pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2023-12-3-29-40pharmjournal-1536Research ArticleПОИСК И РАЗРАБОТКА НОВЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВRESEARCH AND DEVELOPMENT OF NEW DRUG PRODUCTSСпособ получения тимохинона из жирного масла семян тмина черного (Nigella sativa L.)A Method for the Isolation of Thymoquinone from Black Caraway Seed Oil (Nigella sativa L.)https://orcid.org/0000-0002-4847-5924УэйлиА. К.WhaleyA. K.

197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 14, лит. А

14A, Prof. Popova str., Saint-Petersburg, 197022

https://orcid.org/0000-0002-5418-7849БурцеваЕ. В.BurtsevaY. V.

298500, Республика Крым, г. Алушта, ул. 15-го Апреля, д. 37;295007, Республика Крым, г. Симферополь, просп. Академика Вернадского, д. 4

37, April 15th str., Alushta, Republic of Crimea, 298500;4, Academician Vernadsky avenue, Simferopol, Republic of Crimea, 295007

https://orcid.org/0000-0003-0864-476XКулдыркаеваЕ. В.KuldyrkaevaE. V.

298500, Республика Крым, г. Алушта, ул. 15-го Апреля, д. 37

37, April 15th str., Alushta, Republic of Crimea, 298500

https://orcid.org/0000-0001-7167-4609НовосадА. С.NovosadA. S.

298500, Республика Крым, г. Алушта, ул. 15-го Апреля, д. 37

37, April 15th str., Alushta, Republic of Crimea, 298500

https://orcid.org/0000-0002-2127-2457БабакН. Л.BabakN. L.

298500, Республика Крым, г. Алушта, ул. 15-го Апреля, д. 37

37, April 15th str., Alushta, Republic of Crimea, 298500

https://orcid.org/0000-0002-9763-096XЖоховаЕ. В.ZhokhovaE. V.

197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 14, лит. А

14A, Prof. Popova str., Saint-Petersburg, 197022

https://orcid.org/0000-0003-4879-9336УэйлиА. О.WhaleyA. O.

197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 14, лит. А

14A, Prof. Popova str., Saint-Petersburg, 197022

https://orcid.org/0000-0002-9706-9850ГончаровМ. Ю.GoncharovM. Yu.

197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 14, лит. А

14A, Prof. Popova str., Saint-Petersburg, 197022

https://orcid.org/0000-0002-2942-1015ТернинкоИ. И.TerninkoI. I.

197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 14, лит. А

14A, Prof. Popova str., Saint-Petersburg, 197022

inna.terninko@pharminnotech.comhttps://orcid.org/0009-0009-4570-2739ЯковлевГ. П.YakovlevG. P.

197376, г. Санкт-Петербург, ул. Профессора Попова, 14, лит. А

14A, Prof. Popova str., Saint-Petersburg, 197022

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Санкт-Петербургский государственный химико-фармацевтический университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России)Saint-Petersburg State Chemical and Pharmaceutical UniversityАкционерное Общество «Алуштинский эфиромасличный совхоз-завод»; Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Крымский федеральный университет имени В. И. Вернадского» (КФУ им. В. И. Вернадского)JSC "Alushta essential oil state farm-plant"; V. I. Vernadsky Crimean Federal UniversityАкционерное Общество «Алуштинский эфиромасличный совхоз-завод»JSC "Alushta essential oil state farm-plant"2023280820231232940Copyright © Уэйли А.К., Бурцева Е.В., Кулдыркаева Е.В., Новосад А.С., Бабак Н.Л., Жохова Е.В., Уэйли А.О., Гончаров М.Ю., Тернинко И.И., Яковлев Г.П., 20232023Уэйли А.К., Бурцева Е.В., Кулдыркаева Е.В., Новосад А.С., Бабак Н.Л., Жохова Е.В., Уэйли А.О., Гончаров М.Ю., Тернинко И.И., Яковлев Г.П.Whaley A.K., Burtseva Y.V., Kuldyrkaeva E.V., Novosad A.S., Babak N.L., Zhokhova E.V., Whaley A.O., Goncharov M.Y., Terninko I.I., Yakovlev G.P.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1536Введение

