pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2023-12-3-104-110pharmjournal-1548Research ArticleМЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВANALYTICAL METHODSОценка подлинности клеточных линий с помощью RTCA-профилирования для экспертизы качества препаратов на основе жизнеспособных клеток человекаEvaluation of Cell Line Identity Using RTCA Profiling for Quality Control of Products Containing Viable Human Cellshttps://orcid.org/0000-0002-6008-0554ВодяковаМ. А.VodyakovaM. A.

127051, г. Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2

8/2, Petrovsky Boulevard, Moscow, 127051

vod-marina@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8377-9205РачинскаяО. А.RachinskayaO. A.

127051, г. Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2

8/2, Petrovsky Boulevard, Moscow, 127051

https://orcid.org/0000-0002-2355-0879ПокровскийН. С.PokrovskyN. S.

127051, г. Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2

8/2, Petrovsky Boulevard, Moscow, 127051

https://orcid.org/0000-0001-9026-0508СеменоваИ. С.SemenovaI. S.

127051, г. Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2

8/2, Petrovsky Boulevard, Moscow, 127051

https://orcid.org/0000-0002-9585-3545МельниковаЕ. В.MelnikovaE. V.

127051, г. Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2

8/2, Petrovsky Boulevard, Moscow, 127051

https://orcid.org/0000-0003-4891-973XМеркуловВ. А.MerkulovV. A.

127051, г. Москва, Петровский бульвар, д. 8, стр. 2

8/2, Petrovsky Boulevard, Moscow, 127051

Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России)Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products202330082023123104110Copyright © Водякова М.А., Рачинская О.А., Покровский Н.С., Семенова И.С., Мельникова Е.В., Меркулов В.А., 20232023Водякова М.А., Рачинская О.А., Покровский Н.С., Семенова И.С., Мельникова Е.В., Меркулов В.А.Vodyakova M.A., Rachinskaya O.A., Pokrovsky N.S., Semenova I.S., Melnikova E.V., Merkulov V.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1548Введение

Введение. Одним из важных показателей качества препаратов на основе жизнеспособных клеток человека, определяемых в рамках экспертизы качества, является подлинность. Характеристика подлинности включает в том числе определение пролиферативной активности клеточной линии, входящей в состав таких препаратов. Для оценки пролиферативной активности клеток может быть использован прибор xCELLigence RTCA DP (Agilent Technologies, США), который представляет собой клеточный анализатор в режиме реального времени (RTCA), позволяющий проводить непрерывный анализ in vitro без использования меток.

Цель

Цель. Показать воспроизводимость методики RTCA-профилирования в качестве метода первичной оценки подлинности клеточных линий.

Материалы и методы

Материалы и методы. Получали RTCA-профили клеточных линий дермальных фибробластов DF-2 и мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани МСК ЖТ_D122 с помощью клеточного анализатора xCELLigence RTCA DP (Agilent Technologies, США). Эксперимент проводили после размораживания трех разных флаконов одной партии каждой клеточной линии в трех повторах.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Получены RTCA-профили для клеточных линий DF-2 и МСК ЖТ_D122. Статистическая обработка результатов анализа проведена при использовании критерия Фридмана, доверительных интервалов и параметров кривых роста, полученных с помощью прибора (время удвоения, скорость пролиферации и максимальный клеточный индекс). На основании полученных данных было показано отсутствие различий RTCA-профилей для каждой клеточной линии при параллельном взятии материала из трех флаконов.

Заключение

Заключение. Обоснована и показана воспроизводимость методики RTCA-профилирования для оценки применимости клеточного анализатора при подтверждении подлинности клеточных линий.

Introduction

Introduction. Identity is an important quality attribute of products containing viable human cells, to be tested during the quality control. The verification of identity includes, among other things, determination of the proliferative activity of the cell lines included in such products. The Agilent xCELLigence real-time cell analysis (RTCA) DP (dual purpose) instrument (USA) for continuous, label-free in vitro analysis can be used to assess the cell proliferative activity.

Aim

Aim. Demonstration of reproducibility of the RTCA profiling technique as a test method for primary verification of the cell line identity.

Materials and methods

Materials and methods. An xCELLigence RTCA DP cell analyzer (Agilent Technologies, USA) was used to obtain RTCA profiles of dermal fibroblast (DF-2) and adipose tissue-derived mesenchymal stromal (MSC AT_D122) cell lines. The experiment was carried out in triplicate after thawing three different vials from the same batch for each cell line.

Results and discussion

Results and discussion. The RTCA profiles were obtained for DF-2 and MSC AT_D122 cell lines. The statistical processing of the results was carried out using the Friedman test, confidence intervals, and growth curve parameters obtained by the instrument (doubling time, proliferation rate, and maximum cell index). The obtained data demonstrate no differences in the RTCA profiles after parallel sampling of the contents from three vials for each cell line.

Conclusion

Conclusion. The RTCA profiling reproducibility was confirmed in order to assess the cell analyzer’s applicability to cell line identity.

