pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2024-13-1-1684pharmjournal-1759Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯPRECLINICAL AND CLINICAL STUDIESРазработка и валидация методики количественного определения апиксабана в плазме крови с помощью метода ВЭЖХ-МС/МСDevelopment and Validation of an HPLC-MS/MS Method for Quantification of Apixaban in Human Plasmahttps://orcid.org/0009-0009-7266-3296ФилоноваУ. Д.FilonovaU. D.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8; 115409, г. Москва, Каширское шоссе, д. 31

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246;31, Kashirskoe highway, Moscow, 115409

u.filonova@cpha.ruhttps://orcid.org/0000-0002-7518-0777КарнаковаП. К.KarnakovaP. K.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246

https://orcid.org/0000-0002-4010-1231КарнаковаК. К.KarnakovaK. K.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246

https://orcid.org/0009-0008-1688-1902ПоповаМ. О.PopovaM. O.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246

https://orcid.org/0000-0002-3874-8626ПоповаА. А.PopovaA. A.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246

https://orcid.org/0000-0001-6621-1060АрчаковаО. А.ArchakovaO. A.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246

https://orcid.org/0000-0001-8354-7877КомаровТ. Н.KomarovT. N.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8; 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246;6, Mikluho-Maklaya str., Moscow, 117198

https://orcid.org/0000-0002-1185-8630ШохинИ. Е.ShohinI. E.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8; 115409, г. Москва, Каширское шоссе, д. 31

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246;31, Kashirskoe highway, Moscow, 115409

Общество с ограниченной ответственностью «Центр фармацевтической аналитики» (ООО «ЦФА»); Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего образования «Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ» (НИЯУ МИФИ)LLC "Center of Pharmaceutical Analytics" (LLC "CPHA"); National Research Nuclear University MEPhI (Moscow Engineering Physics Institute)Общество с ограниченной ответственностью «Центр фармацевтической аналитики» (ООО «ЦФА»)LLC "Center of Pharmaceutical Analytics" (LLC "CPHA")Общество с ограниченной ответственностью «Центр фармацевтической аналитики» (ООО «ЦФА»); Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы» (РУДН)LLC "Center of Pharmaceutical Analytics" (LLC "CPHA"); Peoples' Friendship University of Russia named after Patrice Lumumba (RUDN University)202420022024131224240Copyright © Филонова У.Д., Карнакова П.К., Карнакова К.К., Попова М.О., Попова А.А., Арчакова О.А., Комаров Т.Н., Шохин И.Е., 20242024Филонова У.Д., Карнакова П.К., Карнакова К.К., Попова М.О., Попова А.А., Арчакова О.А., Комаров Т.Н., Шохин И.Е.Filonova U.D., Karnakova P.K., Karnakova K.K., Popova M.O., Popova A.A., Archakova O.A., Komarov T.N., Shohin I.E.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1759Введение

Введение. Апиксабан – антикоагулянт, применяющийся при ряде тромбоэмболических заболеваний и обладающий улучшенным соотношением пользы от приема препарата и рисков развития кровотечения согласно многочисленным клиническим исследованиям. В связи с назначением апиксабана в качестве антитромботической терапии пациентам с COVID-19 наблюдается рост его применения. Таким образом, из-за большого распространения апиксабана и необходимости проведения фармакокинетических исследований и исследований биоэквивалентности препаратов апиксабана важно разработать и валидировать простую и чувствительную методику количественного определения апиксабана в плазме крови.

Цель

Цель. Целью исследования является разработка и валидация методики определения апиксабана в плазме крови человека с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-селективным детектированием (ВЭЖХ-МС/МС) для последующего проведения фармакокинетического исследования.

Материалы и методы

Материалы и методы. Определение апиксабана в плазме крови человека проводили с помощью ВЭЖХ-МС/МС, используя ривароксабан как внутренний стандарт. Пробоподготовка проводилась путем осаждения белков плазмы крови ацетонитрилом. Подвижная фаза: 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в воде (элюент А); 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле (элюент В). Время анализа: 3,00 мин. Колонка: Shim-pack Velox Biphenyl; 2,7 мкм; 50 × 2,1 мм. Источник ионизации: электроспрей с положительным режимом ионизации. MRM-переходы: 460,15 → 443,10 m/z (апиксабан); 436,05 → 144,95 m/z (ривароксабан).

