pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2026-15-1-2137pharmjournal-2290Research ArticleМЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВANALYTICAL METHODSСтандартизация жидких водно-спиртовых извлечений из облепихи крушиновидной листьевStandardization of liquid aqueous-alcoholic extracts from sea buckthorn leaveshttps://orcid.org/0000-0002-3507-5665КовалёваН. А.KovalevaN. A.

394018, г. Воронеж, Университетская площадь, д. 1

1, Universitetskaya ploshchad, Voronezh, 394018

https://orcid.org/0000-0002-1421-5067ТринееваО. В.TrineevaO. V.

394018, г. Воронеж, Университетская площадь, д. 1

1, Universitetskaya ploshchad, Voronezh, 394018

trineevaov@mail.ruФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Воронежский государственный университет» (ФГБОУ ВО «ВГУ»)Voronezh State University202602032026151172181Copyright © Ковалёва Н.А., Тринеева О.В., 20262026Ковалёва Н.А., Тринеева О.В.Kovaleva N.A., Trineeva O.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/2290Введение

Введение. Листья облепихи крушиновидной в настоящее время используются в фармации в качестве исходного сырья для производства лекарственного растительного препарата (ЛРП) «Гипорамин» противовирусного действия. В научной литературе представлены данные доклинических испытаний экстрактов из листьев, подтверждающие их противовоспалительную, антибактериальную, антиоксидантную, иммуномодулирующую активность, а также имеются данные о потенциальных свойствах гепатопротектора, что связано с фенольной, в том числе флавоноидной, фракцией листьев. Поэтому исследования возможности дополнительных путей внедрения изучаемого сырья в практическую фармацию, а также расширения ассортимента отечественных ЛРП, содержащих комплекс биологически активных веществ (БАВ) листьев, например в виде настоек и жидких экстрактов на основе листьев, с разработкой методик их стандартизации по целевой группе БАВ следует считать актуальными.

Цель

Цель. Целью исследования являлось получение и стандартизация водно-спиртовых извлечений из облепихи крушиновидной листьев.

Материалы и методы

Материалы и методы. Сравнительное исследование проводили для извлечений из высушенных листьев, приготовленных по типу настоек (1 : 5), полученных различными способами, и экстракта жидкого (1 : 1) по стандартным фармакопейным методикам. Все исследуемые извлечения готовили из листьев, заготовленных в 2024 году на территории Воронежской области, фенологической фазы развития, соответствующей стадии технической зрелости плодов. Проводилась разработка методик идентификации и количественного определения флавоноидов методами ТСХ и дифференциальной спектрофотометрии.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. По показателю «сухой остаток» наибольшее количество экстрактивных веществ показала настойка, полученная методом дробной мацерации. Жидкий экстракт демонстрировал самый высокий выход БАВ. Содержание тяжелых металлов не превышало нормативов, рекомендованных Государственной фармакопеей РФ. Содержание флавоноидов максимально было в экстракте жидком (1 : 1). С точки зрения эффективности использования сырья наилучшей формой является настойка, полученная методом перколяции.

Заключение

Заключение. Получены опытные лабораторные образцы жидких водно-спиртовых ЛФ на основе листьев облепихи крушиновидной (настойки, экстракт жидкий), проведена их стандартизация по показателям, изложенным в нормативной документации, разработаны методики количественного определения флавоноидов. Методом ТСХ показан неодинаковый флавоноидный состав водно-спиртовых извлечений, в которые переходит от 11 до 18 БАВ группы флавоноидов. Наиболее высокое содержание флавоноидов отмечено для экстракта жидкого (1 : 1), что позволяет рекомендовать данную форму в качестве оптимальной из исследованных.

Introduction

Introduction. Sea buckthorn leaves are currently used in pharmacy as a raw material for the production of the herbal medicinal product (HMP) "Giporamin" with antiviral action. The scientific literature contains data on preclinical trials of leaf extracts, confirming their anti-inflammatory, antibacterial, antioxidant, immunomodulatory activities, and there are also data on the potential properties of a hepatoprotector, which is associated with the phenolic, including flavonoid, fraction of the leaves. Therefore, studies of the possibility of additional ways of introducing the studied raw materials into practical pharmacy, as well as expanding the range of domestic HMPs containing a complex of biologically active substances (BAS) of leaves, for example, in the form of tinctures and liquid extracts based on leaves, with the development of methods for their standardization according to the target group of BAS should be considered relevant.

Aim

Aim. The aim of the study was to obtain and standardize aqueous-alcoholic extracts from sea buckthorn leaves.

Materials and methods

Materials and methods. A comparative study was conducted for extracts from dried leaves prepared as tinctures (1 : 5) obtained in various ways and liquid extract (1 : 1) according to standard pharmacopoeial methods. All the studied extracts were prepared from leaves harvested in 2024 in the Voronezh region, at the phenological phase of development corresponding to the stage of technical maturity of the fruits. Methods for the identification and quantitative determination of flavonoids using TLC and differential spectrophotometry were developed.