Введение. Тимохинон (2-изопропил-5-метил-1,4-бензохинон) – кристаллическое вещество растительного происхождения, которое образуется в результате процесса окисления тимогидрохинона. Тимохинон – компонент эфирного масла семян тмина черного (Nigella sativa L.), для которого установлен значительный спектр фармакологической активности. Учитывая липофильность данного соединения и его способность накапливаться в маслах, целесообразно предложить способ выделения тимохинона из жирного масла семян тмина для оценки его избирательного накопления и возможности применения масла в качестве источника получения.

Цель

Цель. Разработать способ выделения индивидуального соединения – тимохинона – из масла семян тмина черного (Nigella sativa L.), доказать его структуру и определить степень чистоты полученного вещества.

Материалы и методы

Материалы и методы. Для подтверждения подлинности сырья проводили изучение морфолого-анатомических диагностических признаков. Количественную оценку содержания тимохинона в семенах тмина и изучение оптимальности процесса выделения проводили методом ВЭЖХ. Пробоподготовку проводили метанолом путем: 1) трехкратной экстракции на кипящей водяной бане; 2) сонификации; 3) настаивания. Структуру выделенного соединения подтверждали по спектральным характеристикам методом ИК-спектроскопии путем сравнения полученного ИК-спектра с данными базы NIST и одномерной ЯМР-спектроскопии.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. В результате проведенного морфолого-анатомического анализа была подтверждена подлинность семян N. sativa. Методом ВЭЖХ проанализированы полученные различными способами пробоподготовки извлечения из семян тмина черного. Отмечено, что способ получения извлечения не оказывает значительного влияния на выход тимохинона, содержание которого в семенах тмина черного составляет 0,25 ± 0,02 %, что достаточно для целей выделения. Результаты оценки различных способов выделения тимохинона из семян тмина черного – экстракция спиртом и н-гексаном из измельченных семян, жидкость-жидкостная экстракция из жирного масла, перегонка масла с водяным паром – показали, что оптимальным способом получения тимохинона является перегонка масла семян тмина черного с водяным паром [соотношение масло : вода (1 : 1)] на песчаной бане в течение 3 часов. Выход тимохинона из масла N. sativa при этом составляет 398 мг из 150 мл масла (0,26 %). Идентичность тимохинона доказана по спектральным характеристикам в сравнении с базой данных NIST.

Заключение

Заключение. Показана возможность выделения тимохинона из жирного масла семян Nigella sativa L. с хроматографической чистотой (метод ВЭЖХ) более 97 % и сопоставимостью спектральных характеристик, которые подтверждают идентичность полученного соединения. Предложенный экспрессный и экономичный способ выделения тимохинона методом перегонки с водяным паром обеспечивает выход целевого компонента 0,26 %. Данный способ может быть применен на производственных площадках предприятий по заготовке и переработке семян тмина черного для получения природного тимохинона.

Introduction

Introduction. Thymoquinone (2-Isopropyl-5-methyl-1,4-benzoquinone) is an organic compound of plant origin, which is formed as a result of the oxidation of thymohydroquinone. Thymoquinone is a component of the essential oil of black caraway seeds (Nigella sativa L.) and is known to possess a significant spectrum of pharmacological activity. Due to the lipophilicity of thymoquinone and its ability to accumulate in oils, we proposed a method to isolate thymoquinone from the fatty oil of caraway seeds in order to assess its selective accumulation and the possibility of using the oil as a source for the compounds production.

Aim

Aim. Method development for the isolation of thymoquinone as an individual compounds from black caraway (Nigella sativa L.) seed oil, to confirm its structure and determine the degree of purity of the obtained substance.

Materials and methods

Materials and methods. To confirm the authenticity of the raw materials, analysis of key morphological and anatomical diagnostic features was performed. Quantitative assessment of thymoquinone content in black caraway seeds and control of the isolation process were performed though HPLC analysis. Sample preparation was carried out with methanol by: 1) triple extraction on a boiling water bath; 2) sonification; 3) maceration. The structure of the isolated compound was confirmed through the analysis spectral characteristics using IR spectroscopy by comparing the obtained IR spectrum with the data from the NIST database and one-dimensional NMR spectroscopy.