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Валидация проводилась согласно действующим требованиям ЕАЭС по следующим валидационным параметрам: селективность, калибровочная кривая, точность и прецизионность, нижний предел количественного определения, пригодность стандартных образцов, эффект матрицы, степень извлечения, стабильность, перенос пробы, отсутствие влияния разбавления образцов. Результаты оценки всех параметров соответствовали установленным критериям приемлемости.

Заключение

Заключение. Подтвержденный аналитический диапазон разработанной и валидированной методики составил 1,00–300,00 нг/мл в плазме крови. Методика определения апиксабана в плазме крови является простой и чувствительной. Данная методика была апробирована во время аналитической части исследования биоэквивалентности и может применяться для других фармакокинетических исследований препаратов апиксабана.

Introduction

Introduction. Apixaban is an anticoagulant used in a number of thromboembolic diseases with an improved benefit-to-risk ratio, according to multiple clinical studies. Due to the prescription of apixaban as antithrombotic therapy in patients with COVID-19, an increase in its use has been observed. Thus, due to the widespread use of apixaban and the need to conduct pharmacokinetic and bioequivalence studies of the drug, it is important to develop and validate a simple and sensitive method for the quantitative determination of apixaban in human blood plasma.

Aim

Aim. The aim of the study is to develop and validate a method for the determination of apixaban in human blood plasma using high-performance liquid chromatography with tandem mass selective detection (HPLC-MS/MS) for the subsequent bioanalytical study.

Materials and methods

Materials and methods. The determination of apixaban in human plasma was carried out by HPLC-MS/MS with rivaroxaban as an internal standard. The method of protein precipitation with acetonitrile was used as sample preparation. Mobile phase: 0.1 % solution of formic acid in water (eluent A); 0.1 % solution of formic acid in acetonitrile (eluent B). The total run time was 3.00 min. Column: Shim-pack Velox Biphenyl; 2.7 µm; 50 × 2.1 mm. Ionization source: electrospray with positive ionization mode. MRM transitions: 460.15 → 443.10 m/z (apixaban); 436.05 → 144.95 m/z (rivaroxaban).

Results and discussion

Results and discussion. The developed method was validated in accordance with the EAEU requirements for the following parameters: selectivity, calibration curve, accuracy and precision, lower limit of quantitation, suitability of standard samples, matrix effect, recovery, stability, carry-over, dilution effects. The parameters met the acceptance criteria.

Conclusion

Conclusion. The confirmed analytical range of the developed and validated method was 1.00–300.00 ng/mL in blood plasma. The method for determining apixaban in blood plasma is simple and sensitive. This method was tested during the analytical part of the bioanalytical study and can be used to conduct other pharmacokinetic studies of apixaban drugs.

