pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2024-13-2-1783pharmjournal-1802Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯPRECLINICAL AND CLINICAL STUDIESРазработка и валидация методики определения тетрадекапептида в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МСHPLC-MS/MS method development and validation for the determination of tetradecapeptide in human plasmahttps://orcid.org/0000-0001-7684-358XТокареваМ. А.TokarevaM. A.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2;

109240, г. Москва, ул. Яузская, д. 11

8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991;

11, Yauzskaya str., Moscow, 109240

tokareva_m_a@student.sechenov.ruhttps://orcid.org/0000-0002-8993-4808МельниковЕ. С.MelnikovE. S.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2;

109240, г. Москва, ул. Яузская, д. 11

8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991;

11, Yauzskaya str., Moscow, 109240

https://orcid.org/0000-0002-0861-5945БеловаМ. В.BelovaM. V.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2;

129090, г. Москва, Большая Сухаревская площадь, д. 3

8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991;

3, Bolshaya Sukharevskaya sq., Moscow, 129090

https://orcid.org/0000-0002-6456-7669ФишерЕ. Н.FisherE. N.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2;

121205, г. Москва, тер. Инновационного Центра Сколково, Большой б-р, д. 42, стр. 1, этаж 2, помещ. 243

8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991;

Room 243, 42/1, Bolshoy Boulevard, ter. Skolkovo Innovation Centre, Moscow, 121205

https://orcid.org/0000-0002-0528-3068РодинаТ. А.RodinaT. A.

109240, г. Москва, ул. Яузская, д. 11

11, Yauzskaya str., Moscow, 109240

https://orcid.org/0000-0002-1185-8630ШохинИ. Е.ShohinI. E.

117638, г. Москва, Симферопольский бульвар, д. 8;

115409, г. Москва, Каширское шоссе, д. 31

8, Simferopol Boulevard, Moscow, 117246;

31, Kashirskoe highway, Moscow, 115409

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет); Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы «Городская клиническая больница имени И. В. Давыдовского Департамента здравоохранения города Москвы» (ГБУЗ «ГКБ им. И. В. Давыдовского ДЗМ»)I. M. Sechenov First MSMU of the Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University); Clinical Hospital. I. V. Davidovsky Department of Health of the city of MoscowФедеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет); Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы «Научно-исследовательский институт скорой помощи им. Н. В. Склифосовского Департамента здравоохранения города Москвы» (ГБУЗ «НИИ СП им. Н. В. Склифосовского ДЗМ»)I. M. Sechenov First MSMU of the Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University); N. V. Sklifosovsky Research Institute for Emergency MedicineФедеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет); Общество с ограниченной ответственностью «Лаборатория фармацевтических исследований» (ООО «ЛФИ»)I. M. Sechenov First MSMU of the Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University); LLC "Laboratory of pharmaceutical research" (LLC "LFI")Государственное бюджетное учреждение здравоохранения города Москвы «Городская клиническая больница имени И. В. Давыдовского Департамента здравоохранения города Москвы» (ГБУЗ «ГКБ им. И. В. Давыдовского ДЗМ»)Clinical Hospital. I. V. Davidovsky Department of Health of the city of MoscowОбщество с ограниченной ответственностью «Центр фармацевтической аналитики» (ООО «ЦФА»); Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего образования «Национальный исследовательский ядерный университет «МИФИ» (НИЯУ МИФИ)LLC "Center of Pharmaceutical Analytics" (LLC "CPHA"); National Research Nuclear University MEPhI (Moscow Engineering Physics Institute)202415042024132171180Copyright © Токарева М.А., Мельников Е.С., Белова М.В., Фишер Е.Н., Родина Т.А., Шохин И.Е., 20242024Токарева М.А., Мельников Е.С., Белова М.В., Фишер Е.Н., Родина Т.А., Шохин И.Е.Tokareva M.A., Melnikov E.S., Belova M.V., Fisher E.N., Rodina T.A., Shohin I.E.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1802Введение

Введение. В последние годы растет число разрабатываемых и регистрируемых лекарственных средств пептидной природы, в связи с чем необходимы современные аналитические подходы и методики определения этих веществ в биологических матрицах для изучения фармакокинетики. Пептиды по структуре занимают промежуточное положение между малыми молекулами и биополимерами, что создаёт трудности при разработке методик их определения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС). Дериватизация пептидов может способствовать достижению оптимального хроматографического разделения и снижению нижнего предела количественного определения методики.

