<?xml version="1.0" encoding="UTF-8"?>
<!DOCTYPE article PUBLIC "-//NLM//DTD JATS (Z39.96) Journal Publishing DTD v1.3 20210610//EN" "JATS-journalpublishing1-3.dtd">
<article article-type="research-article" dtd-version="1.3" xmlns:mml="http://www.w3.org/1998/Math/MathML" xmlns:xlink="http://www.w3.org/1999/xlink" xmlns:xsi="http://www.w3.org/2001/XMLSchema-instance" xml:lang="ru"><front><journal-meta><journal-id journal-id-type="publisher-id">pharmjournal</journal-id><journal-title-group><journal-title xml:lang="ru">Разработка и регистрация лекарственных средств</journal-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>Drug development &amp; registration</trans-title></trans-title-group></journal-title-group><issn pub-type="ppub">2305-2066</issn><issn pub-type="epub">2658-5049</issn><publisher><publisher-name>LLC «CPHA»</publisher-name></publisher></journal-meta><article-meta><article-id pub-id-type="doi">10.33380/2305-2066-2022-11-4(1)-85-90</article-id><article-id custom-type="elpub" pub-id-type="custom">pharmjournal-1403</article-id><article-categories><subj-group subj-group-type="heading"><subject>Research Article</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="ru"><subject>МЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ</subject></subj-group><subj-group subj-group-type="section-heading" xml:lang="en"><subject>ANALYTICAL METHODS</subject></subj-group></article-categories><title-group><article-title>Разработка параметров стандартизации травы культивируемого вида манжетка мягкая (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.)</article-title><trans-title-group xml:lang="en"><trans-title>Development of Quality Control Parameters for Standardization of Herb of the Cultivated Plant Alchemilla mollis (Buser) Rothm.</trans-title></trans-title-group></title-group><contrib-group><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-8605-0847</contrib-id><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Бояршинов</surname><given-names>В. Д.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Boyarshinov</surname><given-names>V. D.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>614990, г. Пермь, ул. Полевая, д. 2</p></bio><bio xml:lang="en"><p>2, Polevaya str., Perm, 614990</p></bio><email xlink:type="simple">vitaly.boyarschinov@yandex.ru</email><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib><contrib contrib-type="author" corresp="yes"><contrib-id contrib-id-type="orcid">https://orcid.org/0000-0002-7401-8196</contrib-id><name-alternatives><name name-style="eastern" xml:lang="ru"><surname>Зорина</surname><given-names>Е. В.</given-names></name><name name-style="western" xml:lang="en"><surname>Zorina</surname><given-names>E. V.</given-names></name></name-alternatives><bio xml:lang="ru"><p>614990, г. Пермь, ул. Полевая, д. 2</p></bio><bio xml:lang="en"><p>2, Polevaya str., Perm, 614990</p></bio><xref ref-type="aff" rid="aff-1"/></contrib></contrib-group><aff-alternatives id="aff-1"><aff xml:lang="ru"><institution>ФГБОУ ВО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО ПГФА Минздрава России)</institution></aff><aff xml:lang="en"><institution>Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Perm State Pharmaceutical Academy" of the Ministry of Health of the Russian Federation</institution></aff></aff-alternatives><pub-date pub-type="collection"><year>2022</year></pub-date><pub-date pub-type="epub"><day>27</day><month>12</month><year>2022</year></pub-date><volume>11</volume><issue>4</issue><issue-title>Приложение 1</issue-title><fpage>85</fpage><lpage>90</lpage><permissions><copyright-statement>Copyright &amp;#x00A9; Бояршинов В.Д., Зорина Е.В., 2022</copyright-statement><copyright-year>2022</copyright-year><copyright-holder xml:lang="ru">Бояршинов В.Д., Зорина Е.В.</copyright-holder><copyright-holder xml:lang="en">Boyarshinov V.D., Zorina E.V.</copyright-holder><license xml:lang="ru" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.</license-p></license><license xml:lang="en" license-type="creative-commons-attribution" xlink:href="https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/" xlink:type="simple"><license-p>This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.