антикоагулянтыНОАКапиксабанВЭЖХ-МС/МСвалидацияCOVID-19фармакокинетикаanticoagulantsDOACapixabanHPLC-MS/MSvalidationCOVID-19pharmacokineticsReferencesВоробьева Н. М., Ткачева О. Н. Антикоагулянтная терапия у пожилых пациентов: дилемма выбора между эффективностью и безопасностью. Медицинский алфавит. 2018;2(16):6–14.Vorobyeva N. M., Tkachyova O. N. Anticoagulant therapy in elderly patients: dilemma of choice between efficacy and safety. Medical alphabet. 2018;2(16):6–14. (In Russ.)Панченко Е. П. Антитромботическая терапия ишемической болезни сердца: основы, проверенные временем. Терапевтический архив. 2019;91(6):19–24. DOI: 10.26442/00403660.2019.06.000296.Panchenko E. P. Antithrombotic therapy of coronary heart disease: time-tested essential principles. Therapeutic Archive. 2019;91(6):19–24. (In Russ.) DOI: 10.26442/00403660.2019.06.000296.Бокарев И. Н., Кондратьева Т. Б. Новые оральные антикоагулянты в клинической практике. Эффективность и проблемы. Клиническая медицина. 2016;94(5):383–387. DOI: 10.18821/0023-2149-2016-94-5-383-387.Bokarev I. N., Kondrat’eva T. B. New anticoagulants in clinical practice. Effectiveness and problems. Clinical Medicine. 2016;94(5):383–387. (In Russ.) DOI: 10.18821/0023-2149-2016-94-5-383-387.Van Rein N., Heide-Jørgensen U., Lijfering W. M., Dekkers O. M., Sørensen H. T., Cannegieter S. C. Major bleeding rates in atrial fibrillation patients on single, dual, or triple antithrombotic therapy: results from a Nationwide Danish Cohort Study. Circulation. 2019;139(6):775–786. DOI: 10.1161/CIRCULATIONAHA.118.036248.Van Rein N., Heide-Jørgensen U., Lijfering W. M., Dekkers O. M., Sørensen H. T., Cannegieter S. C. Major bleeding rates in atrial fibrillation patients on single, dual, or triple antithrombotic therapy: results from a Nationwide Danish Cohort Study. Circulation. 2019;139(6):775–786. DOI: 10.1161/CIRCULATIONAHA.118.036248.Cools F., Wollaert B., Vervoort G., Verstraete S., Voet J., Hermans K., Heyse A., De Wolf A., Hollanders G., Boussy T., Anné W., Vercammen J., Faes D., Beutels M., Mairesse G., Purnode Ph., Blankoff I., Vandergoten P., Capiau L., Allu J., Bassand J., Kayani G. Treatment patterns in anticoagulant therapy in patients with newly diagnosed atrial fibrillation in Belgium: results from the GARFIELD-AF registry. Acta Cardiologica. 2018;74(4):309–318. DOI: 10.1080/00015385.2018.1494089.Cools F., Wollaert B., Vervoort G., Verstraete S., Voet J., Hermans K., Heyse A., De Wolf A., Hollanders G., Boussy T., Anné W., Vercammen J., Faes D., Beutels M., Mairesse G., Purnode Ph., Blankoff I., Vandergoten P., Capiau L., Allu J., Bassand J., Kayani G. Treatment patterns in anticoagulant therapy in patients with newly diagnosed atrial fibrillation in Belgium: results from the GARFIELD-AF registry. Acta Cardiologica. 2018;74(4):309–318. DOI: 10.1080/00015385.2018.1494089.Мелехов А. В., Гендлин Г. Е., Дадашова Э. Ф., Алексеева Е. М., Заиграев И. А., Никитин И. Г. Динамика применения антитромботических препаратов у больных с фибрилляцией предсердий: собственные данные и обзор отечественных регистров. Российский медицинский журнал.2017;23(3):116–126. DOI: 10.18821/0869-2106-2017-23-3-116-126.Melekhov A. V., Gendlin G. E., Dadashova E. F., Alekseeva E. M., Zaigraev I. A., Nikitin I. G. The dynamics of application of anti-thrombotic in patients fibrillation of atriums: original data and review of national registers. Medical Journal of the Russian Federation. 2017;23(3):116–126. (In Russ.) DOI: 10.18821/0869-2106-2017-23-3-116-126.Груздева А. А., Хохлов А. Л., Ильин М. В. Оральные антикоагулянты в профилактике тромоэмболических осложнений у кардиологических пациентов: анализ применения в Российской Федерации. Качественная клиническая практика. 