119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2
8/2, Trubetskaya str., Moscow, 119991
119121, г. Москва, ул. Погодинская, д. 10, стр. 8; 141701, Московская обл., г. Долгопрудный, Институтский переулок, д. 9
10/8, Pogodinskaya str., Moscow, 119121; 9, Institutsky lane, Dolgoprudny, Moscow region, 141701
141701, Московская обл., г. Долгопрудный, Институтский переулок, д. 9; 117997, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 16/10
9, Institutsky lane, Dolgoprudny, Moscow region, 141701; 16/10, Mikluho-Maklaya str., Moscow, 117997
119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2
8/2, Trubetskaya str., Moscow, 119991
119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2
8/2, Trubetskaya str., Moscow, 119991
119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2
8/2, Trubetskaya str., Moscow, 119991
Введение. Структура дигидрокверцетина (ДКВ) характеризуется наличием двух центров хиральности в положениях 2 и 3 бензопиранонового цикла, что обуславливает возможность существования диастереомеров: транс- и цис-изомеров. Таким образом, разработка аналитических подходов к качественному и количественному контролю диастереомеров ДКВ в субстанции является необходимой для обеспечения безопасности пациентов. Спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ЯМР) – один из физико-химических методов, который можно использовать для решения этой задачи.
Цель. Целью данного исследования было накопление аналитических и структурных характеристик цис-ДКВ при помощи спектроскопии ЯМР сфероидной формы данного флавоноида.
Материалы и методы. Спектры 1D-ЯМР 1H, 1H,1H-COSY, 1H,1H-NOESY и 1H,13C-HSQC были получены при 298 K на спектрометре, оборудованном датчиком тройного резонанса и работающем на частоте, составляющей 800 МГц на 1H. Число сканирований для каждого спектра составило 32. Время смешения в ходе эксперимента NOESY – 400 мс. Спектры 1H и 13C были проанализированы и отнесены при помощи программы CcpNmr. Торсионные углы рассчитаны по уравнению Карплуса.
Результаты и обсуждение. В транс-ДКВ величина химического сдвига для Н2 и Н3 составила 4,93 м.д. и 4,52 м.д., а для цис-ДКВ – 5,31 м.д. и 4,20 м.д. соответственно. Константы спин-спинового взаимодействия между атомами водорода в положениях 2 и 3 транс- и цис-изомеров были 12,00 Гц и 2,40 Гц соответственно. Таким образом, торсионные углы между этими атомами водорода составили 154° в транс-ДКВ и 64° в цис-ДКВ. Установлено, что сфероидная форма ДКВ содержит 12,53 % цис-изомера.
Заключение. Результаты исследования подтверждают возможность использования спектроскопии ЯМР для идентификации транс- и цис-ДКВ по величинам химических сдвигов кросс-пиков Н2 и Н3. Другим важным результатом стало обнаружение большей селективности данного количественного метода анализа в сравнении с УФ-ВЭЖХ в отсутствие стандартного образца на цис-изомер. Одним из значимых результатов данного исследования для разработки лекарственных средств стало уточнение информации о структуре диастереомеров ДКВ в жидкой фазе.
Introduction. The structure of dihydroquercetin (DHQ) is characterized by two chiral centers at positions 2 and 3 of the benzopyran cycle, resulting in possible diastereomers: trans- and cis-isomers. Therefore, the development of methods for qualitative and quantitative control of DHQ diastereomers in analyzed samples is essential for patient safety management. Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy is one of the physicochemical methods that can be used for this purpose.
Aim. The study objective was to accumulate the analytical and structural characteristics of cis-DHQ by NMR spectroscopy of the spheroidal form of this flavonoid (DHQs).
Materials and Methods. 1D 1H, 1H,1H-COSY, 1H,1H-NOESY, and 1H,13C-HSQC NMR spectra were acquired at 298 K on an 800 MHz NMR spectrometer equipped with a TXI triple resonance probe. The number of scans was 32. The mixing time in the NOESY experiment was 400 ms. The 1H and 13C were analyzed using CcpNmr software. The dihedral angles were calculated by applying the Karplus equation.
Results and discussion. In trans-DHQ, the chemical shift values for H2 and H3 are 4.93 ppm and 4.52 ppm, respectively, and in cis-DHQ they are 5.31 ppm and 4.20 ppm, respectively. The spin-spin coupling constants between H2 and H3 of trans- and cis-DHQ are 12.00 Hz and 2.40 Hz, respectively. Thus, the dihedral angles for the trans- and cis-isomers are 154° and 64°, respectively. We found that DHQs contains 12.5 % of the cis-isomer.
Conclusion. Our experiments confirmed that NMR spectroscopy can discriminate between trans- and cis-DHQ based on the chemical shift values for the cross-peaks of H2 and H3. The second major finding was that this method can be considered as a more selective quantitative analysis than HPLC with UV detection without reference. One of the most important results of this study for drug development is the updated information on the structural parameters of DHQ diastereomers in the liquid phase.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.