pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»pharmjournal-175Research ArticleЭФФЕКТИВНОСТЬ И БЕЗОПАСНОСТЬ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВDRUG PRODUCTS EFFICACY AND SAFETYРАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДИКИ СОВМЕСТНОГО КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУБСТРАТОВ - МАРКЁРОВ ОСНОВНЫХ ИЗОФЕРМЕНТОВ ЦИТОХРОМА P450 И ИХ МЕТАБОЛИТОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВЭЖХ-МС/МСDEVELOPMENT AND VALIDATION OF SIMULTANEOUS ASSAY OF SUBSTRATES-MARKERS OF MAIN CYTOCHROME P450 ISOFORMS AND THEIR METABOLITES USING HPLC-MS/MSЕгоренковЕ. А.EgorenkovE. A.egorenkov.eugene@gmail.comСмирновВ. В.SmirnovV. V.noemail@neicon.ruФГБУ «Государственный научный центр «Институт иммунологии» Федерального медико-биологического агентства РоссииI.M. Sechenov First Moscow State Medical University; National Research Center Institute of Immunology Federal Medical Biological Agency of Russia20160901201904198202Copyright © Егоренков Е.А., Смирнов В.В., 20192019Егоренков Е.А., Смирнов В.В.Egorenkov E.A., Smirnov V.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/175

Разработана методика совместного количественного определения субстратов - маркёров основных изоферментов цитохрома P450 и их метаболитов в моче методом ВЭЖХ-МС/МС с целью определения активности следующих изоферментов: кофеин/параксантин для CYP1A2, лозартан/E-3174 для CYP2C9, кортизол/6-β-гидроксикортизол для CYP3A4 и пинолин/6-гидрокси-1,2,3,4-тетрагидро-β-карболин для CYP2D6. Карбамазепин использовался как внутренний стандарт. В качестве биообъекта использовалась моча, пробоподготовка образцов проводилась путем экстракции смесью этилацетат : гексан : диэтиловый эфир (50:35:15) с последующей корректировкой pH образца мочи боратным буфером (pH=9,4) и экстракцией смесью этилацетат : гексан (50:50). Методика успешно прошла процедуру валидации и может быть использована для определения активности изоферментов цитохрома P450 в клинической практике.

Simultaneous quantification method of assaying main CYP isoforms substrates-markers and their metabolites in urine using HPLC-MS/MS was developed to determine activity of following isoforms: caffeine/paraxanthine for CYP1A2, losartane/E-3174 for CYP2C9, cortisole/6-β-hydroxycortisole for CYP3A4 and pinoline/6-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydro-β-carboline for CYP2D6. Carbamazepine was used as internal standart. Urine was used as biological object, samples were prepared by extraction with ethyl acetate : hexane : diethyl ether (50:35:15) mixture continued with pH correction of urine sample using borate buffer (pH=9,4) and following extraction with ethyl acetate : hexane mixture (50:50). Method was successfully validated and can be put in clinical practice for CYP isoforms activity determination.

цитохром P450CYP1A2CYP2C9CYP3A4CYP2D6коктейльный методфенотипированиекофеинлозартанкортизолпинолинCytochrome P450CYP1A2CYP2C9CYP3A4CYP2D6«cocktail» methodphenotypingcaffeinelosartanecortisolepinolineReferencesF.P. Guengerich. Cytochrome p450 and chemical toxicology // Chemical Research in Toxicology. 2008. V. 21(1). P. 70-83.F.P. Guengerich. Cytochrome p450 and chemical toxicology // Chemical Research in Toxicology. 2008. V. 21(1). P. 70-83.В.Г. Кукес. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты. - М.: Реафарм, 2004. 144 с.В.Г. Кукес. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты. - М.: Реафарм, 2004. 144 с.P.M. De Kesel et al. Alternative Sampling Strategies for Cytochrome P450 Phenotyping // Clinical Pharmacokinetics. 2016. V. 55(2). P. 169-84.P.M. De Kesel et al. Alternative Sampling Strategies for Cytochrome P450 Phenotyping // Clinical Pharmacokinetics. 2016. V. 55(2). P. 169-84.S. Ghassabian et al. Simultaneous in vivo phenotyping of CYP enzymes // Methods in Molecular Biology. 2013. V. 987. P. 261-267.S. Ghassabian et al. Simultaneous in vivo phenotyping of CYP enzymes // Methods in Molecular Biology. 2013. V. 987. P. 261-267.Е.А. Егоренков, В.В. Смирнов. «Коктейльные» методы определения метаболической активности изоферментов цитохрома p-450 in vivo с помощью биоаналитических методик: обзор существующих методик и перспектива их использования в клинической практике. // Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016. № 1(14). С. 184-188.Е.А. Егоренков, В.В. Смирнов. «Коктейльные» методы определения метаболической активности изоферментов цитохрома p-450 in vivo с помощью биоаналитических методик: обзор существующих методик и перспектива их использования в клинической практике. // Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016. № 1(14). С. 184-188.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.