Results and discussion

Results and discussion. As a result of the morphological and anatomical analysis, the authenticity of N. sativa seeds was confirmed. Extracts from black caraway seeds obtained by various sample preparation methods were analyzed with HPLC. As a result, it was noted that the method of obtaining the extract does not significantly affect the yield of thymoquinone, the content of which in black caraway seeds is 0.25 ± 0.02 %, which is sufficient for isolation purposes. Through the evaluation of various isolation methods for thymoquinone from black caraway seeds – maceration with alcohol and n-hexane from crushed seeds, liquid-liquid extraction from fatty oil, steam distillation of oil – showed that the best way to obtain thymoquinone is through the distillation of black caraway seed oil with water steam [oil : water ratio (1 : 1)] in a sand bath for 3 hours. The yield of thymoquinone from N. sativa oil is 398 mg from 150 ml of oil (0.26 %). The structure of thymoquinone was confirmed by spectral characteristics in comparison with the NIST database and literature data.

Conclusion

Conclusion. The possibility of isolating thymoquinone from Nigella sativa L. seed fatty oil with a chromatographic purity (HPLC) of more than 97 % along with the comparison of the isolated compounds spectral characteristics with literature data, which confirm the identity of the obtained compound, was shown. The proposed express and efficient method for the isolation of thymoquinone through steam distillation provides a yield of the target component of 0.26 %. This method can be applied at roduction sites that harvestand process of black caraway seeds to obtain natural thymoquinone.