2020;1:69–79. DOI: 10.37489/2588-0519-2020-1-69-79.Gruzdeva А. А., Khokhlov А. L., Ilyin М. V. Oral anticoagulants in the prevention of thromboembolic complications in cardiac patients: analysis of use in the Russian Federation. Good Clinical Practice. 2020;1:69–79. (In Russ). DOI: 10.37489/2588-0519-2020-1-69-79.Колбин А. С., Касимова А. Р., Гиляревский С. Р. Сравнительный фармакоэкономический анализ применения апиксабана, ривароксабана и дабигатрана для профилактики развития инсульта и эмболий в сосуды большого круга кровообращения у пациентов с неклапанной фибрилляцией предсердий. Качественная клиническая практика. 2022;4:50–59. DOI: 10.37489/2588-0519-2022-4-50-59.Kolbin A. S, Kasimova A. R, Gilyarevskiy S. R. Comparative pharmacoeconomic analysis of the use of apixaban, rivaroxaban and dabigatran for prevention of stroke and embolism in the vessels of the systemic circulation in patients with non-valvular atrial fibrillation. Good Clinical Practice. 2022;(4):50–59. (In Russ). DOI: 10.37489/2588-0519-2022-4-50-59.Dzudovic J., Sakac M. C., Antunovic M., Repic A., Obradovic S., Djordjevic S., Dzudovic B. Development and validation of LC-MS/MS method for determination of plasma apixaban. Acta Chromatographica. 2022;34(3):332–337. DOI: 10.1556/1326.2021.00948.Dzudovic J., Sakac M. C., Antunovic M., Repic A., Obradovic S., Djordjevic S., Dzudovic B. Development and validation of LC-MS/MS method for determination of plasma apixaban. Acta Chromatographica. 2022;34(3):332–337. DOI: 10.1556/1326.2021.00948.Levi M., Thachil J., Iba T., Levy J. H. Coagulation abnormalities and thrombosis in patients with COVID-19. Lancet Haematol. 2020;7:e438–e440. DOI: 10.1016/S2352-3026(20)30145-9.Levi M., Thachil J., Iba T., Levy J. H. Coagulation abnormalities and thrombosis in patients with COVID-19. Lancet Haematol. 2020;7:e438–e440. DOI: 10.1016/S2352-3026(20)30145-9.Wenzler E., Engineer M. H., Yaqoob M., Benken S. T. Safety and efficacy of apixaban for therapeutic anticoagulation in critically Ill ICU patients with severe COVID-19 respiratory disease. TH Open: Companion Journal to Thrombosis and Haemostasis. 2020;4(04):e376–e382. DOI: 10.1055/s-0040-1720962.Wenzler E., Engineer M. H., Yaqoob M., Benken S. T. Safety and efficacy of apixaban for therapeutic anticoagulation in critically Ill ICU patients with severe COVID-19 respiratory disease. TH Open: Companion Journal to Thrombosis and Haemostasis. 2020;4(04):e376–e382. DOI: 10.1055/s-0040-1720962.Billett H. H., Reyes-Gil M., Szymanski J., Ikemura K., Stahl L. R., Lo Y., Rahman S., Gonzalez-Lugo J. D., Kushnir M., Barouqa M., Golestaneh L., Bellin E. Anticoagulation in COVID-19: effect of enoxaparin, heparin, and apixaban on mortality. Thrombosis and haemostasis. 2020;120(12):1691–1699. DOI: 10.1055/s-0040-1720978.Billett H. H., Reyes-Gil M., Szymanski J., Ikemura K., Stahl L. R., Lo Y., Rahman S., Gonzalez-Lugo J. D., Kushnir M., Barouqa M., Golestaneh L., Bellin E. Anticoagulation in COVID-19: effect of enoxaparin, heparin, and apixaban on mortality. Thrombosis and haemostasis. 2020;120(12):1691–1699. DOI: 10.1055/s-0040-1720978.Appiah D., Quinn N. J., Messing E. G., Veltri K. T. Safety and efficacy analysis of apixaban compared to heparins in hospitalized non-critically ill COVID-19 patients. Hospital Pharmacy. 2022;57(6):727–733. DOI: 10.1177/00185787221095764.Appiah D., Quinn N. J., Messing E. G., Veltri K. T. Safety and efficacy analysis of apixaban compared to heparins in hospitalized non-critically ill COVID-19 patients. Hospital Pharmacy. 