plasma was 2.0 ng/mL. The method was successfully applied for establishing the pharmacokinetic parameters of DD217 substance in rat plasma after intragastric administration at a dose of 5, 15, 30 mg/kg.

Conclusion

Conclusion. HPLC-MS/MS method for DD217 determination in plasma was developed, validated and applied in order to evaluate pharmacokinetic parameters of DD217 substance in rat plasma.

DD217крысыплазмаВЭЖХ-МС/МСвалидацияфармакокинетикаDD217ratplasmaHPLC-MS/MSvalidationpharmacokineticsReferencesGlushchenko V. A., Irklienko E. K. Cardiovascular morbidity is one of the most important public health problems. Medicine and Health Organization. 2019;4(1):56–63. (In Russ.)Glushchenko V. A., Irklienko E. K. Cardiovascular morbidity is one of the most important public health problems. Medicine and Health Organization. 2019;4(1):56–63. (In Russ.)Mensah G. A., Roth G. A., Fuster V. The Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risk Factors: 2020 and Beyond. J Am Coll Cardiol. 2019;74(20):2529–2532. DOI: 10.1016/J.JACC.2019.10.009.Mensah G. A., Roth G. A., Fuster V. The Global Burden of Cardiovascular Diseases and Risk Factors: 2020 and Beyond. J Am Coll Cardiol. 2019;74(20):2529–2532. DOI: 10.1016/J.JACC.2019.10.009.Weitz J. I., Harenberg J. New developments in anticoagulants: Past, present and future. Thrombosis and Haemostasis. 2017;28;117(7):1283–1288. DOI: 10.1160/TH16-10-0807.Weitz J. I., Harenberg J. New developments in anticoagulants: Past, present and future. Thrombosis and Haemostasis. 2017;28;117(7):1283–1288. DOI: 10.1160/TH16-10-0807.McGrath E. R., Go A. S., Chang Y., Borowsky L. H., Fang M. C., Reynolds K., Singer D. E. Use of Oral Anticoagulant Therapy in Older Adults with Atrial Fibrillation After Acute Ischemic Stroke. Journal of the American Geriatrics Society. 2017;65(2):241–248. DOI: 10.1111/jgs.14688.McGrath E. R., Go A. S., Chang Y., Borowsky L. H., Fang M. C., Reynolds K., Singer D. E. Use of Oral Anticoagulant Therapy in Older Adults with Atrial Fibrillation After Acute Ischemic Stroke. Journal of the American Geriatrics Society. 2017;65(2):241–248. DOI: 10.1111/jgs.14688.Di Minno A., Frigerio B., Spadarella G., Ravani A., Sansaro D., Amato M., Baldassarre D. Old and new oral anticoagulants: Food, herbal medicines and drug interactions. Blood Reviews. 2017;31(4):193–203. DOI: 10.1016/j.blre.2017.02.001Di Minno A., Frigerio B., Spadarella G., Ravani A., Sansaro D., Amato M., Baldassarre D. Old and new oral anticoagulants: Food, herbal medicines and drug interactions. Blood Reviews. 2017;31(4):193–203. DOI: 10.1016/j.blre.2017.02.001Marzec L. N., Wang J., Shah N. D., Chan P. S., Ting H. H., Gosch K. L., Hsu J. C., Maddox T. M. Influence of Direct Oral Anticoagulants on Rates of Oral Anticoagulation for Atrial Fibrillation. Journal of the American College of Cardiology. 2017;69(20):2475–2484. DOI: 10.1016/j.jacc.2017.03.540.Marzec L. N., Wang J., Shah N. D., Chan P. S., Ting H. H., Gosch K. L., Hsu J. C., Maddox T. M. Influence of Direct Oral Anticoagulants on Rates of Oral Anticoagulation for Atrial Fibrillation. Journal of the American College of Cardiology. 2017;69(20):2475–2484. DOI: 10.1016/j.jacc.2017.03.540.Lippi G., Gosselin R., Favaloro E. J. Current and Emerging Direct Oral Anticoagulants: State-of-the-Art. Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 2019;45(05):490–501. DOI: 10.1055/s-0039-1692703.Lippi G., Gosselin R., Favaloro E. J. Current and Emerging Direct Oral Anticoagulants: State-of-the-Art. Seminars in Thrombosis and Hemostasis. 2019;45(05):490–501. DOI: 10.1055/s-0039-1692703.Shimada K., Hasegawa S., Nakao S., Mukai R., Sasaoka S., Ueda N., Kato Y., Abe J., Mori T., Yoshimura T., Kinosada Y., Nakamura M. Adverse reaction profiles of hemorrhagic adverse reactions caused by direct oral anticoagulants analyzed using the Food and Drug Administration Adverse Event Reporting System (FAERS) database and the Japanese Adverse Drug Event Report (JADER) database. Int J Med Sci. 2019;16(9):1295–1303. DOI: 10.7150/ijms.34629Shimada K., Hasegawa S., Nakao S., Mukai R., Sasaoka S., Ueda N., Kato Y., Abe J., Mori T., Yoshimura T., Kinosada Y., Nakamura M. Adverse reaction profiles of hemorrhagic adverse reactions caused by direct oral anticoagulants analyzed using the Food and Drug Administration Adverse Event Reporting System (FAERS) database and the Japanese Adverse Drug Event Report (JADER) database. Int J Med Sci. 2019;16(9):1295–1303. DOI: 10.7150/ijms.34629de Candia M., Lopopolo G., Altomare C. Novel factor Xa inhibitors: A patent review. Expert Opin Ther Pat. 2009;19(11):1535–1580. DOI: 10.1517/13543770903270532.de Candia M., Lopopolo G., Altomare C. Novel factor Xa inhibitors: A patent review. Expert Opin Ther Pat. 2009;19(11):1535–1580. DOI: 10.1517/13543770903270532.Kozieł M., Lip G. Y. H. Estimating individual lifetime benefit and bleeding risk of adding oral anticoagulation to aspirin for patients with stable cardiovascular disease: directions from COMPASS? European Heart Journal. 2019;7;40(46):3779–3781. DOI: 10.1093/eurheartj/ehz517.Kozieł M., Lip G. Y. H. Estimating individual lifetime benefit and bleeding risk of adding oral anticoagulation to aspirin for patients with stable cardiovascular disease: directions from COMPASS? European Heart Journal. 2019;7;40(46):3779–3781. DOI: 10.1093/eurheartj/ehz517.Vranckx P., Valgimigli M., Heidbuchel H. The significance of drugdrug and drug-food interactions of oral anticoagulation. Arrhythmia Electrophysiol Rev. 2018;7:55–61. DOI: 10.15420/aer.2017.50.1.Vranckx P., Valgimigli M., Heidbuchel H. The significance of drugdrug and drug-food interactions of oral anticoagulation. Arrhythmia Electrophysiol Rev. 2018;7:55–61. DOI: 10.15420/aer.2017.50.1.Tarasov D. N., Tovbin D. G., Malakhov D. V., Aybush A. V., Tserkovnikova N. A., Savelyeva M. I., Savchenko A. Y. The Development of New Factor Xa Inhibitors Based on Amide Synthesis. Current Drug Discovery Technologies. 2018;15(4):335–350. DOI: 10.2174/1570163815666180215114732.Tarasov D. N., Tovbin D. G., Malakhov D. V., Aybush A. V., Tserkovnikova N. A., Savelyeva M. I., Savchenko A. Y. The Development of New Factor Xa Inhibitors Based on Amide Synthesis. Current Drug Discovery Technologies. 2018;15(4):335–350. DOI: 10.2174/1570163815666180215114732.Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official Journal of the European Union / Luxembourg: Publications Office of the European Union. 2010;53:33–79.Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. Official Journal of the European Union / Luxembourg: Publications Office of the European Union. 2010;53:33–79.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.