Цель

Цель. Разработка и валидация методики определения тетрадекапептида (ТДП) треонил-глутамил-лизил-лизил-аргинил-аргинил-глутамил-треонил-валил-глутамил-аргинил-глутамил-лизил-глутамата в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС.

Материалы и методы

Материалы и методы. Определение ТДП в плазме крови человека проводили методом ВЭЖХ-МС/МС. При пробоподготовке использована комбинация методов осаждения белков плазмы крови раствором пропионовой кислоты в метаноле, жидкость-жидкостной экстракции, дериватизации пептида пропионовым ангидридом. Внутренний стандарт (ВС): треонил-глутамил-лизил-лизил-аргинил-аргинил-глутамил-треонил-лейцил-глутамил-аргинил-глутамил-лизил-глутамат. Хроматографическое разделение проводили в градиентном режиме, элюент А – 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в воде, элюент В – 0,1%-й муравьиной кислоты в ацетонитриле. Колонка: Waters XBridge C18, 4,6 × 50 мм, 5 мкм. Ионизация методом электрораспыления в положительном режиме. При детектировании в режиме мониторинга множественных реакций (multiple reaction monitoring, MRM) для 4-замещенного ТДП пропионата использовали переходы: 681,30 → 73,95 m/z, 681,30 → 84,00 m/z, 681,30 → 101,90 m/z, 681,30 → 140,10 m/z, для 4-замещенного ВС пропионата: 686,00 → 74,10 m/z, 686,00 → 84,05 m/z, 686,00 → 102,00 m/z, 686,00 → 140,00 m/z.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Валидация методики проведена в соответствии с требованиями Евразийского экономического союза по параметрам: селективности, эффекту матрицы, градуировочной кривой, правильности и прецизионности, степени извлечения, нижнему пределу количественного определения, переносу пробы, стабильности.

Заключение

Заключение. Проведена разработка и валидация методики определения ТДП в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС. Аналитический диапазон составил 5,00–1000,00 нг/мл, что позволяет использовать методику при изучении фармакокинетики ТДП.

Introduction

Introduction. The number of peptide drugs being developed and registered has increased in recent years. Therefore, modern analytical approaches and methods are required to determine these substances in biological matrices during pharmacokinetic studies. Peptides are structurally intermediate between small molecules and biopolymers, making it difficult to develop methods for determining them using High Performance Liquid Chromatography with Tandem Mass Spectrometry (HPLC-MS/MS). Peptide derivatization can help achieve optimal chromatographic separation and increase method sensitivity.

Aim

Aim. To develop and validate a method for the determination of the tetradecapeptide (TDP) threonyl-glutamyl-lysyl-lysyl-arginyl-arginyl-glutamayl-threonyl-valyl-glutamyl-arginyl-glutamyl-lysyl-glutamate in human plasma by HPLC-MS/MS.

Materials and methods

Materials and methods. The determination of TDP in human plasma was performed by HPLC-MS/MS. Sample preparation included a combination of blood plasma protein precipitation with propionic acid solution in methanol, liquid-liquid extraction with chloroform, and peptide derivatization with propionic anhydride. Internal standard (IS) was threonyl-glutamyl-lysyl-lysyl-arginyl-arginyl-glutamayl-threonyl-leucyl-glutamyl-arginyl-glutamyl-lysyl-glutamate. Chromatographic separation was performed in gradient mode, eluent A was 0.1 % formic acid solution in water, eluent B was 0.1 % formic acid in acetonitrile. Column: Waters XBridge C18, 4.6 × 50 mm, 5 µm. Ionization source was electrospray in positive mode. Multiple reaction monitoring (MRM) transitions for 4-substituted TDP propionate were: 681.30 → 73.95 m/z, 681.30 → 84.00 m/z, 681.30 → 101.90 m/z, 681.30 → 140.10 m/z, and for 4-substituted IS propionate: 686.00 → 74.10 m/z, 686.00 → 84.05 m/z, 686.00 → 102.00 m/z, 686.00 → 140.00 m/z.

