pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2024-13-1-1531pharmjournal-1757Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯPRECLINICAL AND CLINICAL STUDIESОпыт проведения валидации методики оценки нейтрализующих антител ромиплостима в плазме крови человекаExperimental Validation a Method for Assessing Neutralizing Antibodies of Romiplostim in Human Plasmahttps://orcid.org/0000-0002-1443-4294АфанасьеваА. Н.AfanasevaA. N.

198515, г. Санкт-Петербург, пос. Стрельна, ул. Связи, д. 34, лит. А

34A, Svyazi str., Strelna village, Saint-Petersburg, 198515

Alina.Afanaseva@geropharm.comhttps://orcid.org/0000-0002-8445-1129СапароваВ. Б.SaparovaV. B.

198515, г. Санкт-Петербург, пос. Стрельна, ул. Связи, д. 34, лит. А; 127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20, стр. 1

34A, Svyazi str., Strelna village, Saint-Petersburg, 198515; 20/1, Delegatskaya str., Moscow, 127473

https://orcid.org/0000-0003-2308-0608МакаренкоИ. Е.MakarenkoI. E.

198515, г. Санкт-Петербург, пос. Стрельна, ул. Связи, д. 34, лит. А; 127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20, стр. 1

34A, Svyazi str., Strelna village, Saint-Petersburg, 198515; 20/1, Delegatskaya str., Moscow, 127473

https://orcid.org/0000-0001-7073-311XСельменскихТ. А.SelmenskikhT. A.

198515, г. Санкт-Петербург, пос. Стрельна, ул. Связи, д. 34, лит. А

34A, Svyazi str., Strelna village, Saint-Petersburg, 198515

https://orcid.org/0000-0002-1116-3425КуркинД. В.KurkinD. V.

127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20, стр. 1

20/1, Delegatskaya str., Moscow, 127473

https://orcid.org/0000-0002-0032-0341ХохловА. Л.HohlovA. L.

150000, г. Ярославль, ул. Революционная, д. 5

5, Revolyucionnaya str., Yaroslavl, 150000

https://orcid.org/0000-0003-4594-6097ДрайР. В.DraiR. V.

198515, г. Санкт-Петербург, пос. Стрельна, ул. Связи, д. 34, лит. А

34A, Svyazi str., Strelna village, Saint-Petersburg, 198515

Закрытое акционерное общество «Фарм-Холдинг»Closed Joint Stock Company "Pharm-Holding"Закрытое акционерное общество «Фарм-Холдинг»; Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный медико-стоматологический университет имени А. И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО МГМСУ им. А. И. Евдокимова Минздрава России)Closed Joint Stock Company "Pharm-Holding"; Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "A. I. Yevdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry" of the Ministry of Healthcare of the Russion FederationФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Московский государственный медико-стоматологический университет имени А. И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО МГМСУ им. А. И. Евдокимова Минздрава России)Federal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "A. I. Yevdokimov Moscow State University of Medicine and Dentistry" of the Ministry of Healthcare of the Russion FederationФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ярославский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской ФедерацииFederal State Budgetary Educational Institution of Higher Education "Yaroslavl State Medical University" of the Ministry of Healthcare of the Russian Federation202420022024131247255Copyright © Афанасьева А.Н., Сапарова В.Б., Макаренко И.Е., Сельменских Т.А., Куркин Д.В., Хохлов А.Л., Драй Р.В., 20242024Афанасьева А.Н., Сапарова В.Б., Макаренко И.Е., Сельменских Т.А., Куркин Д.В., Хохлов А.Л., Драй Р.В.Afanaseva A.N., Saparova V.B., Makarenko I.E., Selmenskikh T.A., Kurkin D.V., Hohlov A.L., Drai R.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1757Введение

Введение. Ромиплостим представляет собой аналог пептида слитого белка тромбопоэтина (ТПО), который увеличивает количество тромбоцитов за счет связывания и активации человеческого рецептора ТПО. Используется для лечения тромбоцитопении, связанной с хронической иммунной тромбоцитопенией. Для ромиплостима одной из возможных нежелательных реакций со стороны иммунной системы является иммуногенность – выработка противолекарственных антител к препарату, в том числе нейтрализующих антител, которые могут влиять на эффективность и профиль безопасности препарата.

Цель

Цель. Валидировать методику определения нейтрализующих антител к ромиплостиму в плазме крови человека для дальнейшего проведения клинических исследований иммуногенности.