Nigella sativa L.тимохинонвыделение индивидуального соединенияперегонка с водяным паромспектральные методы анализажирное маслоNigella sativa L.thymoquinoneindividual compound isolationsteam distillationspectral methods of analysisfatty oilРезультаты работы получены с использованием оборудования ЦКП «Аналитический центр ФГБОУ ВО СПХФУ Минздрава России» в рамках соглашения № 075-15-2021-685 от 26 июля 2021 года при финансовой поддержке Минобрнауки России.The results of the work were obtained using equipment the Сore Shared Research Facilities "Analytical Center" of the Saint Petersburg State Chemical and Pharmaceutical University, with financial support from the Ministry of Science and Higher Education of the Russian Federation (Agreement No. 075-15-2021-685; dated 26 July 2021 on the provision of the Federal budget grants).ReferencesПонкратова А. О., Уэйли А. К., Орлова А. А., Смирнов С. Н., Серебряков Е. Б., Лужанин В. Г. Выделение и установление структуры трех димерных проантоцианидинов типа А из надземной части Empetrum nigrum L. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021;10(2):80–86. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-2-80-86.Ponkratova A. O., Whaley A. K., Orlova A. A., Smirnov S. N., Serebryakov E. B., Luzhanin V. G. Isolation and structure elucidation of three dimeric A-type proanthocyanidins from Empetrum nigrum L. Drug development & registration. 2021;10(2):80–86. (In Russ.) DOI:10.33380/2305-2066-2021-10-2-80-86.Лужанин В. Г., Уэйли А. К., Понкратова А. О., Гришукова Е. А., Сулоев И. С., Смирнов С. Н., Серебряков Е. Б. Выделение индивидуальных соединений из надземной части стальника полевого (Ononis arvensis L.) и золотарника канадского (Solidago canadensis L.). Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021;10(1):83–89. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-1-83-89.Luzhanin V. G., Whaley A. K., Ponkratova A. O., Grishukova E. A., Suloev I. S., Smirnov S. N., Serebryakov E. B. Isolation of individual compounds from the terrestrial parts of Ononis arvensis L. and Solidago canadensis L. Drug development & registration. 2021;10(1):83–89. (In Russ.) DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-1-83-89.Taborsky J., Kunt M., Kloucek P., Lachman J., Zeleny V., Kokoska L. Identification of potential sources of thymoquinone and related compounds in Asteraceae, Cupressaceae, Lamiaceae, and Ranunculaceae families. Open Chemistry. 2012;10(6):1899–1906. DOI: 10.2478/s11532-012-0114-2.Taborsky J., Kunt M., Kloucek P., Lachman J., Zeleny V., Kokoska L. Identification of potential sources of thymoquinone and related compounds in Asteraceae, Cupressaceae, Lamiaceae, and Ranunculaceae families. Open Chemistry. 2012;10(6):1899–1906. DOI: 10.2478/s11532-012-0114-2.Paarakh P. M. Nigella sativa Linn.– A comprehensive review. Indian Journal of Natural Products and Resources. 2010;1:409–429.Paarakh P. M. Nigella sativa Linn.– A comprehensive review. Indian Journal of Natural Products and Resources. 2010;1:409–429.Taka E., Mendonca P., Mazzio E. A., Reed S. D., Reams R., Soliman K. F. Molecular targets underlying the anti-inflammatory effects of thymoquinone in LPS activated BV-2 Cells. FASEB J. 2018;32(1S):40–42. DOI: 10.1096/fasebj.2018.32.1.Taka E., Mendonca P., Mazzio E. A., Reed S. D., Reams R., Soliman K. F. Molecular targets underlying the anti-inflammatory effects of thymoquinone in LPS activated BV-2 Cells. FASEB J. 2018;32(1S):40–42. DOI: 10.1096/fasebj.2018.32.1.Armutcu F., Akyol S., Akyol O. The interaction of glutathione and thymoquinone and their antioxidant properties. Electronic Journal of General Medicine. 2018;15(4):em59. DOI: 10.29333/ejgm/89493.Armutcu F., Akyol S., Akyol O. The interaction of glutathione and thymoquinone and their antioxidant properties. Electronic Journal of General Medicine. 2018;15(4):em59. DOI: 10.29333/ejgm/89493.Kanter M., Coskun O., Uysal H. The antioxidative and antihistaminic effect of Nigella sativa and its major constituent, thymoquinone on ethanol-induced gastric mucosal damage. Archives of Toxicology. 2006;80(4):217–224. DOI: 10.1007/s00204-005-0037-1.Kanter M., Coskun O., Uysal H. The antioxidative and antihistaminic effect of Nigella sativa and its major constituent, thymoquinone on ethanol-induced gastric mucosal damage. Archives of Toxicology. 