Results and discussion

Results and discussion. Validation of the developed method was carried out in accordance with the requirements of Eurasian Economic Union and the following parameters were determined: selectivity, matrix effect, calibration curve, accuracy and precision, recovery, lower limit of quantification, sample carryover, stability.

Conclusion

Conclusion. The method for the determination of TDP in human blood plasma by HPLC-MS/MS was developed and validated. The analytical range was 5.00–1000.00 ng/mL, allowing the method to be used to study TDP pharmacokinetics.

пептидплазма кровиВЭЖХ-МС/МСвалидациядериватизацияpeptideblood plasmaHPLC-MS/MSvalidationderivatizationReferencesDe la Torre B. G., Albericio F. Peptide Therapeutics 2.0. Molecules. 2020;25(10):2293. DOI: 10.3390/molecules25102293.De la Torre B. G., Albericio F. Peptide Therapeutics 2.0. Molecules. 2020;25(10):2293. DOI: 10.3390/molecules25102293.Torchilin V. Intracellular delivery of protein and peptide therapeutics. Drug Discovery Today: Technologies. 2008;5(2–3):e95–e103. DOI: 10.1016/j.ddtec.2009.01.002.Torchilin V. Intracellular delivery of protein and peptide therapeutics. Drug Discovery Today: Technologies. 2008;5(2–3):e95–e103. DOI: 10.1016/j.ddtec.2009.01.002.Al Shaer D., Al Musaimi O., Albericio F., de la Torre B. G. 2018 FDA Tides Harvest. Pharmaceuticals. 2019;12(2):52. DOI: 10.3390/ph12020052.Al Shaer D., Al Musaimi O., Albericio F., de la Torre B. G. 2018 FDA Tides Harvest. Pharmaceuticals. 2019;12(2):52. DOI: 10.3390/ph12020052.Al Shaer D., Al Musaimi O., Albericio F., de la Torre B. G. 2019 FDA TIDES (Peptides and Oligonucleotides) Harvest. Pharmaceuticals. 2020;13(3):40. DOI: 10.3390/ph13030040.Al Shaer D., Al Musaimi O., Albericio F., de la Torre B. G. 2019 FDA TIDES (Peptides and Oligonucleotides) Harvest. Pharmaceuticals. 2020;13(3):40. DOI: 10.3390/ph13030040.Al Musaimi O., Al Shaer D., Albericio F., de la Torre B. G. 2020 FDA TIDES (Peptides and Oligonucleotides) Harvest. Pharmaceuticals. 2021;14(2):145. DOI: 10.3390/ph14020145.Al Musaimi O., Al Shaer D., Albericio F., de la Torre B. G. 2020 FDA TIDES (Peptides and Oligonucleotides) Harvest. Pharmaceuticals. 2021;14(2):145. DOI: 10.3390/ph14020145.Al Shaer D., Al Musaimi O., Albericio F., de la Torre B. G. 2021 FDA TIDES (Peptides and Oligonucleotides) Harvest. Pharmaceuticals. 2022;15(2):222. DOI: 10.3390/ph15020222.Al Shaer D., Al Musaimi O., Albericio F., de la Torre B. G. 2021 FDA TIDES (Peptides and Oligonucleotides) Harvest. Pharmaceuticals. 2022;15(2):222. DOI: 10.3390/ph15020222.Al Musaimi O., Al Shaer D., Albericio F., de la Torre B. G. 2022 FDA TIDES (Peptides and Oligonucleotides) Harvest. Pharmaceuticals. 2023;16(3):336. DOI: 10.3390/ph16030336.Al Musaimi O., Al Shaer D., Albericio F., de la Torre B. G. 2022 FDA TIDES (Peptides and Oligonucleotides) Harvest. Pharmaceuticals. 2023;16(3):336. DOI: 10.3390/ph16030336.Kaspar A. A., Reichert J. M. Future directions for peptide therapeutics development. Drug Discovery Today. 2013;18(17–18):807–817. DOI: 10.1016/j.drudis.2013.05.011.Kaspar A. A., Reichert J. M. Future directions for peptide therapeutics development. Drug Discovery Today. 2013;18(17–18):807–817. DOI: 10.1016/j.drudis.2013.05.011.Apostolopoulos V., Bojarska J., Chai T.