</license-p></license></permissions><self-uri xlink:href="https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1403">https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1403</self-uri><abstract><sec><title>Введение</title><p>Введение. Для внедрения в фармацевтическую практику предлагается трава манжетки с целью получения экстрактов, обладающих различными видами фармакологической активности. Для расширения сырьевой базы манжеток предложено использовать культивируемое растение с высокой биомассой – манжетку мягкую (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.). Трава манжетки мягкой по качественным и количественным характеристикам химического состава сопоставима с образцами сырья дикорастущих манжеток. Наличие хемотаксономических особенностей обуславливает необходимость подготовки нормативной документации для внедрения данного растения в качестве источника лекарственного сырья.</p></sec><sec><title>Цель</title><p>Цель. Цель исследования разработка методики оценки основной группы БАВ и количественного определения флавоноидов в траве манжетки мягкой.</p></sec><sec><title>Материалы и методы</title><p>Материалы и методы. В качестве объектов исследования использовали образцы травы манжетки мягкой, заготовленной от культивируемых на территории Пермского края растений. Хроматографические параметры подлинности сырья определяли методом тонкослойной хроматографии (ТСХ). Для разработки параметров количественного определения суммы флавоноидов в траве манжетки мягкой осуществляли модификацию методики предложенной для травы манжетки.</p></sec><sec><title>Результаты и обсуждение</title><p>Результаты и обсуждение. При проведении хроматографического исследования в траве манжетки мягкой идентифицированы цинарозид, рутин, кверцетин. К маркерным веществам травы манжетки мягкой отнесён цинарозид. В качестве оптимальной хроматографической системы выбрана этилацетат : уксусная кислота (85 : 15). Проведена модификация и валидация методики количественного определения флавоноидов в траве манжетки. Обоснована смена экстрагента, размера частиц, времени и кратности экстракции для проведения пробоподготовки и использование цинарозида в качестве стандартного вещества. Установлены оптимальные условия реакции комплексообразования с алюминия хлоридом.</p></sec><sec><title>Заключение</title><p>Заключение. Для определения подлинности травы манжетки мягкой предложено использовать идентификацию цинарозида методом ТСХ. Модифицированная методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчёте на цинарозид для травы манжетки мягкой, воспроизводима, правильна и может быть использована для стандартизации. При апробации методики на образцах сырья, заготовленных в Пермском крае, установлен диапазон значений содержания флавоноидов 3,14–4,84 %, со средним уровнем вариабельности.</p></sec></abstract><trans-abstract xml:lang="en"><sec><title>Introduction</title><p>Introduction. Alchemilla herb is proposed for introduction into pharmaceutical practice, for obtaining extracts with various pharmacological activity. To expand, resource base of Alchemilla it has been proposed to use a high biomass cultivated plant – Alchemilla mollis (Buuser) Rothm. In terms of qualitative and quantitative characteristics of the chemical composition Alchemilla mollis herb is comparable to the samples of raw materials of wild-growing Alchemilla. The presence of chemotaxonomic features necessitates the preparation of regulatory documentation for the introduction of this plant as a source of medicinal raw materials.</p></sec><sec><title>Aim</title><p>Aim. Development of a methodology for assessing the main group of biologically active substances and the quantitative determination of flavonoids in Alchemilla mollis herb.</p></sec><sec><title>Materials and methods</title><p>Materials and methods. As objects of study, we used Alchemilla mollis herb harvested from plants cultivated in the Perm Krai. The chromatographic parameters of raw material authenticity were determined by thin layer chromatography (TLC). To develop the parameters for the quantitative determination of flavonoids in Alchemilla mollis herb, a modification of the method proposed for Alchemilla herb was carried out.</p></sec><sec><title>Results and discussion</title><p>Results and discussion. During chromatographic study of Alchemilla mollis herb were identified cinaroside, rutin, and quercetin. Cynaroside was referred to the marker substances. Ethyl acetate : acetic acid (85 : 15) was chosen as the optimal chromatographic system. A modification and validation of the method for the quantitative determination of flavonoids in Alchemilla herb was carried out. The change of the extractant, particle size, time and frequency of extraction for sample preparation and the optimal use of cynaroside as a standard substance are substantiated. The optimal conditions for the reaction of complex formation with aluminum chloride are established.