pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2024-13-3-1609pharmjournal-1911Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯPRECLINICAL AND CLINICAL STUDIESКоличественное определение феназепама и его активного метаболита в плазме крови человека при различных процедурах экстракцииQuantitative determination of phenazepam and its active metabolite in human blood plasma at different extraction procedureshttps://orcid.org/0000-0003-4950-5336МирошниченкоИ. И.MiroshnichenkoI. I.

115522, г. Москва, Каширское шоссе, д. 34

34, Kashirskoe shosse, Moscow, 115522

igormir41@gmail.comhttps://orcid.org/0000-0002-9682-4623ПлатоваА. И.PlatovaA. I.

115522, г. Москва, Каширское шоссе, д. 34

34, Kashirskoe shosse, Moscow, 115522

https://orcid.org/0000-0002-9326-4683КузьминИ. И.KuzminI. I.

115522, г. Москва, Каширское шоссе, д. 34

34, Kashirskoe shosse, Moscow, 115522

https://orcid.org/0000-0002-2295-7167ИващенкоД. В.IvaschenkoD. V.

125993, г. Москва, ул. Баррикадная, д. 2/1, стр. 1

Building 1, 2/1, Barrikadnaya str., Moscow, 125993

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научный центр психического здоровья» (ФГБНУ НЦПЗ)Federal state budgetary scientific institution "Mental health research center"Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования» Министерства здравоохранения Российской ФедерацииRussian Medical Academy of Continuous Professional Education202424082024133199207Copyright © Мирошниченко И.И., Платова А.И., Кузьмин И.И., Иващенко Д.В., 20242024Мирошниченко И.И., Платова А.И., Кузьмин И.И., Иващенко Д.В.Miroshnichenko I.I., Platova A.I., Kuzmin I.I., Ivaschenko D.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/1911Введение

Введение. Наличие активного метаболита 3-гидроксифеназепама (3-ОН-ФЕН), широкая межиндивидуальная вариабельность активной фракции феназепама (ФЕН) в крови, а также его терапевтического эффекта определяют актуальность терапевтического лекарственного мониторинга (ТЛМ). Для этого исследователь должен располагать экспрессной методикой с широким аналитическим диапазоном, низким пределом количественного определения (НПКО), робастной при разных методах пробоподготовки.

Цель

Цель. Разработка и валидация методик количественного определения ФЕН и 3-гидроксифеназепама для измерения содержания этих аналитов в плазме крови человека при разных методах экстракции.

Материалы и методы

Материалы и методы. Определение ФЕН и 3-ОН-ФЕН в плазме крови человека проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС). Для пробоподготовки использовали твердофазную экстракцию (SPE, от англ. «solid phase extraction») и жидкостную экстракцию с поддержкой (SLE, от англ. «supported liquid extraction»), иначе называемую жидкостно-жидкостной экстракцией на твердой фазе. Внутренний стандарт (ВС) − метопролол. Подвижная фаза: 0,2%-й водный раствор муравьиной кислоты (элюент А) и 100%-й ацетонитрил (элюент B); режим: градиентный. Колонка: Hypersil GOLD® C18, 50 × 2,1 мм, 3,5 мкм.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Разработаны две методики количественного определения ФЕН и 3-ОН-ФЕН в плазме крови человека при разных методах пробоподготовки: SPE и SLE. Подобраны условия хроматографического разделения и масс-спектрометрической детекции изучаемых аналитов. Для обеих методик были определены следующие валидационные характеристики: селективность, калибровочная кривая, точность, прецизионность, степень экстракции, НПКО, эффект переноса, фактор матрицы, стабильность рабочих растворов и аналита в матрице.

Заключение

Заключение. Результаты валидации разработанных методик соответствуют установленным критериям, что позволяет их использовать для количественного определения ФЕН и 3-ОН-ФЕН в плазме крови человека. Широкий аналитический диапазон обеих методик – 1–1000,00 нг/мл – позволяет применять их для проведения исследований фармакокинетики и биоэквивалентности, а также в токсикологии.