клеточная линияподлинностьэкспертиза качествабиомедицинский клеточный продуктвысокотехнологический лекарственный препаратcell lineidentityquality controlbiomedical cell producthigh-tech drugРабота выполнена в рамках государственного задания ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России № 056-00001-22-00 на проведение прикладных научных исследований (номер государственного учета НИР 121021800098-4).The study reported in this publication was carried out as part of a publicly funded research project No. 056-00001-22-00 and was supported by the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products (R&D public accounting No. 121021800098-4).ReferencesXi B., Yu N., Wang X., Xu X., Abassi Y. A. The application of cell-based label-free technology in drug discovery. Biotechnology Journal: Healthcare Nutrition Technology. 2008;3(4):484–495. DOI: 10.1002/biot.200800020.Xi B., Yu N., Wang X., Xu X., Abassi Y. A. The application of cell-based label-free technology in drug discovery. Biotechnology Journal: Healthcare Nutrition Technology. 2008;3(4):484–495. DOI: 10.1002/biot.200800020.Langenbach K. ATCC technology assessment of Roche xCELLigence System: an electronic impedance-based cell sensing unit. BioTechniques. 2010;49(6):905–906. DOI: 10.2144/000113575.Langenbach K. ATCC technology assessment of Roche xCELLigence System: an electronic impedance-based cell sensing unit. BioTechniques. 2010;49(6):905–906. DOI: 10.2144/000113575.Hillger J. M., Lieuw W. L., Heitman L. H., IJzerman A. P. Label-free technology and patient cells: from early drug development to precision medicine. Drug discovery today. 2017;22(12):1808–1815. DOI: 10.1016/j.drudis.2017.07.015.Hillger J. M., Lieuw W. L., Heitman L. H., IJzerman A. P. Label-free technology and patient cells: from early drug development to precision medicine. Drug discovery today. 2017;22(12):1808–1815. DOI: 10.1016/j.drudis.2017.07.015.Irelan J. T., Wu M.-J., Morgan J., Ke N., Xi B., Wang X., Xu X., Abassi Y. A. Rapid and quantitative assessment of cell quality, identity, and functionality for cell-based assays using real-time cellular analysis. Journal of biomolecular screening. 2011;16(3):313–322. DOI: 10.1177/1087057110397359.Irelan J. T., Wu M.-J., Morgan J., Ke N., Xi B., Wang X., Xu X., Abassi Y. A. Rapid and quantitative assessment of cell quality, identity, and functionality for cell-based assays using real-time cellular analysis. Journal of biomolecular screening. 2011;16(3):313–322. DOI: 10.1177/1087057110397359.Guimet D., Jin C., Abassi Y. A. Real-Time Quality Control and Functional Assessment of Mesenchymal Stem Cells for Cellular Therapies. Santa Clara: Agilent Technologies, Inc.; 2019. Available at: https://www.agilent.com/cs/library/applications/application-mesenchymal-stem-cells-xcelligence-5994-1067en-agilent.pdf.Guimet D., Jin C., Abassi Y. A. Real-Time Quality Control and Functional Assessment of Mesenchymal Stem Cells for Cellular Therapies. Santa Clara: Agilent Technologies, Inc.; 2019. Available at: https://www.agilent.com/cs/library/applications/application-mesenchymal-stem-cells-xcelligence-5994-1067en-agilent.pdf.Петручук Е. М., Шалунова Н. В., Олефир Ю. В., Борисевич И. В., Перекрест В. В., Шевцов В. А., Рукавишников А. В., Хантимирова Л. М. Культуры клеток в заместительной терапии. БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. 2017;17(4):197–206.Petruchuk E. M., Shalunova N. V., Olefir Yu. V., Borisevich I. V., Perekrest V. V., Shevtsov V. A., Rukavishnikov A. V., Khantimirova L. M. Cell cultures in replacement therapy. BIOpreparations. Prevention, Diagnosis, Treatment. 2017;17(4):197–206. (In Russ.)Мельникова Е. В., Меркулова О. В., Борисевич И. В., Меркулов В. А. От клеточных технологий к биомедицинским клеточным продуктам: опыт использования препаратов на основе жизнеспособных клеток человека в Российской Федерации. Цитология. 2018;60(4):231–240. DOI: 10.31116/tsitol.2018.04.01.Melnikova E. V., Merkulova O. V., Borisevich I. V., Merkulov V. A. From cellular technologies to biomedical cell products: practice in the use of drugs based on viable human cells in the russian federation. Citologija. 2018;60(4):231–240. (In Russ.) DOI: 10.31116/tsitol.2018.04.01.Крылова Т. А., Мусорина А. С., Зенин В. В., Кольцова А. М., Кропачева И. В., Турилова В. И., Яковлева Т. К., Полянская Г. Г. Получение и характеристика неиммортализованных клеточных линий дермальных фибробластов человека, выделенных из кожи век взрослых доноров разного возраста. Цитология. 2016;58(11):850–864.Krylova T. A., Musorina A. S., Zenin V. V., Koltsova A. M., Kropacheva I. V., Turilova V. I., Yakovleva T. K., Poljanskaya G. G. Derivation and characteristic of a non-immortalized cell lines of human dermal fibroblasts, generated from skin of the eyelids of adult donors of different age. Citologija. 2016;58(11):850–864. (In Russ.)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.