</p></sec><sec><title>Conclusion</title><p>Conclusion. To determine the authenticity of Alchemilla mollis herb, it was proposed to use the identification of cynaroside by TLC. The modified method for the quantitative determination of flavonoids in terms of cynaroside for the Alchemilla mollis herb, reproducible, correct and can be used for standardization. When testing the methodology on samples of raw materials harvested in the Perm region, a range of values for the content of flavonoids was 3.14–4.84 %, with an average level of variability.</p></sec></trans-abstract><kwd-group xml:lang="ru"><kwd>манжетка мягкая</kwd><kwd>Alchemilla mollis</kwd><kwd>тонкослойная хроматография (ТСХ)</kwd><kwd>спектрофтометрия</kwd><kwd>флавоноиды</kwd><kwd>цинарозид</kwd></kwd-group><kwd-group xml:lang="en"><kwd>Alchemilla mollis</kwd><kwd>thin layer chromatography (TLC)</kwd><kwd>spectrophotometry</kwd><kwd>flavonoids</kwd><kwd>cynaroside</kwd></kwd-group><funding-group><funding-statement xml:lang="ru">Исследование проведено при финансовой поддержке Пермского научно-образовательного центра «Рациональное недропользование», 2022 год.</funding-statement><funding-statement xml:lang="en">The study was carried out with the financial support of the Perm Scientific and Educational Center "Rational Subsoil Use", 2022.</funding-statement></funding-group></article-meta></front><back><ref-list><title>References</title><ref id="cit1"><label>1</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Юшкова Т. А., Зорина Е. В., Белоногова В. Д. Оценка антидиабетической активности экстракта травы Alchemilla vulgaris. Дневник казанской медицинской школы. 2017;III(XVII):49–53.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Yushkova T. A., Zorina E. V., Belonogova V. D. Evaluation of the antidiabetic activity of the extract of Alchemilla vulgaris herb. Dnevnik kazanskoy meditsinskoy shkoly. 2017;III(XVII):49–53. (In Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit2"><label>2</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Юшков В. В., Зорина Е. В., Юшкова Т. А. Оценка иммунотропной активности настоя травы манжетки. Российский иммунологический журнал. 2014;8(17)3:755–757.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Yushkov V. V., Zorina E. V., Yushkova T. A. Evaluation of the immunotropic activity of the infusion of the cuff herb. Russian journal of immunology. 2014;8(17)3:755–757. (In Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit3"><label>3</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Шилова И. В., Суслов Н. И., Самылина И. А., Баева В. М., Лазарева Н. Б., Мазин Е. В. Нейропротекторные свойства настоя манжетки обыкновенной. Химико-фармацевтический журнал. 2019;53(11):37–41. DOI: 10.30906/0023-1134-2019-53-11-37-41.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Shilova I. V., Suslov N. I., Mazin E. V., Samylina I. A., Baeva V. M., Lazareva N. B. Neuroprotective properties of common lady’s mantle infusion. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2020;53(11):1059–1062. (In Russ.) DOI: 10.30906/0023-1134-2019-53-11-37-41.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit4"><label>4</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Мазуркова Н. А., Проценко М. А., Филиппова Е. И., Кукушкина Т. А., Высочина Г. И., Лобанова И. Е., Мазурков О. Ю., Шишкина Л. Н., Агафонов А. П. Исследование противовирусной активности экспериментальных образцов препаратов, полученных из травы и корней Alchemilla vulgaris L. в отношении вирусов осповакцины и оспы мышей. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2019;8(4):9–15. DOI: 10.33380/2305-2066-2019-8-4-9-15</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Mazurkova N. A., Protsenko M. A., Filippova E. I., Kukushkina T. A., Vysochina G. I., Lobanova I. E., Mazurkov O. Yu., Shishkina L. N., Agafonov A. P. Investigation of the Antiviral Activity of Experimental Samples Obtained from the Grass and Roots of Alchemilla vulgaris L. Against Vaccinia Virus and Ectromelia Virus. Drug development &amp; registration. 2019;8(4):9–15. (In Russ.) DOI: 10.33380/2305-2066-2019-8-4-9-15.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit5"><label>5</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Boroja T., Mihailović V., Katanić J., Pan S. P., Nikles S., Imbimbo P., Monti D. M., Stanković N., Stanković M. S., Bauer R. The biological activities of roots and aerial parts of Alchemilla vulgaris L. South African Journal of Botany. 2018;116:175–184. DOI: 10.1016/j.sajb.2018.03.007</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Boroja T., Mihailović V., Katanić J., Pan S. P., Nikles S., Imbimbo P., Monti D. M., Stanković N., Stanković M. S., Bauer R. The biological activities of roots and aerial parts of Alchemilla vulgaris L. South African Journal of Botany. 