2022;57(6):727–733. DOI: 10.1177/00185787221095764.Pinto D. J., Orwat M. J., Koch S., Rossi K. A., Alexander R. S., Smallwood A., Wong P. C., Rendina A. R., Luettgen J. M., Knabb R. M., He K., Xin B., Wexler R. R., Lam P. Y. Discovery of 1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-6-(4-(2-oxopiperidin-1-yl)phenyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-3-carboxamide (Apixaban, BMS-562247), a highly potent, selective, efficacious, and orally bioavailable inhibitor of blood coagulation factor Xa. Journal of medicinal chemistry. 2007;50(22):5339–5356. DOI: 10.1021/jm070245n.Pinto D. J., Orwat M. J., Koch S., Rossi K. A., Alexander R. S., Smallwood A., Wong P. C., Rendina A. R., Luettgen J. M., Knabb R. M., He K., Xin B., Wexler R. R., Lam P. Y. Discovery of 1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-6-(4-(2-oxopiperidin-1-yl)phenyl)-4,5,6,7-tetrahydro-1H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-3-carboxamide (Apixaban, BMS-562247), a highly potent, selective, efficacious, and orally bioavailable inhibitor of blood coagulation factor Xa. Journal of medicinal chemistry. 2007;50(22):5339–5356. DOI: 10.1021/jm070245n.Luettgen J. M., Knabb R. M., He K., Pinto D. J., Rendina A. R. Apixaban inhibition of factor Xa: microscopic rate constants and inhibition mechanism in purified protein systems and in human plasma. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2011;26(4):514–526. DOI: 10.3109/14756366.2010.535793.Luettgen J. M., Knabb R. M., He K., Pinto D. J., Rendina A. R. Apixaban inhibition of factor Xa: microscopic rate constants and inhibition mechanism in purified protein systems and in human plasma. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2011;26(4):514–526. DOI: 10.3109/14756366.2010.535793.Byon W., Garonzik S., Boyd R. A., Frost C. E. Apixaban: a clinical pharmacokinetic and pharmacodynamic review. Clinical pharmacokinetics. 2019;58(10):1265–1279. DOI: 10.1007/s40262-019-00775-z.Byon W., Garonzik S., Boyd R. A., Frost C. E. Apixaban: a clinical pharmacokinetic and pharmacodynamic review. Clinical pharmacokinetics. 2019;58(10):1265–1279. DOI: 10.1007/s40262-019-00775-z.Granger C. B, Alexander J. H, McMurray J. J. V, Lopes R. D., Hylek E. M., Hanna M., Al-Khalidi H. R., Ansell J., Atar D., Avezum A., Bahit M. C., Diaz R., Easton J. D., Ezekowitz J. A., Flaker G., Garcia D., Geraldes M., Gersh B. J., Golitsyn S., Goto S., Hermosillo A. G., Hohnloser S. H., Horowitz J., Mohan P., Jansky P., Lewis B. S., Lopez-Sendon J. L., Pais P., Parkhomenko A., Verheugt F. W. A., Zhu J., Wallentin L. Apixaban versus Warfarin in Patients with Atrial Fibrillation. New England Journal of Medicine. 2011;365(11):981–992. DOI: 10.1056/NEJMoa1107039.Granger C. B, Alexander J. H, McMurray J. J. V, Lopes R. D., Hylek E. M., Hanna M., Al-Khalidi H. R., Ansell J., Atar D., Avezum A., Bahit M. C., Diaz R., Easton J. D., Ezekowitz J. A., Flaker G., Garcia D., Geraldes M., Gersh B. J., Golitsyn S., Goto S., Hermosillo A. G., Hohnloser S. H., Horowitz J., Mohan P., Jansky P., Lewis B. S., Lopez-Sendon J. L., Pais P., Parkhomenko A., Verheugt F. W. A., Zhu J., Wallentin L. Apixaban versus Warfarin in Patients with Atrial Fibrillation. New England Journal of Medicine. 2011;365(11):981–992. DOI: 10.1056/NEJMoa1107039.Романова М. В., Пузенко Д. В. Некоторые аспекты применения антикоагулянтов при венозных тромбоэмболиях, тромбоэмболии легочной артерии. Фокус на пожилых пациентов. Российский кардиологический журнал. 2022;27(3):97–106. DOI: 10.15829/1560-4071-2022-4944.Romanova M. V., Puzenko D. V. Aspects of anticoagulant therapy in venous thromboembolism, pulmonary embolism. Focus on elderly patients. Russian Journal of Cardiology. 