Материалы и методы

Материалы и методы. В исследовании были использованы поликлональные антитела кролика к ромиплостиму, в качестве стандартного образца брали Энплейт® производства Amgen Europe, для оценки специфичности брали плацебо производства ООО «ГЕРОФАРМ», клеточная линия 32D-hTPOR clone 63 со стабильной экспрессией TPO-рецептора человека и набор для определения хемилюминесценции CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay от Promega. Эксперимент проводили на клеточной линии 32D-hTPOR clone 63, которую рассевали в первый день и вносили раститровку концентраций нейтрализующих антител с константной концентрацией ромиплостима, затем на второй день детектировали хемилюминесценцию. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием программного обеспечения Prism 9.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Продемонстрированы показатели специфичности методики; в максимальной концентрации препарат отличается от плацебо в 309 раз по остаточному уровню жизнеспособности клеток. Линейность методики по коэффициенту детерминации 0,9969. Определена прецизионность методики: сходимость составила 1–9 %, внутрилабораторная прецизионность – 3–18 %. Коэффициент вариации селективности методики составил 22 %. Для параметра «правильность» определены значения «внесено/найдено» на уровне 90–101 %. Доказано отсутствие эффекта матрицы.

Заключение

Заключение. Можно утверждать, что методика является линейной, специфичной, высокопрецизионной, правильной, селективной и с доказанным отсутствием эффекта матрицы, что позволяет применять ее для определения иммуногенности препаратов ромиплостим при проведении клинических исследований.

Introduction

Introduction. Romiplostim is an analogue of the fusion protein peptide of thrombopoietin (TPO), which increases platelet count by binding and activating the human thrombopoietin receptor (TPO-R). It is used to treat thrombocytopenia associated with chronic immune thrombocytopenia. For romiplostim, one of the possible adverse reactions from the immune system is immunogenicity: the production of anti-drug antibodies to the medicinal product, including neutralising antibodies, which may affect the efficacy and safety profile of the medicinal product.

Aim

Aim. Validate the procedure for determining neutralising antibodies to romiplostim in human plasma for further clinical studies of immunogenicity.

Materials and methods

Materials and methods. The study used rabbit polyclonal antibodies to romiplostim, Nplate® produced by Amgen Europe as a standard sample; a placebo produced by LLC "GEROPHARM", a cell line 32D-hTPOR clone 63 with stable expression of human TPO receptor and a chemiluminescence assay kit CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay produced by Promega to assess specificity. The experiment was carried out on cell line 32D-hTPOR clone 63, which was seeded on the first day and the neutralizing antibody concentrations were titrated with a constant concentration of romiplostim, then the chemiluminescence was detected on the second day. Statistical processing of the results was carried out using Prism 9 software.

Result and discussion

Result and discussion. The specificity of the procedure was demonstrated; at maximum concentration, the medicinal product differs from placebo by 309 times in the residual level of cell viability. The linearity of the procedure in terms of the coefficient determination is 0.9969. The precision of the procedure was determined: the repeatability was 1–9 %, the intermediate precision was 3–18 %. The coefficient of variation in selectivity of the procedure was 22 %. For the accuracy parameter, the values for recovery/spike were determined as 90–101 %. It was proven that there was no matrix effect.

Conclusion

Conclusion. It can be stated that the procedure is linear, specific, highly precise, correct, selective and with a proven absence of matrix effect, which allows it to be used to determine the immunogenicity of romiplostim medicinal products in clinical studies.