Results and discussion

Results and discussion. According to the «Dry residue» indicator, the tincture obtained by fractional maceration showed the highest amount of extractive substances. The liquid extract demonstrated the highest yield of biologically active substances. The content of heavy metals did not exceed the standards recommended by the State Pharmacopoeia of the Russian Federation. The content of flavonoids was maximum in the liquid extract (1 : 1). From the point of view of the efficiency of using raw materials, the best form is the tincture obtained by the percolation method.

Conclusion

Conclusion. Experimental laboratory samples of liquid aqueous-alcoholic dosage forms based on sea buckthorn leaves (tinctures, liquid extract) were obtained, their standardization was carried out according to the parameters set out in the regulatory documentation, and methods for the quantitative determination of flavonoids were developed. The TLC method showed a different flavonoid composition of aqueous-alcoholic extracts, which contain from 11 to 18 biologically active substances of the flavonoid group. The highest content of flavonoids was noted for the liquid extract (1 : 1), which allows us to recommend this form as the optimal one among those studied.

облепиха крушиновиднаяHippophae rhamnoides L.листьянастойкижидкий экстрактфлавоноидыТСХ-профильsea buckthornHippophae rhamnoides L.leavestincturesliquid extractflavonoidsTLC-profileReferencesМорозов В. И. Культура облепихи крушиновидной (Hippophaё rhamnoides L.) как источник сырья для производства препарата «Гипорамин». Химико-фармацевтический журнал. 2007;41(8):19–21.Morozov V. I. Selecting sea buckthorn culture as a source of raw plant material for manufacturing Giporamin preparation. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2007;41(8):19–21. (In Russ.)Бортникова В. В. Экспериментальное изучение безопасности гипорамина – нового фитопрепарата противовирусного действия. Биомедицина. 2011;3:106–108.Bortnikova V. V. Experimental study safety of hyporamine – a new antiviral fitopreparation. Biomedicine. 2011;3:106–108. (In Russ.)Шейченко О. П., Толкачев О. Н., Шейченко В. И., Шипулина Л. Д., Вичканова С. А., Быков В. А. Способ получения противовирусного препарата «Гипорамин» (варианты). Патент РФ на изобретение № 2197978C1. Заявл. 07.06.2001. Опублик. 10.02.2003. Доступно по: https://patenton.ru/patent/RU2197978C1. Ссылка активна на 27.06.2025.Sheychenko O. P., Tolkachev O. N., Sheychenko V. I., Shipulina L. D., Vichkanova S. A., Bykov V. A. Method for producing the antiviral drug «Giporamin» (variants). Russian Federation Patent RUS No. 2197978C1. Claimed 07.06.2001. Published 10.02.2003. Available at: https://patenton.ru/patent/RU2197978C1. Accessed: 27.06.2025. (In Russ.)Ферубко Е. В., Трумпе Т. Е., Курманова Е. Н., Колхир В. К., Сидельникова Г. Ф., Громакова А. И. Использование фитопрепаратов ФГБНУ ВИЛАР в медицине. Вопросы биологической, медицинской и фармакологической химии. 2016;6(19):11–15.Ferubko E. V., Trumpe T. E., Kurmanova E. N., Kolkhir V. K., Sidel’nikova G. F., Gromakova A. I. Human use of FGBNU VILARS phytopreparations. Problems of Biological, Medical and Pharmaceutical Chemistry. 2016;6(19):11–15. (In Russ.)Enkhtaivan G., John K. M. M., Pandurangan M., Hur J. H., Leutou A. S., Kim D. H. Extreme effects of Seabuckthorn extracts on influenza viruses and human cancer cells and correlation between flavonol glycosides and biological activities of extracts. Saudi Journal of Biological Sciences. 2017;24(7):1646–1656. DOI: 10.1016/j.sjbs.2016.01.004.Enkhtaivan G., John K. M. M., Pandurangan M., Hur J. H., Leutou A. S., Kim D. H. Extreme effects of Seabuckthorn extracts on influenza viruses and human cancer cells and correlation between flavonol glycosides and biological activities of extracts. Saudi Journal of Biological Sciences. 2017;24(7):1646–1656. DOI: 10.1016/j.sjbs.2016.01.004.Kim S.-J., Hwang E., Yi S. S., Song K. D., Lee H.-K., Heo T.-H., Park S.-K., Jung Y. J., Jun H. S. Sea Buckthorn leaf extract inhibits glioma cell growth by reducing reactive oxygen species and promoting apoptosis. Applied biochemistry and biotechnology. 2017;182(4):1663–1674. DOI: 10.1007/s12010-017-2425-4.Kim S.-J., Hwang E., Yi S. S., Song K. D., Lee H.-K., Heo T.-H., Park S.-K., Jung Y. J., Jun H. S. Sea Buckthorn leaf extract inhibits glioma cell growth by reducing reactive oxygen species and promoting apoptosis. Applied biochemistry and biotechnology. 