pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2023-12-1-115-122pharmjournal-1442Research ArticleМЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВANALYTICAL METHODSРазработка методики хроматографического анализа вспомогательных веществ в липосомальной лекарственной форме фотосенсибилизатора тетра-3-фенилтио-фталоцианина гидроксиалюминияDevelopment of a Technique for Chromatographic Analysis of Excipients in a Liposomal Dosage Form of a Photosensitizer Tetra-3-phenylthio-phthalocyanine Hydroxyaluminiumhttps://orcid.org/0000-0003-0886-4578АнтоноваС. В.AntonovaS. V.

123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, д. 5

5, Zvenigorodskoe shosse, Moscow, 123022

antonovasvetlanavladimirovna@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0001-5523-171XКолячкинаС. В.KolyachkinaS. V.

123022, г. Москва, Звенигородское шоссе, д. 5

5, Zvenigorodskoe shosse, Moscow, 123022

https://orcid.org/0000-0002-0650-2023ЛанцоваА. В.LantsovaA. V.

115478, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24

24, Kashirskoe highway, Moscow, 115478

https://orcid.org/0000-0001-8003-8241НиколаеваЛ. Л.NikolaevaL. L.

115478, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24

24, Kashirskoe highway, Moscow, 115478

https://orcid.org/0000-0002-5592-5137СанароваЕ. В.SanarovaE. V.

115478, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24

24, Kashirskoe highway, Moscow, 115478

ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ВГНКИ)The Russian State Center for Animal Feed and Drug Standardization and Quality (VGNKI)ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н. Н. Блохина» Минздрава России (НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина)FSBI "National Medical Research Center of Oncology. N. N. Blokhin"202327022023121115122Copyright © Антонова С.В., Колячкина С.В., Ланцова А.В., Николаева Л.Л., Санарова Е.В., 20232023Антонова С.В., Колячкина С.В., Ланцова А.В., Николаева Л.Л., Санарова Е.В.Antonova S.V., Kolyachkina S.V., Lantsova A.V., Nikolaeva L.L., Sanarova E.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1442Введение

Введение. В лаборатории разработки лекарственных форм ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России разработана липосомальная лекарственная форма ФС тетра-3-фенилтио-фталоцианина гидроксиалюминия (ТФГА), для которой необходимо было разработать простую, точную и легко воспроизводимую методику количественного определения основного действующего вещества и вспомогательных веществ в составе лекарственного средства. В качестве такой методики была выбрана высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ).

Цель

Цель. Разработка хроматографических методик количественного определения вспомогательных веществ в липосомальной лекарственной форме ФС ТФГА и для определения подлинности.

Материалы и методы

Материалы и методы. Определение веществ проводили методом ВЭТСХ с последующей хроматоденситометрией. Для проведения анализа использовали субстанцию ТФГА (ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», Россия), плацебо лиофилизированной липосомальной формы без ТФГА в составе (ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России), яичный фосфатидилхолин (96 %, CAS № 97281-44-2, ЕPC, Lipoid GmbH, Германия), холестерин (≥99 %, CAS № C8667, Sigma-Aldrich, Япония), сахарозу (ч.д.а., ООО ТД «ХИММЕД», Россия) и различные органические растворители.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. После проведения серий собственных экспериментов была выбрана подвижная фаза для проведения ВЭТСХ-анализа: изопропанол : 25%-й водный аммиак (80 : 20 об/об), при этом время разделения составило 20–25 мин (l = 75 мм), t = 20 °С. Для визуализации пятен сахарозы, фосфатидилхолина и холестерина выбрали 5%-й раствор фосфорномолибденовой кислоты. Устойчивость стандартных образцов была подтверждена на серии предвалидационных исследований. Проведена валидация методики.

Заключение

Заключение. Для количественного определения сахарозы, фосфатидилхолина и холестерина в новой липосомальной лекарственной форме выбран метод ВЭТСХ с хроматоденситометрией, который позволяет идентифицировать сразу все три компонента в составе лекарственной формы. Проведена валидация методики.