антитела к лекарственному препаратубиоаналогисследования нейтрализующих антителклинические испытания иммуногенностивалидацияопределение жизнеспособности клетокантитела к ромиплостимуanti-drug antibodiesbiosimilarneutralizing antibody studiesclinical studies of immunogenicityvalidationcell viability determinationantibodies to romiplostimРабота выполнена при финансовой поддержке ООО «ГЕРОФАРМ». Спонсор не оказывал влияния на ход исследования и интерпретацию результатов.The work was carried out with the financial support of LLC "GEROPHARM". The sponsor had no influence on the course of the study or interpretation of the results.ReferencesKayal L., Jayachandran S., Singh K. Idiopathic thrombocytopenic purpura. Contemporary Clinical Dentistry. 2014;5(3):410–414. DOI: 10.4103/0976-237X.137976.Kayal L., Jayachandran S., Singh K. Idiopathic thrombocytopenic purpura. Contemporary Clinical Dentistry. 2014;5(3):410–414. DOI: 10.4103/0976-237X.137976.Provan D., Arnold D. M., Bussel J. B., Chong B. H., Cooper N., Gernsheimer T., Ghanima W., Godeau B., González-López T. J., Grainger J., Hou M., Kruse C., McDonald V., Michel M., Newland A. C., Pavord S., Rodeghiero F., Scully M., Tomiyama Y., Wong R. S., Zaja F., Kuter D. J. Updated international consensus report on the investigation and management of primary immune thrombocytopenia. Blood Advances. 2019;3(22):3780–3817. DOI: 10.1182/bloodadvances.2019000812.Provan D., Arnold D. M., Bussel J. B., Chong B. H., Cooper N., Gernsheimer T., Ghanima W., Godeau B., González-López T. J., Grainger J., Hou M., Kruse C., McDonald V., Michel M., Newland A. C., Pavord S., Rodeghiero F., Scully M., Tomiyama Y., Wong R. S., Zaja F., Kuter D. J. Updated international consensus report on the investigation and management of primary immune thrombocytopenia. Blood Advances. 2019;3(22):3780–3817. DOI: 10.1182/bloodadvances.2019000812.Zufferey A., Kapur R., Semple J. Pathogenesis and Therapeutic Mechanisms in Immune Thrombocytopenia (ITP). Journal of Clinical Medicine. 2017;6(2):16. DOI: 10.3390/jcm6020016.Zufferey A., Kapur R., Semple J. Pathogenesis and Therapeutic Mechanisms in Immune Thrombocytopenia (ITP). Journal of Clinical Medicine. 2017;6(2):16. DOI: 10.3390/jcm6020016.Pietras N. M., Pearson-Shaver A. L. Immune Thrombocytopenic Purpura. StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2022.Pietras N. M., Pearson-Shaver A. L. Immune Thrombocytopenic Purpura. StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2022.Neunert C., Noroozi N., Norman G., Buchanan G. R., Goy J., Nazi I., Kelton J. G., Arnold D. M. Severe bleeding events in adults and children with primary immune thrombocytopenia: a systematic review. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2015;13(3):457–464. DOI: 10.1111/jth.12813.Neunert C., Noroozi N., Norman G., Buchanan G. R., Goy J., Nazi I., Kelton J. G., Arnold D. M. Severe bleeding events in adults and children with primary immune thrombocytopenia: a systematic review. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2015;13(3):457–464. DOI: 10.1111/jth.12813.Soff G. A., Miao Y., Bendheim G., Batista J., Mones J. V., Parameswaran R., Wilkins C. R., Devlin S. M., Abou-Alfa G. K., Cercek A., Kemeny N. E., Sarasohn D. M., Mantha S. Romiplostim Treatment of Chemotherapy-Induced Thrombocytopenia. Journal of Clinical Oncology. 2019;37(31):2892–2898. DOI: 10.1200/JCO.18.01931.Soff G. A., Miao Y., Bendheim G., Batista J., Mones J. V., Parameswaran R., Wilkins C. R., Devlin S. M., Abou-Alfa G. K., Cercek A., Kemeny N. E., Sarasohn D. M., Mantha S. Romiplostim Treatment of Chemotherapy-Induced Thrombocytopenia. Journal of Clinical Oncology. 2019;37(31):2892–2898. DOI: 10.1200/JCO.18.01931.Bussel J. B., Soff G., Balduzzi A., Cooper N., Lawrence T., Semple J. W. A Review of Romiplostim Mechanism of Action and Clinical Applicability. Drug Design, Development and Therapy. 2021;15:2243–2268. DOI: 10.2147/DDDT.S299591.Bussel J. B., Soff G., Balduzzi A., Cooper N., Lawrence T., Semple J. W. A Review of Romiplostim Mechanism of Action and Clinical Applicability. Drug Design, Development and Therapy. 