2018;116:175–184. DOI: 10.1016/j.sajb.2018.03.007</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit6"><label>6</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Лобанова И. Е., Высочина Г. И., Мазуркова Н. А., Кукушкина Т. А., Филиппова Е. И. Виды рода Alchemilla L. (Rosaceae): химический состав, биологическая активность, использование в медицине (обзор). Химия растительного сырья. 2019;1:5–22. DOI: 10.14258/jcprm.2019014032.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Lobanova I. E., Vysochina G. I., Mazurkova N. A., Kukushkina T. A., Filippova T. I. Species of the genus Alchemilla l. (Rosaceae): chemical composition, biological activity and use in medicine (review). Chemistry of plant raw material. 2019;1:15–22. (In Russ.) DOI: 10.14258/jcprm.2019014032.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit7"><label>7</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Jurić T., Katanić Stanković J. S., Rosic G., Selakovic D., Joksimović J., Mišić D., Stanković V. D., Mihailović V. Protective effects of Alchemilla vulgaris L. extracts against cisplatin-induced toxicological alterations in rats. South African Journal of Botany. 2020;128:141–151. DOI: 10.1016/j.sajb.2019.09.010.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Jurić T., Katanić Stanković J. S., Rosic G., Selakovic D., Joksimović J., Mišić D., Stanković V. D., Mihailović V. Protective effects of Alchemilla vulgaris L. extracts against cisplatin-induced toxicological alterations in rats. South African Journal of Botany. 2020;128:141–151. DOI: 10.1016/j.sajb.2019.09.010.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit8"><label>8</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Hwang E., Ngo H., Seo S. A., Park B., Zhang M., Yi T. H. Protective effect of dietary Alchemilla mollis on UVB-irradiated premature skin aging through regulation of transcription factor NFATc1 and Nrf2/ARE pathways. Phytomedicine. 2018;39:125–136. DOI: 10.1016/j.phymed.2017.12.025.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Hwang E., Ngo H., Seo S. A., Park B., Zhang M., Yi T. H. Protective effect of dietary Alchemilla mollis on UVB-irradiated premature skin aging through regulation of transcription factor NFATc1 and Nrf2/ARE pathways. Phytomedicine. 2018;39:125–136. DOI: 10.1016/j.phymed.2017.12.025.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit9"><label>9</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Tasić-Kostov M., Arsić I., Pavlović D., Stojanović S., Najman S., Naumović S., Tadić V. Towards a modern approach to traditional use: in vitro and in vivo evaluation of Alchemilla vulgaris L. gel wound healing potential. Journal of ethnopharmacology. 2019;238:111789. DOI: 10.1016/j.jep.2019.03.016.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Tasić-Kostov M., Arsić I., Pavlović D., Stojanović S., Najman S., Naumović S., Tadić V. Towards a modern approach to traditional use: in vitro and in vivo evaluation of Alchemilla vulgaris L. gel wound healing potential. Journal of ethnopharmacology. 2019;238:111789. DOI: 10.1016/j.jep.2019.03.016.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit10"><label>10</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Dos Santos Szewczyk K., Pietrzak W., Klimek K., Grzywa-Celińska A., Celiński R., Gogacz M. LC-ESI-MS/MS Identification of Biologically Active Phenolics in Different Extracts of Alchemilla acutiloba Opiz. Molecules. 2022;27(3):621. DOI: 10.3390/molecules27030621.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Dos Santos Szewczyk K., Pietrzak W., Klimek K., Grzywa-Celińska A., Celiński R., Gogacz M. LC-ESI-MS/MS Identification of Biologically Active Phenolics in Different Extracts of Alchemilla acutiloba Opiz. Molecules. 2022;27(3):621. DOI: 10.3390/molecules27030621.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit11"><label>11</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Mandrone M., Coqueiro A., Poli F., Antognoni F., Choi Y. H. Identification of a Collagenase-Inhibiting Flavonoid from Alchemilla vulgaris Using NMR-Based Metabolomics. Planta medica. 2018;84(12–13):941–946. DOI: 10.1055/a-0630-2079.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Mandrone M., Coqueiro A., Poli F., Antognoni F., Choi Y. H. Identification of a Collagenase-Inhibiting Flavonoid from Alchemilla vulgaris Using NMR-Based Metabolomics. Planta medica. 2018;84(12–13):941–946. DOI: 10.1055/a-0630-2079.