2022;27(3):97–106. (In Russ.) DOI: 10.15829/1560-4071-2022-4944.Hylek E. M., Held C., Alexander J. H., Lopes R. D., De Caterina R., Wojdyla D. M., Huber K., Jansky P., Steg Ph. G., Hanna M., Thomas L., Wallentin L., Granger C. B. Major bleeding in patients with atrial fibrillation receiving apixaban or warfarin: The ARISTOTLE Trial (Apixaban for Reduction in Stroke and Other Thromboembolic Events in Atrial Fibrillation): Predictors, Characteristics, and Clinical Outcomes. Journal of the American College of Cardiology. 2014;63(20):2141–2147. DOI: 10.1016/j.jacc.2014.02.549.Hylek E. M., Held C., Alexander J. H., Lopes R. D., De Caterina R., Wojdyla D. M., Huber K., Jansky P., Steg Ph. G., Hanna M., Thomas L., Wallentin L., Granger C. B. Major bleeding in patients with atrial fibrillation receiving apixaban or warfarin: The ARISTOTLE Trial (Apixaban for Reduction in Stroke and Other Thromboembolic Events in Atrial Fibrillation): Predictors, Characteristics, and Clinical Outcomes. Journal of the American College of Cardiology. 2014;63(20):2141–2147. DOI: 10.1016/j.jacc.2014.02.549.Avezum A., Lopes R. D., Schulte P. J., Lanas F., Gersh B. J., Hanna M., Pais P., Erol C., Diaz R., Bahit M. C., Bartunek J., De Caterina R., Goto S., Ruzyllo W., Zhu J., Granger C. B., Alexander J. H. Apixaban in comparison with warfarin in patients with atrial fibrillation and valvular heart disease: findings from the Apixaban for Reduction in Stroke and Other Thromboembolic Events in Atrial Fibrillation (ARISTOTLE) Trial. Circulation. 2015;132(8):624–632. DOI: 10.1161/CIRCULATIONAHA.114.014807.Avezum A., Lopes R. D., Schulte P. J., Lanas F., Gersh B. J., Hanna M., Pais P., Erol C., Diaz R., Bahit M. C., Bartunek J., De Caterina R., Goto S., Ruzyllo W., Zhu J., Granger C. B., Alexander J. H. Apixaban in comparison with warfarin in patients with atrial fibrillation and valvular heart disease: findings from the Apixaban for Reduction in Stroke and Other Thromboembolic Events in Atrial Fibrillation (ARISTOTLE) Trial. Circulation. 2015;132(8):624–632. DOI: 10.1161/CIRCULATIONAHA.114.014807.Lip G. Y., Keshishian A., Li X., Hamilton M., Masseria C., Gupta K., Luo X., Mardekian J., Friend K., Nadkarni A., Pan X., Baser O., Deitelzweig S. Effectiveness and safety of oral anticoagulants among nonvalvular atrial fibrillation patients: the ARISTOPHANES study. Stroke. 2018;49(12):2933–2944. DOI: 10.1161/STROKEAHA.118.020232.Lip G. Y., Keshishian A., Li X., Hamilton M., Masseria C., Gupta K., Luo X., Mardekian J., Friend K., Nadkarni A., Pan X., Baser O., Deitelzweig S. Effectiveness and safety of oral anticoagulants among nonvalvular atrial fibrillation patients: the ARISTOPHANES study. Stroke. 2018;49(12):2933–2944. DOI: 10.1161/STROKEAHA.118.020232.Fralick M., Colacci M., Schneeweiss S., Huybrechts K. F., Lin K. J., Gagne J. J. Effectiveness and safety of apixaban compared with rivaroxaban for patients with atrial fibrillation in routine practice: a cohort study. Annals of internal medicine. 2020;172(7):463–473. DOI: 10.7326/M19-2522.Fralick M., Colacci M., Schneeweiss S., Huybrechts K. F., Lin K. J., Gagne J. J. Effectiveness and safety of apixaban compared with rivaroxaban for patients with atrial fibrillation in routine practice: a cohort study. Annals of internal medicine. 2020;172(7):463–473. DOI: 10.7326/M19-2522.Rutherford O. C. W., Jonasson C., Ghanima W., Söderdahl F., Halvorsen S. Comparison of dabigatran, rivaroxaban, and apixaban for effectiveness and safety in atrial fibrillation: a nationwide cohort study. European Heart Journal-Cardiovascular Pharmacotherapy. 2020;6(2):75–85. DOI: 10.1093/ehjcvp/pvz086.Rutherford O. C. W., Jonasson C., Ghanima W., Söderdahl F., Halvorsen S. Comparison of dabigatran, rivaroxaban, and apixaban for effectiveness and safety in atrial fibrillation: a nationwide cohort study. European Heart Journal-Cardiovascular Pharmacotherapy. 2020;6(2):75–85. DOI: 10.1093/ehjcvp/pvz086.Jeong H.-C., Kim T.-E., Shin K.