2006;80(4):217–224. DOI: 10.1007/s00204-005-0037-1.Majdalawieh A. F., Fayyad M. W., Nasrallah G. K. Anti-cancer properties and mechanisms of action of thymoquinone, the major active ingredient of Nigella sativa. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 2017;57(18):3911–3928. DOI: 10.1080/10408398.2016.1277971.Majdalawieh A. F., Fayyad M. W., Nasrallah G. K. Anti-cancer properties and mechanisms of action of thymoquinone, the major active ingredient of Nigella sativa. Critical Reviews in Food Science and Nutrition. 2017;57(18):3911–3928. DOI: 10.1080/10408398.2016.1277971.Amin B., Hosseinzadeh H. Black cumin (Nigella sativa) and its active constituent, thymoquinone: an overview on the analgesic and anti-inflammatory effects. Planta Medica. 2015;82(01/02):8–16. DOI: 10.1055/s-0035-1557838.Amin B., Hosseinzadeh H. Black cumin (Nigella sativa) and its active constituent, thymoquinone: an overview on the analgesic and anti-inflammatory effects. Planta Medica. 2015;82(01/02):8–16. DOI: 10.1055/s-0035-1557838.Noorbakhsh M.-F., Hayati F., Samarghandian S., Shaterzadeh-Yazdi H., Farkhondeh T. An overview of hepatoprotective effects of thymoquinone. Recent Patents on Food, Nutrition & Agriculture. 2018;9(1):14–22. DOI: 10.2174/2212798410666180221105503.Noorbakhsh M.-F., Hayati F., Samarghandian S., Shaterzadeh-Yazdi H., Farkhondeh T. An overview of hepatoprotective effects of thymoquinone. Recent Patents on Food, Nutrition & Agriculture. 2018;9(1):14–22. DOI: 10.2174/2212798410666180221105503.Rasheed Z., Altorbag A. A., Al-Bossier A. S., Alnasser N. A., Alkharraz O. S., Altuwayjiri K. M., Alobaid A. S., Alsaif A. K., Alanazi Y. H., Alghidani B. A. Alduayji M. A., Bu Mozah A. A., Alsuhaibani S. A. Protective potential of thymoquinone against peroxynitrite induced modifications in histone H2A: in vitro studies. International Journal of Biological Macromolecules. 2018;112:169–174. DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2018.01.157.Rasheed Z., Altorbag A. A., Al-Bossier A. S., Alnasser N. A., Alkharraz O. S., Altuwayjiri K. M., Alobaid A. S., Alsaif A. K., Alanazi Y. H., Alghidani B. A. Alduayji M. A., Bu Mozah A. A., Alsuhaibani S. A. Protective potential of thymoquinone against peroxynitrite induced modifications in histone H2A: in vitro studies. International Journal of Biological Macromolecules. 2018;112:169–174. DOI: 10.1016/j.ijbiomac.2018.01.157.Habib N., Choudhry S. HPLC Quantification of Thymoquinone Extracted from Nigella sativa L. (Ranunculaceae) Seeds and Antibacterial Activity of Its Extracts against Bacillus Species. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2021:6645680. DOI: 10.1155/2021/6645680.Habib N., Choudhry S. HPLC Quantification of Thymoquinone Extracted from Nigella sativa L. (Ranunculaceae) Seeds and Antibacterial Activity of Its Extracts against Bacillus Species. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2021:6645680. DOI: 10.1155/2021/6645680.Scott M. L., Adams M. F., Karchesy J. J., McAllister J. C. Insecticidal Activity of Thymoquinone and Related Compounds Against Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) Journal of Medical Entomology. 2017;54(3):785–787. DOI: 10.1093/jme/tjw181.Scott M. L., Adams M. F., Karchesy J. J., McAllister J. C. Insecticidal Activity of Thymoquinone and Related Compounds Against Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) Journal of Medical Entomology. 2017;54(3):785–787. DOI: 10.1093/jme/tjw181.Bouhlel A., Mosbah I. B., Abdallah N. H., Ribault C., Viel R., Mannaï S., Corlu A., Abdennebi H. B. Thymoquinone prevents endoplasmic reticulum stress and mitochondria-induced apoptosis in a rat model of partial hepatic warm ischemia reperfusion. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2017;94:964–973. DOI: 10.1016/j.biopha.2017.08.018.Bouhlel A., Mosbah I. B., Abdallah N. H., Ribault C., Viel R., Mannaï S., Corlu A., Abdennebi H. B. Thymoquinone prevents endoplasmic reticulum stress and mitochondria-induced apoptosis in a rat model of partial hepatic warm ischemia reperfusion. Biomedicine & Pharmacotherapy. 