Introduction

Introduction. The Laboratory of Drug Formulation Development at the N. N. National Medical Research Center of Oncology developed a liposomal dosage form of FS tetra-3-phenylthio-pthalocyanine hydroxyluminide (TPHA) for which a simple, accurate and easily reproducible method of quantitative determination of the main active substance and excipients in the drug product was needed. High-performance thin-layer chromatography (HPTLC) was chosen as such a technique.

Aim

Aim. The aim of this work was to develop chromatographic methods for the quantitative determination of excipients in a liposomal dosage form of a tetra-3-phenylthiophthalocyanine hydroxyaluminium (TPHA).

Materials and methods

Materials and methods. Determination of substances was carried out by the method of high-performance thin-layer chromatography (HPTLC) followed by TLC-densitometry. Substance TPHA 98 % (Federal State Unitary Enterprise "SSC "NIOPIK", Russia), placebo lyophilized liposomal form without TFHA in the composition (FSBI "National Medical Research Center of Oncology. N. N. Blokhin" of the Ministry of Health of Russia), egg phosphatidylcholine (96 %, CAS № 97281-44-2, EPC Lipoid, Germany), cholesterol (≥99 %, CAS № C8667, Sigma-Aldrich, Japan), sucrose analytical grade (CHIMMED, Russia) and various organic solvents.

Results and discussion

Results and discussion. The selected mobile phase for HPTLC analysis: isopropanol: ammonia 25 % aqueous 80 : 20, separation time was 20–25 min (l = 75mm), t = 20 °С. To visualize the spots of sucrose, phosphatidylcholine, and cholesterol, a 5 % solution of phosphomolybdic acid was chosen. The stability of the standard samples was confirmed on a series of prevalidation studies. Validation of the methodology was carried out.

Conclusion

Conclusion. For quantitative determination of sucrose, phosphatidylcholine and cholesterol in a new liposomal dosage form, the method of HPTLC with TLC-densitometry was chosen, which allows identifying all three components in the dosage form simultaneously. The method was validated.