Introduction

Introduction. The presence of the active metabolite (3-hydroxyphenazepam, 3-OH-PHEN), the wide interindividual variability of the therapeutic effect of phenazepam (PHEN), as well as its active moiety in the blood, determine the relevance of therapeutic drug monitoring (TDM). To do this, the researcher must have an express analytical technique with a wide analytical range, a low limit of quantification (LLOQ), and with robustness with different sample preparation methods.

Aim

Aim. Development and validation of quantitative methods for PHEN and 3-OH-PHEN in human blood plasma with different sample preparation methods.

Materials and methods

Materials and methods. The determination of PHEN and 3-OH-PHEN has been performed by high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry (HPLC-MS/MS). Solid-phase extraction (SPE) and liquid extraction with support (SLE) otherwise called liquid-liquid extraction in the solid phase were used for sample preparation. Metoprolol was utilized as an internal standard (IS). Gradient elution profile between mobile phase A (0.2 % aqueous formic acid) and B (100 % acetonitrile) has been used. Column: Hypersil GOLD® C18, 50 × 2.1 mm, 3.5 μm.

Results and discussion

Results and discussion. Two methods have been developed for the quantitative determination of PHEN and 3-OH-PHEN in human blood plasma using different sample preparation methods: SPE and SLE. The conditions of chromatographic separation and mass spectrometric detection of the analytes are selected. The following validation characteristics were determined for both methods: selectivity, calibration curve, accuracy, precision, degree of extraction, LLOQ, carry-over effect, matrix factor, stability of standard solutions and analyte in the matrix.

Conclusion

Conclusion. The validation results of the developed methods meet the established criteria, which allows them to be used for the quantitative determination of PHEN and 3-OH-PHEN in human blood plasma. The wide analytical range for both methods 1–1000.00 ng/ml allows the use them for pharmacokinetics and bioequivalence studies, as well as in toxicology.