-H. Quantification of apixaban in human plasma using ultra performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. Translational and Clinical Pharmacology. 2019;27(1):33–41. DOI: 10.12793/tcp.2019.27.1.33.Jeong H.-C., Kim T.-E., Shin K.-H. Quantification of apixaban in human plasma using ultra performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry. Translational and Clinical Pharmacology. 2019;27(1):33–41. DOI: 10.12793/tcp.2019.27.1.33.Rodina T. A., Melnikov E. S., Aksenov A. A., Belkov S. A., Sokolov A. V., Prokof’ev A. B., Ramenskaya G. V. Simultaneous Determination of Dabigatran, Rivaroxaban, Apixaban, and Warfarin in Human Blood Serum by HPLC-MS/MS for Therapeutic Drug Monitoring. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2022;56(2):289–293. DOI: 10.1007/s11094-022-02633-y.Rodina T. A., Melnikov E. S., Aksenov A. A., Belkov S. A., Sokolov A. V., Prokof’ev A. B., Ramenskaya G. V. Simultaneous Determination of Dabigatran, Rivaroxaban, Apixaban, and Warfarin in Human Blood Serum by HPLC-MS/MS for Therapeutic Drug Monitoring. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2022;56(2):289–293. DOI: 10.1007/s11094-022-02633-y.Gouveia F., Bicker J., Santos J., Rocha M., Alves G., Falcão A., Fortuna A. Development, validation and application of a new HPLC-DAD method for simultaneous quantification of apixaban, dabigatran, edoxaban and rivaroxaban in human plasma. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2020;181:113109. DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113109.Gouveia F., Bicker J., Santos J., Rocha M., Alves G., Falcão A., Fortuna A. Development, validation and application of a new HPLC-DAD method for simultaneous quantification of apixaban, dabigatran, edoxaban and rivaroxaban in human plasma. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2020;181:113109. DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113109.Cini M., Legnani C., Padrini R., Cosmi B., Dellanoce C., De Rosa G., Palareti G., Marcucci R., Pengo V., Poli D., Testa S. DOAC plasma levels measured by chromogenic anti-Xa assays and HPLC-UV in apixaban-and rivaroxaban-treated patients from the START-Register. International Journal of Laboratory Hematology. 2020;42(2):214–222. DOI: 10.1111/ijlh.13159.Cini M., Legnani C., Padrini R., Cosmi B., Dellanoce C., De Rosa G., Palareti G., Marcucci R., Pengo V., Poli D., Testa S. DOAC plasma levels measured by chromogenic anti-Xa assays and HPLC-UV in apixaban-and rivaroxaban-treated patients from the START-Register. International Journal of Laboratory Hematology. 2020;42(2):214–222. DOI: 10.1111/ijlh.13159.Lindahl S., Dyrkorn R., Spigset O., Hegstad S. Quantification of apixaban, dabigatran, edoxaban, and rivaroxaban in human serum by UHPLC-MS/MS – method development, validation, and application. Therapeutic drug monitoring. 2018;40(3):369. DOI: 10.1097/FTD.0000000000000509.Lindahl S., Dyrkorn R., Spigset O., Hegstad S. Quantification of apixaban, dabigatran, edoxaban, and rivaroxaban in human serum by UHPLC-MS/MS – method development, validation, and application. Therapeutic drug monitoring. 2018;40(3):369. DOI: 10.1097/FTD.0000000000000509.Raghavan N., Frost C. E., Yu Z., He K., Zhang H., Humphreys W. G., Zhang D., Pinto D., Chen S., Bonacorsi S., Wong P. C. Apixaban metabolism and pharmacokinetics after oral administration to humans. Drug metabolism and disposition. 2009;37(1):74–81. DOI: 10.1124/dmd.108.023143.Raghavan N., Frost C. E., Yu Z., He K., Zhang H., Humphreys W. G., Zhang D., Pinto D., Chen S., Bonacorsi S., Wong P. C. Apixaban metabolism and pharmacokinetics after oral administration to humans. Drug metabolism and disposition. 2009;37(1):74–81. DOI: 10.1124/dmd.108.023143.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.