2021;15:2243–2268. DOI: 10.2147/DDDT.S299591.Kuter D. J. Romiplostim. In: Lyman G. H., Dale D. C., editors. Hematopoietic Growth Factors in Oncology. New York: Springer; 2011. P. 267–288. DOI: 10.1007/978-1-4419-7073-2_16.Kuter D. J. Romiplostim. In: Lyman G. H., Dale D. C., editors. Hematopoietic Growth Factors in Oncology. New York: Springer; 2011. P. 267–288. DOI: 10.1007/978-1-4419-7073-2_16.Yang A. S. Development of romiplostim: a novel engineered peptibody. Seminars in Hematology. 2015;52(1):12–15. DOI: 10.1053/j.seminhematol.2014.10.007.Yang A. S. Development of romiplostim: a novel engineered peptibody. Seminars in Hematology. 2015;52(1):12–15. DOI: 10.1053/j.seminhematol.2014.10.007.Bussel J.B., Kuter D. J., George J. N., McMillan R., Aledort L. M., Conklin G. T., Lichtin A. E., Lyons R. M., Nieva J., Wasser J. S., Wiznitzer I., Kelly R., Chen C.-F., Nichol J. L. AMG 531, a thrombopoiesis-stimulating protein, for chronic ITP. New England Journal of Medicine. 2006;355(16):1672–1681. DOI: 10.1056/NEJMoa054626.Bussel J.B., Kuter D. J., George J. N., McMillan R., Aledort L. M., Conklin G. T., Lichtin A. E., Lyons R. M., Nieva J., Wasser J. S., Wiznitzer I., Kelly R., Chen C.-F., Nichol J. L. AMG 531, a thrombopoiesis-stimulating protein, for chronic ITP. New England Journal of Medicine. 2006;355(16):1672–1681. DOI: 10.1056/NEJMoa054626.Kuter D. J., Bussel J. B., Lyons R. M., Pullarkat V., Gernsheimer T. B., Senecal F. M., Aledort L. M., George J. N., Kessler C. M., Sanz M. A., Liebman H. A., Slovick F. T., de Wolf J. T. M., Bourgeois E., Guthrie T. H., Newland A., Wasser J. S., Hamburg S. I., Grande C., Lefrère F., Lichtin A. E., Tarantino M. D., Terebelo H. R., Viallard J.-F., Cuevas F. J., Go R. S., Henry D. H., Redner R. L., Rice L., Schipperus M. R., Guo D. M., Nichol J. L. Efficacy of romiplostim in patients with chronic immune thrombocytopenic purpura: a double-blind randomised controlled trial. The Lancet. 2008;371(9610):395–403. DOI: 10.1016/S0140-6736(08)60203-2.Kuter D. J., Bussel J. B., Lyons R. M., Pullarkat V., Gernsheimer T. B., Senecal F. M., Aledort L. M., George J. N., Kessler C. M., Sanz M. A., Liebman H. A., Slovick F. T., de Wolf J. T. M., Bourgeois E., Guthrie T. H., Newland A., Wasser J. S., Hamburg S. I., Grande C., Lefrère F., Lichtin A. E., Tarantino M. D., Terebelo H. R., Viallard J.-F., Cuevas F. J., Go R. S., Henry D. H., Redner R. L., Rice L., Schipperus M. R., Guo D. M., Nichol J. L. Efficacy of romiplostim in patients with chronic immune thrombocytopenic purpura: a double-blind randomised controlled trial. The Lancet. 2008;371(9610):395–403. DOI: 10.1016/S0140-6736(08)60203-2.Shirasugi Y., Ando K., Miyazaki K., Tomiyama Y., Okamoto S., Kurokawa M., Kirito K., Yonemura Y., Mori S., Usuki K., Iwato K., Hashino S., Wei H., Lizambri R. Romiplostim for the treatment of chronic immune thrombocytopenia in adult Japanese patients: a double-blind, randomized Phase III clinical trial. International Journal of Hematology. 2011;94(1):71–80. DOI: 10.1007/s12185-011-0886-8.Shirasugi Y., Ando K., Miyazaki K., Tomiyama Y., Okamoto S., Kurokawa M., Kirito K., Yonemura Y., Mori S., Usuki K., Iwato K., Hashino S., Wei H., Lizambri R. Romiplostim for the treatment of chronic immune thrombocytopenia in adult Japanese patients: a double-blind, randomized Phase III clinical trial. International Journal of Hematology. 2011;94(1):71–80. DOI: 10.1007/s12185-011-0886-8.Schellekens H. Immunogenicity of therapeutic proteins: Clinical implications and future prospects. Clinical Therapeutics. 2002;24(11):1720–1740. DOI: 10.1016/s0149-2918(02)80075-3.Schellekens H. Immunogenicity of therapeutic proteins: Clinical implications and future prospects. Clinical Therapeutics. 2002;24(11):1720–1740. DOI: 10.1016/s0149-2918(02)80075-3.Civoli F., Kroenke M. A., Reynhardt K., Zhuang Y., Kaliyaperumal A., Gupta S. Development and optimization of neutralizing antibody assays to monitor clinical immunogenicity. Bioanalysis. 