феназепам3-гидроксифеназепамВЭЖХ-МС/МСвалидациятвердофазная экстракцияжидкостная экстракция с поддержкойphenazepam3-oxyphenazepamHPLC-MS/MSvalidationsolid phase extractionsupported liquid extractionReferencesMoosmann B., Huppertz L. M., Hutter M., Buchwald A., Ferlaino S., Auwärter V. Detection and identification of the designer benzodiazepine flubromazepam and preliminary data on its metabolism and pharmacokinetics. Journal of Mass Spectrometry. 2013;48(11):1150–1159.Moosmann B., Huppertz L. M., Hutter M., Buchwald A., Ferlaino S., Auwärter V. Detection and identification of the designer benzodiazepine flubromazepam and preliminary data on its metabolism and pharmacokinetics. Journal of Mass Spectrometry. 2013;48(11):1150–1159.Воронина Т. А., Середенин С. Б. Перспективы поиска новых анксиолитиков. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2002;65(5):4–17.Voronina T. A., Seredenin S. B. Prospects of search for new anxiolytics. Éksperimentalnaya i Klinicheskaya Farmakologiya. 2002;65(5):4–17. (In Russ.)Городничев А. В., Костюкова Е. Г. Место феназепама в современном применении бензодиазепиновых транквилизаторов. Современная терапия психических расстройств. 2011;2:26–29.Gorodnichev A. V., Kostyukova E. G. The place of phenazepam in the modern use of benzodiazepine tranquilizers. Current Therapy of Mental Disorders. 2011;2:26–29 (In Russ.)Середенин С. Б., Воронина Т. А., Незнамов Г. Г., Жердев В. П. Феназепам: 25 лет в медицинской практике. Москва: Наука; 2007. 222 с.Seredenin S. B., Voronina T. A., Neznamov G. G., Zherdev V. P. Phenazepam: 25 years in medical practice. Moscow: Nauka; 2007. 222 p. (In Russ.)Осадший Ю. Ю., Вобленко Р. А., Арчаков Д. С., Тараканова Е. А. Место бензодиазепинов в современной терапии психических расстройств (обзор доказательных исследований). Современная терапия психических расстройств. 2016;1:2–10.Osadshiy Y. Y., Voblenko R. A., Archakov D. S., Tarakanova E. A. Benzodiazepines. An attempt to arrive at an informed consensus. Current Therapy of Mental Disorders. 2016;1:2–10. (In Russ.)Brunetti P., Giorgetti R., Tagliabracci A., Huestis M. A., Busardò F. P. Designer benzodiazepines: a review of toxicology and public health risks. Pharmaceuticals. 2021;14(6):560. DOI: 10.3390/ph14060560.Brunetti P., Giorgetti R., Tagliabracci A., Huestis M. A., Busardò F. P. Designer benzodiazepines: a review of toxicology and public health risks. Pharmaceuticals. 2021;14(6):560. DOI: 10.3390/ph14060560.Kerrigan S., Mellon M. B. Hinners P. Detection of phenazepam in impaired driving. Journal of Analytical Toxicology. 2013;37(8):605–610. DOI:10.1093/jat/bkt075.Kerrigan S., Mellon M. B. Hinners P. Detection of phenazepam in impaired driving. Journal of Analytical Toxicology. 2013;37(8):605–610. DOI:10.1093/jat/bkt075.Stephenson J. B., Golz D. E., Brasher M. J. Phenazepam and its Effects on Driving. Journal of Analytical Toxicology. 2013;37(1):25–29. DOI: 10.1093/jat/bks080.Stephenson J. B., Golz D. E., Brasher M. J. Phenazepam and its Effects on Driving. Journal of Analytical Toxicology. 2013;37(1):25–29. DOI: 10.1093/jat/bks080.Воронина Т. А. Ларионов В. Б., Головенко Н. Я., Неробкова Л. Н., Гайдуков И. О. Роль 3-оксиметаболита феназепама и леваны в реализации их нейротропного действия. Фармакокинетика и фармакодинамика. 2014;1:44–49.Voronina T. A. Larionov V. B., Golovenko N. Y., Nerobkova L. N., Gaidukov I. O. Role of 3-oximetabolite phenazepam and levan in realize their neurotropic efficacy. Pharmacokinetics and Pharmacodynamics. 2014;1:44–49 (In Russ.)Zastrozhin M. S., Skryabin V. Yu., Sorokin A. S., Petukhov A. E., Smirnov V. V., Pankratenko E. P., Grishina E. A., Ryzhikova K. A., Panov A. S., Savchenko L. M., Bryun E. A., Sychev D. A. CYP3A subfamily activity affects the equilibrium concentration of Phenazepam® in patients with anxiety disorders and comorbid alcohol use disorder. Pharmacogenomics. 2020;21(7):449–457. DOI: 10.2217/pgs-2019-0071.Zastrozhin M. S., Skryabin V. Yu., Sorokin A. S., Petukhov A. E., Smirnov V. V., Pankratenko E. P., Grishina E. A., Ryzhikova K. A., Panov A. S., Savchenko L. M., Bryun E. A., Sychev D. A. CYP3A subfamily activity affects the equilibrium concentration of Phenazepam® in patients with anxiety disorders and comorbid alcohol use disorder. Pharmacogenomics. 2020;21(7):449–457. DOI: 10.2217/pgs-2019-0071.Pennings E., van Amsterdam J. G. C., Schoones J. W., Kershaw S. Phenazepam Pre-Review Report Agenda item 5.8 Expert Committee on Drug Dependence Thirty-seventh Meeting. World Health Organization. 