163000, Архангельская область, г. Архангельск, пр-т Троицкий, д. 51
51, prospekt Troitsky, Arkhangelsk, Arkhangelsk region, 163000
117513, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1, стр. 6
1/6, Ostrovityanova str., Moscow, 117513
117513, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1, стр. 6
1/6, Ostrovityanova str., Moscow, 117513
117513, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1, стр. 6
1/6, Ostrovityanova str., Moscow, 117513
117513, г. Москва, ул. Островитянова, д. 1, стр. 6
1/6, Ostrovityanova str., Moscow, 117513
Введение. В оригинальной статье представлены результаты экспериментального исследования, проведенного с использованием метода высокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ), растительных образцов – корневищ с корнями Dioscorea caucasica Lipsky, Dioscorea nipponika Makino. Данные виды диоскорей используются в различных областях медицины в качестве фунгицидного, антимикробного, а также антисклеротического средства. Метод ВЭТСХ используется на этапе скрининга растительных образцов для предварительной идентификации и денситометрического количественного определения диосгенина в растительных экстрактах.
Цель. Разработка ВЭТСХ-методики количественной оценки содержания диосгенина после проведения кислотного гидролиза экстрактов в воздушно-сухом сырье – корневищах с корнями Dioscorea caucasica Lipsky, Dioscorea nipponika Makino.
Материалы и методы. Экстракты получали путем предварительного обезжиривания и депигментирования воздушно-сухого сырья корневищ с корнями изучаемых видов диоскорей дихлорметаном х.ч. с последующим двойным экстрагированием. Первое экстрагирование проводили в среде 50%-го водного раствора изопропанола х.ч. при озвучивании ультразвуком с последующим проведением кислотного гидролиза О-гликозидных связей, упариванием. Второе экстрагирование проводили путем перерастворения сухого остатка в метаноле х.ч.; очищали от взвешенных частиц фильтрованием через шприцевые фильтры с диаметром перфораций 20 мкм. ВЭТСХ осуществляли на аппаратном комплексе CAMAG (Швейцария) с использованием пластин HPTLC Aluminium sheets Silica gel 60 F254, 20 × 20 см, которые разрезали до размера 20 × 10 см.
Результаты и обсуждение. После проведения сканирующей денситометрии при 366 и 542 нм было установлено, что хроматографирование метанольных извлечений в системе растворителей толуол х.ч. – хлороформ х.ч. – ацетон х.ч. (2 : 8 : 2 по объему) позволяет удовлетворительно провести разделение и последующее денситометрическое количественное определение диосгенина. Сравнение треков растительных экстрактов корневищ с корнями Dioscorea caucasica Lipsky и Dioscorea nipponika Makino проводили со стандартным образцом диосгенина.
Заключение. Проведенное исследование позволило установить, что содержание стероидного сапогенина диосгенина в воздушно-сухом сырье Dioscorea nipponica Makino (286,4–296,3 мкг/г) незначительно преобладает над его содержанием в сырье Dioscorea caucasica Lipsky (257–277,1 мкг/г). Полученные количественные значения, рассчитанные раздельно по высоте и площади пиков, демонстрируют хорошую сходимость, что подтверждает корректность методики. Разработанный метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии с денситометрическим детектированием диосгенина может быть рекомендован для рутинного количественного анализа данного соединения в растительном сырье.
Introduction. The original article presents the results of an experimental study conducted using the method of high-performance thin-layer chromatography (HPTLC) on plant samples – rhizomes with roots of Dioscorea caucasica Lipsky and Dioscorea nipponika Makino. These species of Dioscorea are used in various fields of medicine as fungicides, antimicrobials, and anti-sclerotic agents. The HPTLC method is used at the screening stage of plant samples for preliminary identification and densitometric quantitative determination of diosgenin in plant extracts.
Aim. Development of a HPTLC methodology for quantitative assessment of diosgenin content after acid hydrolysis of extracts in air-dried raw materials – rhizomes with roots of Dioscorea caucasica Lipsky and Dioscorea nipponika Makino.
Materials and methods. The extracts were obtained by preliminary degreasing and depigmentation of air-dried rhizomes with roots of the studied Dioscorea species using high-purity dichloromethane, followed by double extraction. The first extraction was carried out in a 50 % aqueous solution of isopropanol with ultrasonication, followed by acid hydrolysis of O-glycosidic bonds and evaporation. The second extraction was carried out by redissolving the dry residue in methanol; it was purified from suspended particles by filtration through syringe filters with a perforation diameter of 20 μm. HPTLC was performed on a «CAMAG» (Switzerland) apparatus using HPTLC Aluminum sheets Silica gel 60 F254 20 × 20 cm, which were cut to a size of 20 × 10 cm.
Results and discussion. After performing scanning densitometry at 366 and 542 nm, it was established that the chromatography of methanol extracts in a toluene-chloroform-acetone solvent system (2 : 8 : 2 v/v) allows for satisfactory separation and subsequent densitometric quantitative determination of diosgenin. The tracks of plant extracts from the rhizomes and roots of Dioscorea caucasica Lipsky and Dioscorea nipponika Makino were compared with a standard sample of diosgenin.
Conclusion. The study found that the content of the steroid sapogenin diosgenin in air-dried Dioscorea nipponica Makino raw material (286,4–296,3 μg/g) slightly exceeds its content in Dioscorea caucasica Lipsky raw material (257–277,1 μg/g). The quantitative values obtained, calculated separately for peak height and area, show good convergence, confirming the correctness of the method. The developed method of high-performance thin-layer chromatography with densitometric detection of diosgenin can be recommended for routine quantitative analysis of this compound in plant raw materials.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.