2017;94:964–973. DOI: 10.1016/j.biopha.2017.08.018.Mahmoudvand H., Tavakoli R., Sharififar F., Minaie K., Ezatpour B., Jahanbakhsh S., Sharifi I. Leishmanicidal and cytotoxic activities of Nigella sativa and its active principle, thymoquinone. Pharmaceutical Biology. 2015;53(7):1052–1057. DOI: 10.3109/13880209.2014.957784.Mahmoudvand H., Tavakoli R., Sharififar F., Minaie K., Ezatpour B., Jahanbakhsh S., Sharifi I. Leishmanicidal and cytotoxic activities of Nigella sativa and its active principle, thymoquinone. Pharmaceutical Biology. 2015;53(7):1052–1057. DOI: 10.3109/13880209.2014.957784.Akyuz M., Taysi S., Baysal E., Demir E., Alkis H., Akan M., Binici H., Karatas Z. A. Radioprotective effect of thymoquinone on salivary gland of rats exposed to total cranial irradiation. Head & Neck. 2017;39(10):2027–2035. DOI: 10.1002/hed.24861.Akyuz M., Taysi S., Baysal E., Demir E., Alkis H., Akan M., Binici H., Karatas Z. A. Radioprotective effect of thymoquinone on salivary gland of rats exposed to total cranial irradiation. Head & Neck. 2017;39(10):2027–2035. DOI: 10.1002/hed.24861.Cascella M., Bimonte S., Barbieri A., Del Vecchio V., Muzio M. R., Vitale A., Benincasa G., Ferriello A. B., Azzariti A., Arra C., Cuomo A. Dissecting the potential roles of Nigella sativa and its constituent thymoquinone on the prevention and on the progression of Alzheimer’s disease. Frontiers in Aging Neuroscience. 2018;10. DOI: 10.3389/fnagi.2018.00016.Cascella M., Bimonte S., Barbieri A., Del Vecchio V., Muzio M. R., Vitale A., Benincasa G., Ferriello A. B., Azzariti A., Arra C., Cuomo A. Dissecting the potential roles of Nigella sativa and its constituent thymoquinone on the prevention and on the progression of Alzheimer’s disease. Frontiers in Aging Neuroscience. 2018;10. DOI: 10.3389/fnagi.2018.00016.Butt A. S., Nisar N., Ghani N., Altaf I., Aziz Mughal T. Isolation of Thymoquinone from Nigella sativa L. and Thymus vulgaris L., and Its Anti-Proliferative Effect on HeLa Cancer Cell Lines. Tropical Journal of Pharmaceutical Research. 2019;18(1):37. DOI: 10.4314/tjpr.v18i1.6.Butt A. S., Nisar N., Ghani N., Altaf I., Aziz Mughal T. Isolation of Thymoquinone from Nigella sativa L. and Thymus vulgaris L., and Its Anti-Proliferative Effect on HeLa Cancer Cell Lines. Tropical Journal of Pharmaceutical Research. 2019;18(1):37. DOI: 10.4314/tjpr.v18i1.6.Singh S. K., Mishra M. K., Lillard J. W., Singh R. Thymoquinone enhanced the tumoricidal activity of NK Cells against Lung Cancer. The Journal of Immunology. 2018;200(1):124.5. DOI: 10.4049/jimmunol.200.Supp.124.5.Singh S. K., Mishra M. K., Lillard J. W., Singh R. Thymoquinone enhanced the tumoricidal activity of NK Cells against Lung Cancer. The Journal of Immunology. 2018;200(1):124.5. DOI: 10.4049/jimmunol.200.Supp.124.5.Barkat M. A., Harshita, Ahmad J., Khan M. A., Beg S., Ahmad F. J. Insights into the targeting potential of thymoquinone for therapeutic intervention against triple-negative breast cancer. Current Drug Targets. 2018;19(1):70–80. DOI: 10.2174/1389450118666170612095959.Barkat M. A., Harshita, Ahmad J., Khan M. A., Beg S., Ahmad F. J. Insights into the targeting potential of thymoquinone for therapeutic intervention against triple-negative breast cancer. Current Drug Targets. 2018;19(1):70–80. DOI: 10.2174/1389450118666170612095959.Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. В 4 томах. Москва: Министерство здравоохранения Российской Федерации; 2018.State Pharmacopoeia of the Russian Federation. XIV edition. In 4 volumes. Moscow: Ministry of Health of the Russian Federation; 2018. (In Russ.)Ahmad A., Mishra R. K., Vyawahare A., Kumar A., Rehman M. U., Qamar W., Khan A. Q., Khan R. Thymoquinone (2-Isopropyl-5-methyl-1, 4-benzoquinone) as a chemopreventive/anticancer agent: Chemistry and biological effects. Saudi Pharmaceutical Journal. 2019;27(8):1113–1126. DOI: 10.1016/j.jsps.2019.09.008.Ahmad A., Mishra R. K., Vyawahare A., Kumar A., Rehman M. U., Qamar W., Khan A. Q., Khan R. Thymoquinone (2-Isopropyl-5-methyl-1, 4-benzoquinone) as a chemopreventive/anticancer agent: Chemistry and biological effects. Saudi Pharmaceutical Journal. 2019;27(8):1113–1126. DOI: 10.1016/j.jsps.2019.09.008.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.