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit12"><label>12</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Зорина Е. В. Фармакогностическое изучение видов рода Alchemilla L. Пермского края. Дис. … канд. фарм. наук. Пермь. 2009. Доступно по: https://www.dissercat.com/content/farmakognosticheskoe-izuchenie-vidov-roda-alchemilla-l-permskogo-kraya Ссылка активна на 14.09.2022.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Zorina E. V. Pharmacognostic study of species of the genus Alchemilla L. Perm region. [Dissertation]. Perm. 2009. Available at: https://www.dissercat.com/content/farmakognosticheskoe-izuchenie-vidov-roda-alchemilla-l-permskogo-kraya Accessed: 14.09.2022. (In Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit13"><label>13</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Андреева В. Ю., Калинкина Г. И. Разработка методики количественного определения флавоноидов в манжетке обыкновенной Alchemilla vulgaris L. S. L. Химия растительного сырья. 2000;1:85–88.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Andreyeva V. Yu., Kalinkina G. I. Development of a method for the quantitative determination of flavonoids in Alchemilla vulgaris L. S. L. Chemistry of plant raw material. 2000;1:85–88. (In Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit14"><label>14</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Stanilova M., Gorgorov R., Trendafilova A., Nikolova M., Vitkova A. Influence of nutrient medium composition on in vitro growth, polyphenolic content and antioxidant activity of Alchemilla mollis. Natural Product Communications. 2012;7:1–6.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Stanilova M., Gorgorov R., Trendafilova A., Nikolova M., Vitkova A. Influence of nutrient medium composition on in vitro growth, polyphenolic content and antioxidant activity of Alchemilla mollis. Natural Product Communications. 2012;7:1–6.</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit15"><label>15</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Лесовая Ж. С., Писарев Д. И., Новиков О. О., Романова Т. А. Разработка методики количественного определения флавоноидов в траве манжетки обыкновенной Alchemilla vulgaris L. S. L. Актуальные проблемы медицины. 2010;22(93):145–149.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Lesovaya Zh. S., Pisarev D. I., Novikov O. O., Romanova T. A. Development of a method for the quantitative determination of flavonoids in the common herb Alchemilla vulgaris L. S. L. Challenges in modern medicine. 2010;22(93):145–149. (In Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit16"><label>16</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Зорина Е. В., Бояршинов В. Д. Первичная интродукция манжетки мягкой Alchemilla mollis. Вестник ПГФА. 2018;22:143–144.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Zorina E. V., Boyarshinov V. D. Primary introduction of Alchemilla mollis. Vestnik PGFA. 2018;22:143–144. (In Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit17"><label>17</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Бояршинов В. Д., Зорина Е. В. Сравнительный анализ химического состава травы культивированного вида манжетка мягкая (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) и дикорастущего манжетка обыкновенная (Alchemilla vulgaris L.s.I). Химия растительного сырья. 2022;1:115–122. DOI: 10.14258/jcprm.20220110291.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Boiarshinov V. D, Zorina E. V. Comparative analysis of the chemical composition of herb cultivated Alchemilla mollis and wild-growing Alchemilla vulgaris. Chemistry of plant raw material. 2022;1:115–122. DOI: 10.14258/jcprm.20220110291. (In Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref><ref id="cit18"><label>18</label><citation-alternatives><mixed-citation xml:lang="ru">Тринеева О. В. Разработка теоретических подходов к определению основных групп биологически активных веществ лекарственного растительного сырья методом ТСХ. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021;10(2):69–79. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-2-69-79.</mixed-citation><mixed-citation xml:lang="en">Trineeva O. V. Development of theoretical approaches to determination of the main groups of biologically active substances of medicinal plant raw materials by TLC method. Drug development &amp; registration. 2021;10(2):69–79. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-2-69-79. (In Russ.)</mixed-citation></citation-alternatives></ref></ref-list><fn-group><fn fn-type="conflict"><p>The authors declare that there are no conflicts of interest present.</p></fn></fn-group></back></article>