методы анализавысокоэффективная тонкослойная хроматографиялипосомыфосфатидилхолинхолестеринmethods of analysishigh-performance thin-layer chromatographyliposomesphosphatidylcholinecholesterolReferencesПереводчикова Н. И., Горбунова В. А. Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний. М.: Практическая медицина; 2018. 688 c.Perevodchikova N. I., Gorbunova V. A. Guidelines for chemotherapy of tumor diseases. Moscow: Practical medicine; 2018. 688 p. (In Russ.)Meerovich G. A., Romanishkin I. D., Loschenov V. B., Akhlyustina E. V., Tiganova I. G., Tolordava E. R., Philipova N. I., Zhizhimova Y. S., Romanova Y. M., Gintsburg A. L., Lukyanets E. A., Makarova E. A., Yuzhakova O. A. Novel polycationic photosensitizers for antibacterial photodynamic therapy. Advances in Experimental Medicine and Biology. 2019;1282:1–19. DOI: 10.1007/5584_2019_431.Meerovich G. A., Romanishkin I. D., Loschenov V. B., Akhlyustina E. V., Tiganova I. G., Tolordava E. R., Philipova N. I., Zhizhimova Y. S., Romanova Y. M., Gintsburg A. L., Lukyanets E. A., Makarova E. A., Yuzhakova O. A. Novel polycationic photosensitizers for antibacterial photodynamic therapy. Advances in Experimental Medicine and Biology. 2019;1282:1–19. DOI: 10.1007/5584_2019_431.Meerovich I., Dash A. K., Nichols M. G. Low-intensity light-induced drug release from a dual delivery system comprising of a drug loaded liposome and a photosensitive conjugate. Journal of Drug Targeting. 2020;28(6):655–667. DOI: 10.1080/1061186X.2019.1710838.Meerovich I., Dash A. K., Nichols M. G. Low-intensity light-induced drug release from a dual delivery system comprising of a drug loaded liposome and a photosensitive conjugate. Journal of Drug Targeting. 2020;28(6):655–667. DOI: 10.1080/1061186X.2019.1710838.Ozog D. M., Rkein A. M., Fabi S. G., Gold M. H., Goldman M. P., Lowe N. J., Martin G. M., Munavalli G. S. Photodynamic Therapy: A Clinical Consensus Guide. Dermatologic Surgery. 2016;42(7):804–827. DOI: 10.1097/DSS.0000000000000800.Ozog D. M., Rkein A. M., Fabi S. G., Gold M. H., Goldman M. P., Lowe N. J., Martin G. M., Munavalli G. S. Photodynamic Therapy: A Clinical Consensus Guide. Dermatologic Surgery. 2016;42(7):804–827. DOI: 10.1097/DSS.0000000000000800.Sanarova E., Meerovich I., Lantsova A., Kotova E., Shprakh Z., Polozkova A., Orlova O., Borisova L., Smirnova Z., Oborotova N., Baryshnikov A., Meerovich G., Lukyanets E. Thiosens liposomal dosage form technology development and photodynamic efficiency assessment. Journal of Drug Delivery Science and Technology. 2014;24(4):315–319. DOI: 10.1016/S1773-2247(14)50068-8.Sanarova E., Meerovich I., Lantsova A., Kotova E., Shprakh Z., Polozkova A., Orlova O., Borisova L., Smirnova Z., Oborotova N., Baryshnikov A., Meerovich G., Lukyanets E. Thiosens liposomal dosage form technology development and photodynamic efficiency assessment. Journal of Drug Delivery Science and Technology. 2014;24(4):315–319. DOI: 10.1016/S1773-2247(14)50068-8.Lantsova A. V., Olefir Yu. V., Bunyatyan N. D., Sanarova E. V., Orlova O. L., Dmitrieva M. V., Polozkova A. P., Oborotova N. A., Ogai M. A., Khadzhieva Z. D., Nikolaeva L. L., Kompantsev D. V., Shevchenko A. M., Prokof’ev A. B. Validation of a Method for Assay of Excipients in Liposomal Medicinal Formulations of the Photosensitizer Lipophthalocyan. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2020;53(10):986–990. DOI: 10.1007/s11094-020-02110-4.Lantsova A. V., Olefir Yu. V., Bunyatyan N. D., Sanarova E. V., Orlova O. L., Dmitrieva M. V., Polozkova A. P., Oborotova N. A., Ogai M. A., Khadzhieva Z. D., Nikolaeva L. L., Kompantsev D. V., Shevchenko A. M., Prokof’ev A. B. Validation of a Method for Assay of Excipients in Liposomal Medicinal Formulations of the Photosensitizer Lipophthalocyan. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2020;53(10):986–990. DOI: 10.1007/s11094-020-02110-4.Тринеева О. В. Разработка теоретических подходов к определению основных групп биологически активных веществ лекарственного растительного сырья методом ТСХ. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021;10(2):69–79. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-2-69-79.Trineeva O. V. Development of Theoretical Approaches to Determination of the Main Groups of Biologically Active Substances of Medicinal Plant Raw Materials by TLC Method. Drug development & registration. 2021;10(2):69–79. (In Russ.) DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-2-69-79.Красиков В. Д. Основы планарной хроматографии. СПб.: Химиздат; 2005. 232 с.Krasikov V. D. Fundamentals of planar chromatography. St. Petersburg: Himizdat; 2005. 232 p. (In Russ.)Renger B., Vegh Z., Ferenczi-Fodor K. Validation of thin layer and high performance thin layerchromatographic methods. J. Chromatogr. A. 2011;1218:2712–2721. DOI: 10.1016/j.chroma.2011.01.059.Renger B., Vegh Z., Ferenczi-Fodor K. Validation of thin layer and high performance thin layerchromatographic methods. J. Chromatogr. A. 2011;1218:2712–2721. DOI: 10.1016/j.chroma.2011.01.059.Spangenberg B., Poole C. F., Weins C. Quantitative Thin-Layer Chromatography: A Practical Survey. Chromatographia. 2011;73:823.Spangenberg B., Poole C. F., Weins C. Quantitative Thin-Layer Chromatography: A Practical Survey. Chromatographia. 2011;73:823.Ebel S., Alert D., Schaefe U. Calibration in TLC/HPTLC using the Michaelis-Menten function. Chromatographia. 1984;18(1)23–27. DOI: 10.1007/BF02279459.Ebel S., Alert D., Schaefe U. Calibration in TLC/HPTLC using the Michaelis-Menten function. Chromatographia. 1984;18(1)23–27. DOI: 10.1007/BF02279459.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.