-T., Elnagdy S., Kaczmarek K., Matsoukas J., New R., Parang K., Paredes Lopez O., Parhiz H., Perera C. O., Pickholz M., Remko M., Saviano M., Skwarczynski M., Tang Y., Wolf W. M., Yoshiya T., Zabrocki J., Zielenkiewicz P., AlKhazindar M., Barriga V., Kelaidonis K., Mousavinezhad Sarasia E., Toth I. A Global Review on Short Peptides: Frontiers and Perspectives. Molecules. 2021;26(2):430. DOI: 10.3390/molecules26020430.Apostolopoulos V., Bojarska J., Chai T.-T., Elnagdy S., Kaczmarek K., Matsoukas J., New R., Parang K., Paredes Lopez O., Parhiz H., Perera C. O., Pickholz M., Remko M., Saviano M., Skwarczynski M., Tang Y., Wolf W. M., Yoshiya T., Zabrocki J., Zielenkiewicz P., AlKhazindar M., Barriga V., Kelaidonis K., Mousavinezhad Sarasia E., Toth I. A Global Review on Short Peptides: Frontiers and Perspectives. Molecules. 2021;26(2):430. DOI: 10.3390/molecules26020430.Ewles M., Goodwin L. Bioanalytical approaches to analyzing peptides and proteins by LC-MS/MS. Bioanalysis. 2011;3(12):1379–1397. DOI: 10.4155/bio.11.112.Ewles M., Goodwin L. Bioanalytical approaches to analyzing peptides and proteins by LC-MS/MS. Bioanalysis. 2011;3(12):1379–1397. DOI: 10.4155/bio.11.112.Rauh M. LC-MS/MS for protein and peptide quantification in clinical chemistry. Journal of Chromatography B. 2012;883–884:59–67. DOI: 10.1016/j.jchromb.2011.09.030.Rauh M. LC-MS/MS for protein and peptide quantification in clinical chemistry. Journal of Chromatography B. 2012;883–884:59–67. DOI: 10.1016/j.jchromb.2011.09.030.Fisher E. N., Melnikov E. S., Gegeckori V., Potoldykova N. V., Enikeev D. V., Pavlenko K. A., Agatonovic-Kustrin S., Morton D. W., Ramenskaya G. V. Development and Validation of an LC-MS/MS Method for Simultaneous Determination of Short Peptide-Based Drugs in Human Blood Plasma. Molecules. 2022;27(22):7831. DOI: 10.3390/molecules27227831.Fisher E. N., Melnikov E. S., Gegeckori V., Potoldykova N. V., Enikeev D. V., Pavlenko K. A., Agatonovic-Kustrin S., Morton D. W., Ramenskaya G. V. Development and Validation of an LC-MS/MS Method for Simultaneous Determination of Short Peptide-Based Drugs in Human Blood Plasma. Molecules. 2022;27(22):7831. DOI: 10.3390/molecules27227831.Ding J.-S., Peng W.-X., Zhang Z.-H., Li H.-D., Jiang X.-H. Determination of octreotide in human plasma by HPLC-MS with solid-phase extraction and study on the relative bioavailability of domestic and imported octreotide injections. Yao Xue Xue Bao. 2004;39(7):542–545.Ding J.-S., Peng W.-X., Zhang Z.-H., Li H.-D., Jiang X.-H. Determination of octreotide in human plasma by HPLC-MS with solid-phase extraction and study on the relative bioavailability of domestic and imported octreotide injections. Yao Xue Xue Bao. 2004;39(7):542–545.Sauter M., Uhl P., Burhenne J., Haefeli W. E. Application of triple quadrupole tandem mass spectrometry to the bioanalysis of collision-induced dissociation-resistant cyclic peptides – Ultra-sensitive quantification of the somatostatin-analog pasireotide utilizing UHPLC-MS/MS. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2021;194:113728. DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113728.Sauter M., Uhl P., Burhenne J., Haefeli W. E. Application of triple quadrupole tandem mass spectrometry to the bioanalysis of collision-induced dissociation-resistant cyclic peptides – Ultra-sensitive quantification of the somatostatin-analog pasireotide utilizing UHPLC-MS/MS. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2021;194:113728. DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113728.Aydin S. A short history, principles, and types of ELISA, and our laboratory experience with peptide/protein analyses using ELISA. Peptides. 2015;72:4–15. DOI: 10.1016/j.peptides.2015.04.012.Aydin S. A short history, principles, and types of ELISA, and our laboratory experience with peptide/protein analyses using ELISA. Peptides. 2015;72:4–15. DOI: 10.1016/j.peptides.2015.04.012.Chen Y., Liang Y., Lv R., Xia N., Xue T., Zhao S. An immunological determination of somatostatin in pharmaceutical by sandwich ELISA based on IgY and polyclonal antibody. Microchemical Journal. 2019;145:532–538. DOI: 10.1016/j.microc.2018.11.019.Chen Y., Liang Y., Lv R., Xia N., Xue T., Zhao S. An immunological determination of somatostatin in pharmaceutical by sandwich ELISA based on IgY and polyclonal antibody. Microchemical Journal. 2019;145:532–538. DOI: 10.1016/j.microc.2018.11.019.Oh H. S., Choi M., Lee T. S., An Y., Park E. J., Kim T. H., Shin S., Shin B. S. Pharmacokinetics and brain distribution of the therapeutic peptide liraglutide by a novel LC-MS/MS analysis. Journal of Analytical Science and Technology. 2023;14(1):19. DOI: 10.1186/s40543-023-00382-5.Oh H. S., Choi M., Lee T. S., An Y., Park E. J., Kim T. H., Shin S., Shin B. S. Pharmacokinetics and brain distribution of the therapeutic peptide liraglutide by a novel LC-MS/MS analysis. Journal of Analytical Science and Technology. 2023;14(1):19. DOI: 10.1186/s40543-023-00382-5.Malm-Erjefält M., Bjørnsdottir I., Vanggaard J., Helleberg H., Larsen U., Oosterhuis B., van Lier J. J., Zdravkovic M., Olsen A. K. Metabolism and Excretion of the Once-Daily Human Glucagon-Like Peptide-1 Analog Liraglutide in Healthy Male Subjects and Its In Vitro Degradation by Dipeptidyl Peptidase IV and Neutral Endopeptidase. Drug Metabolism and Disposition. 2010;38(11):1944–1953. DOI: 10.1124/dmd.110.034066.Malm-Erjefält M., Bjørnsdottir I., Vanggaard J., Helleberg H., Larsen U., Oosterhuis B., van Lier J. J., Zdravkovic M., Olsen A. K. Metabolism and Excretion of the Once-Daily Human Glucagon-Like Peptide-1 Analog Liraglutide in Healthy Male Subjects and Its In Vitro Degradation by Dipeptidyl Peptidase IV and Neutral Endopeptidase. Drug Metabolism and Disposition. 2010;38(11):1944–1953. DOI: 10.1124/dmd.110.034066.De Souza I. D., Queiroz M. E. C. Advances in sample preparation and HPLC–MS/MS methods for determining amyloid-β peptide in biological samples: a review. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2023;415(18):4003–4021. DOI: 10.1007/s00216-023-04631-9.De Souza I. D., Queiroz M. E. C. Advances in sample preparation and HPLC–MS/MS methods for determining amyloid-β peptide in biological samples: a review. Analytical and Bioanalytical Chemistry. 2023;415(18):4003–4021. DOI: 10.1007/s00216-023-04631-9.Hamman J. H., Enslin G. M., Kotzé A. F. Oral Delivery of Peptide Drugs. BioDrugs. 2005;19(3):165–177. DOI: 10.2165/00063030-200519030-00003.Hamman J. H., Enslin G. M., Kotzé A. F. Oral Delivery of Peptide Drugs. BioDrugs. 2005;19(3):165–177. DOI: 10.2165/00063030-200519030-00003.Le Maux S., Nongonierma A. B., FitzGerald R. J. Improved short peptide identification using HILIC–MS/MS: Retention time prediction model based on the impact of amino acid position in the peptide sequence. Food Chemistry. 