2015.Pennings E., van Amsterdam J. G. C., Schoones J. W., Kershaw S. Phenazepam Pre-Review Report Agenda item 5.8 Expert Committee on Drug Dependence Thirty-seventh Meeting. World Health Organization. 2015.Жердев В. П., Воронина Т. А., Гарибова Т. Л., Колыванов Г. Б., Литвин А. А., Сариев А. К., Тохмахчи В. Н., Васильев А. Е. Оценка фармакокинетики и эффективности феназепама у крыс при трансдермальном и энтеральном способах введения. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2003;66(1):50–53.Zherdev V. P., Voronina T. A., Garibova T. L., Kolyvanov G. B., Litvin A. A., Sariev A. K., Tohmahchi V. N., Vasil’ev A. E. A comparative study of the pharmacokinetics and efficacy of fenazepam upon transdermal and enteral administration. Éksperimentalnaya i Klinicheskaya Farmakologiya. 2003;66(1):50–53 (In Russ.)Ékonomov A. L., Zherdev V. P. Method of quantitative gas-chromatographic determination of phenazepam and its metabolite 3-hydroxyphenazepam in plasma. Pharmaceutical Chemistry Journal. 1980;14(8):579–582.Ékonomov A. L., Zherdev V. P. Method of quantitative gas-chromatographic determination of phenazepam and its metabolite 3-hydroxyphenazepam in plasma. Pharmaceutical Chemistry Journal. 1980;14(8):579–582.O’Connor L. C., Torrance H. J., McKeown D. A. ELISA detection of phenazepam, etizolam, pyrazolam, flubromazepam, diclazepam and delorazepam in blood using Immunalysis® benzodiazepine kit. Journal of Analytical Toxicology. 2016;40(2):159–161. DOI: 10.1093/jat/bkv122.O’Connor L. C., Torrance H. J., McKeown D. A. ELISA detection of phenazepam, etizolam, pyrazolam, flubromazepam, diclazepam and delorazepam in blood using Immunalysis® benzodiazepine kit. Journal of Analytical Toxicology. 2016;40(2):159–161. DOI: 10.1093/jat/bkv122.Mastrovito R. A., Papsun D. M., Logan B. K. The Development and Validation of a Novel Designer Benzodiazepines Panel by LC-MS-MS. Journal of Analytical Toxicology. 2021;45(5):423–428. DOI: 10.1093/jat/bkab013.Mastrovito R. A., Papsun D. M., Logan B. K. The Development and Validation of a Novel Designer Benzodiazepines Panel by LC-MS-MS. Journal of Analytical Toxicology. 2021;45(5):423–428. DOI: 10.1093/jat/bkab013.Yang C.-A., Tsai C.-Y., H.-C. Liu, Liu R. H., Lin D.-L. Designer benzodiazepines and their metabolites in post- and antemortem specimens: Quantitation by UHPLC-MS/MS and findings in Taiwan. Toxicologie Analytique et Clinique. 2022;34(3):S180. DOI: 10.1016/j.toxac.2022.06.312.Yang C.-A., Tsai C.-Y., H.-C. Liu, Liu R. H., Lin D.-L. Designer benzodiazepines and their metabolites in post- and antemortem specimens: Quantitation by UHPLC-MS/MS and findings in Taiwan. Toxicologie Analytique et Clinique. 2022;34(3):S180. DOI: 10.1016/j.toxac.2022.06.312.Mei V., Concheiro M., Pardi J., Cooper G. Validation of an LC-MS/MS Method for the Quantification of 13 Designer Benzodiazepines in Blood. Journal of Analytical Toxicology. 2019;43(9):688–695. DOI: 10.1093/jat/bkz063.Mei V., Concheiro M., Pardi J., Cooper G. Validation of an LC-MS/MS Method for the Quantification of 13 Designer Benzodiazepines in Blood. Journal of Analytical Toxicology. 2019;43(9):688–695. DOI: 10.1093/jat/bkz063.Pettersson Bergstrand M., Beck O., Helander A. Urine analysis of 28 designer benzodiazepines by liquid chromatography-high-resolution mass spectrometry. Clinical Mass Spectrometry. 2018;10:25–32. DOI: 10.1016/j.clinms.2018.08.004.Pettersson Bergstrand M., Beck O., Helander A. Urine analysis of 28 designer benzodiazepines by liquid chromatography-high-resolution mass spectrometry. Clinical Mass Spectrometry. 2018;10:25–32. DOI: 10.1016/j.clinms.2018.08.004.Crichton M. L., Shenton C. F., Drummond G., Beer L. J., Seetohul L. N., Maskell P. D. Analysis of phenazepam and 3-hydroxyphenazepam in post-mortem fluids and tissues. Drug Testing and Analysis. 2015;7(10):926–936. DOI: 10.1002/dta.1790.Crichton M. L., Shenton C. F., Drummond G., Beer L. J., Seetohul L. N., Maskell P. D. Analysis of phenazepam and 3-hydroxyphenazepam in post-mortem fluids and tissues. Drug Testing and Analysis. 2015;7(10):926–936. DOI: 10.1002/dta.1790.Bioanalytical Method Validation. Guidance for Industry. New Hampshire: Biopharmaceutics; 2018. 44 p.Bioanalytical Method Validation. Guidance for Industry. New Hampshire: Biopharmaceutics; 2018. 44 p.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.