2012;4(22):2725–2735. DOI: 10.4155/bio.12.239.Civoli F., Kroenke M. A., Reynhardt K., Zhuang Y., Kaliyaperumal A., Gupta S. Development and optimization of neutralizing antibody assays to monitor clinical immunogenicity. Bioanalysis. 2012;4(22):2725–2735. DOI: 10.4155/bio.12.239.Chalmers S., Tarantino M. D. Romiplostim as a treatment for immune thrombocytopenia: a review. Journal of Blood Medicine. 2015;6:37–44. DOI: 10.2147/JBM.S47240.Chalmers S., Tarantino M. D. Romiplostim as a treatment for immune thrombocytopenia: a review. Journal of Blood Medicine. 2015;6:37–44. DOI: 10.2147/JBM.S47240.Shankar G., Devanarayan V., Amaravadi L., Barrett Y. C., Bowsher R., Finco-Kent D., Fiscella M., Gorovits B., Kirschner S., Moxness M., Parish T., Quarmby V., Smith H., Smith W., Zuckerman L. A., Koren E. Recommendations for the validation of immunoassays used for detection of host antibodies against biotechnology products. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;48(5):1267–1281. DOI: 10.1016/j.jpba.2008.09.020.Shankar G., Devanarayan V., Amaravadi L., Barrett Y. C., Bowsher R., Finco-Kent D., Fiscella M., Gorovits B., Kirschner S., Moxness M., Parish T., Quarmby V., Smith H., Smith W., Zuckerman L. A., Koren E. Recommendations for the validation of immunoassays used for detection of host antibodies against biotechnology products. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;48(5):1267–1281. DOI: 10.1016/j.jpba.2008.09.020.Shen M., Dai T. Statistical methods of screening cut point determination in immunogenicity studies. Bioanalysis. 2021;13(7):551–563. DOI: 10.4155/bio-2019-0296.Shen M., Dai T. Statistical methods of screening cut point determination in immunogenicity studies. Bioanalysis. 2021;13(7):551–563. DOI: 10.4155/bio-2019-0296.Arefeva A. N., Makarenko I. E., Saparova V. B., Karal-ogli D. D., Afanaseva A. N., Dorotenko A. R., Kalatanova A. V., Kurkin D. V., Khokhlov A. L., Drai R. V. Comparability of biosimilar romiplostim with originator: Protein characterization, animal pharmacodynamics and pharmacokinetics. Biologicals. 2023;81:101666. DOI: 10.1016/j.biologicals.2023.101666.Arefeva A. N., Makarenko I. E., Saparova V. B., Karal-ogli D. D., Afanaseva A. N., Dorotenko A. R., Kalatanova A. V., Kurkin D. V., Khokhlov A. L., Drai R. V. Comparability of biosimilar romiplostim with originator: Protein characterization, animal pharmacodynamics and pharmacokinetics. Biologicals. 2023;81:101666. DOI: 10.1016/j.biologicals.2023.101666.Jawa V., Hokom M., Hu Z., El-Abaadi N., Zhuang Y., Berger D., Gupta S., Swanson S. J., Chirmule N. Assessment of immunogenicity of romiplostim in clinical studies with ITP subjects. Annals of Hematology. 2010;89(1):75–85. DOI: 10.1007/s00277-010-0908-2.Jawa V., Hokom M., Hu Z., El-Abaadi N., Zhuang Y., Berger D., Gupta S., Swanson S. J., Chirmule N. Assessment of immunogenicity of romiplostim in clinical studies with ITP subjects. Annals of Hematology. 2010;89(1):75–85. DOI: 10.1007/s00277-010-0908-2.Mytych D. T., Park J. K., Kim J., Barger T. E., Boshier A., Jawa V., Kuter D. J. Assessment of romiplostim immunogenicity in adult patients in clinical trials and in a global postmarketing registry. British Journal of Haematology. 2020;190(6):923–932. DOI: 10.1111/bjh.16658.Mytych D. T., Park J. K., Kim J., Barger T. E., Boshier A., Jawa V., Kuter D. J. Assessment of romiplostim immunogenicity in adult patients in clinical trials and in a global postmarketing registry. British Journal of Haematology. 2020;190(6):923–932. DOI: 10.1111/bjh.16658.Fang Q., Huang F., Liang J., Chen Y., Li C., Zhang M., Wu X., Luo W. Safety of romiplostim and eltrombopag for children with immune thrombocytopenia: a pharmacovigilance study of the FDA adverse event reporting system database. Expert Opinion on Drug Safety. 2023;22(8):707–714. DOI: 10.1080/14740338.2023.2182288.Fang Q., Huang F., Liang J., Chen Y., Li C., Zhang M., Wu X., Luo W. Safety of romiplostim and eltrombopag for children with immune thrombocytopenia: a pharmacovigilance study of the FDA adverse event reporting system database. Expert Opinion on Drug Safety. 2023;22(8):707–714. DOI: 10.1080/14740338.2023.2182288.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.