2015;173:847–854. DOI: 10.1016/j.foodchem.2014.10.104.Le Maux S., Nongonierma A. B., FitzGerald R. J. Improved short peptide identification using HILIC–MS/MS: Retention time prediction model based on the impact of amino acid position in the peptide sequence. Food Chemistry. 2015;173:847–854. DOI: 10.1016/j.foodchem.2014.10.104.Doulou E., Kalomiraki M., Parla A., Thermos K., Chaniotakis N. A., Panderi I. Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography Coupled with Fluorescence Detection (HILIC-FL) for the Quantitation of Octreotide in Injection Forms. Analytica. 2021;2(4):121–129. DOI: 10.3390/analytica2040012.Doulou E., Kalomiraki M., Parla A., Thermos K., Chaniotakis N. A., Panderi I. Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography Coupled with Fluorescence Detection (HILIC-FL) for the Quantitation of Octreotide in Injection Forms. Analytica. 2021;2(4):121–129. DOI: 10.3390/analytica2040012.Kang L., Weng N., Jian W. LC-MS bioanalysis of intact proteins and peptides. Biomedical Chromatography. 2020;34(1): e4633. DOI: 10.1002/bmc.4633.Kang L., Weng N., Jian W. LC-MS bioanalysis of intact proteins and peptides. Biomedical Chromatography. 2020;34(1): e4633. DOI: 10.1002/bmc.4633.Böttger R., Hoffmann R., Knappe D. Differential stability of therapeutic peptides with different proteolytic cleavage sites in blood, plasma and serum. PLOS ONE. 2017;12(6):e0178943. DOI: 10.1371/journal.pone.0178943.Böttger R., Hoffmann R., Knappe D. Differential stability of therapeutic peptides with different proteolytic cleavage sites in blood, plasma and serum. PLOS ONE. 2017;12(6):e0178943. DOI: 10.1371/journal.pone.0178943.Powell M. F. Chapter 30. Peptide Stability in Drug Development: in vitro Peptide Degradation in Plasma and Serum. Annual Reports in Medicinal Chemistry. 1993;28:285–294.Powell M. F. Chapter 30. Peptide Stability in Drug Development: in vitro Peptide Degradation in Plasma and Serum. Annual Reports in Medicinal Chemistry. 1993;28:285–294.Zee B. M., Garcia B. A. Discovery of lysine post-translational modifications through mass spectrometric detection. Essays in Biochemistry. 2012;52:147–63. DOI: 10.1042/bse0520147.Zee B. M., Garcia B. A. Discovery of lysine post-translational modifications through mass spectrometric detection. Essays in Biochemistry. 2012;52:147–63. DOI: 10.1042/bse0520147.Lin S., Garcia B. A. Examining Histone Posttranslational Modification Patterns by High-Resolution Mass Spectrometry. Methods in Enzymology. 2012;512:3–28. DOI: 10.1016/B978-0-12-391940-3.00001-9.Lin S., Garcia B. A. Examining Histone Posttranslational Modification Patterns by High-Resolution Mass Spectrometry. Methods in Enzymology. 2012;512:3–28. DOI: 10.1016/B978-0-12-391940-3.00001-9.Bonaldi T., Imhof A., Regula J. T. A combination of different mass spectroscopic techniques for the analysis of dynamic changes of histone modifications. Proteomics. 2004;4(5):1382–1396. DOI: 10.1002/pmic.200300743.Bonaldi T., Imhof A., Regula J. T. A combination of different mass spectroscopic techniques for the analysis of dynamic changes of histone modifications. Proteomics. 2004;4(5):1382–1396. DOI: 10.1002/pmic.200300743.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.