2017;182(4):1663–1674. DOI: 10.1007/s12010-017-2425-4.Kubczak M., Khassenova A. B., Skalski B., Michlewska S., Wielanek M., Sklodowska M., Aralbayeva A. N., Nabiyeva Z. S., Murzakhmetova M. K., Zamaraeva M., Bryszewska M., Ionov M. Hippophae rhamnoides L. leaf and twig extracts as rich sources of nutrients and bioactive compounds with antioxidant activity. Scientific Reports. 2022;12(1):1095. DOI: 10.1038/s41598-022-05104-2.Kubczak M., Khassenova A. B., Skalski B., Michlewska S., Wielanek M., Sklodowska M., Aralbayeva A. N., Nabiyeva Z. S., Murzakhmetova M. K., Zamaraeva M., Bryszewska M., Ionov M. Hippophae rhamnoides L. leaf and twig extracts as rich sources of nutrients and bioactive compounds with antioxidant activity. Scientific Reports. 2022;12(1):1095. DOI: 10.1038/s41598-022-05104-2.Kumar M. S. Y., Dutta R., Prasad D., Misra K. Subcritical water extraction of antioxidant compounds from Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides) leaves for the comparative evaluation of antioxidant. Food Chemistry. 2011;127(3):1309–1316. DOI: 10.1016/j.foodchem.2011.01.088.Kumar M. S. Y., Dutta R., Prasad D., Misra K. Subcritical water extraction of antioxidant compounds from Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides) leaves for the comparative evaluation of antioxidant. Food Chemistry. 2011;127(3):1309–1316. DOI: 10.1016/j.foodchem.2011.01.088.Ma X., Moilanen J., Laaksonen O., Yahg W., Tenhu E., Yang B. Phenolic compounds and antioxidant activities of tea-type infusion processed from sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) leaves. Food Chemistry. 2019;272:1–11. DOI: 10.1016/j.foodchem.2018.08.006.Ma X., Moilanen J., Laaksonen O., Yahg W., Tenhu E., Yang B. Phenolic compounds and antioxidant activities of tea-type infusion processed from sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) leaves. Food Chemistry. 2019;272:1–11. DOI: 10.1016/j.foodchem.2018.08.006.Okuda T., Yoshida T., Ashida M., Kazaki K. Casuariin, stachyurin and strictinin, new ellagitannins from Casuarina stricta and Stachyurus praecox. Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1982;30(2):766–769. DOI: 10.1248/cpb.30.766.Okuda T., Yoshida T., Ashida M., Kazaki K. Casuariin, stachyurin and strictinin, new ellagitannins from Casuarina stricta and Stachyurus praecox. Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 1982;30(2):766–769. DOI: 10.1248/cpb.30.766.Skalski B., Kontek B., Olas B., Zuchowski J., Stochmal A. Phenolic fraction and nonpolar fraction from sea buckthorn leaves and twigs: Chemical profile and biological activity. Future Medicinal Chemistry. 2018;10(20):2381–2394. DOI: 10.4155/fmc-2018-0144.Skalski B., Kontek B., Olas B., Zuchowski J., Stochmal A. Phenolic fraction and nonpolar fraction from sea buckthorn leaves and twigs: Chemical profile and biological activity. Future Medicinal Chemistry. 2018;10(20):2381–2394. DOI: 10.4155/fmc-2018-0144.Suvanto J., Tähtinen P., Valkamaa S., Engström M. T., Karonen M., Salminen J.-P. Variability in Foliar ellagitannins of Hippophae rhamnoides L. and identification of a new ellagitannin, Hippophaenin C. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2018;66(3):613–620. DOI: 10.1021/acs.jafc.7b04834.Suvanto J., Tähtinen P., Valkamaa S., Engström M. T., Karonen M., Salminen J.-P. Variability in Foliar ellagitannins of Hippophae rhamnoides L. and identification of a new ellagitannin, Hippophaenin C. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2018;66(3):613–620. DOI: 10.1021/acs.jafc.7b04834.Yoshida T., Hatano T., Ito H., Okuda T. Chemical and biological perspectives of ellagitannin oligomers from medicinal plants. Studies in Natural Products Chemistry. 2000;23:395–453. DOI: 10.1016/S1572-5995(00)80134-9.Yoshida T., Hatano T., Ito H., Okuda T. Chemical and biological perspectives of ellagitannin oligomers from medicinal plants. Studies in Natural Products Chemistry. 2000;23:395–453. DOI: 10.1016/S1572-5995(00)80134-9.Yoshida T., Tanaka K., Chen X.-M., Okuda T. Tannins from Hippophae rhamnoides. Phytochemistry. 1991;30(2):663–666. DOI: 10.1016/0031-9422(91)83748-A.Yoshida T., Tanaka K., Chen X.-M., Okuda T. Tannins from Hippophae rhamnoides. Phytochemistry. 1991;30(2):663–666. DOI: 10.1016/0031-9422(91)83748-A.Айтуарова А. Ш., Жусупова Г. Е. Качественная и количественная оценка состава биологически активных веществ надземной части растения вида Hippophaё rhamnoides L. Известия научно-технического общества «КАХАК». 2015;4(51):4–10.Aytuarova A. Sh., Zhusupova G. E. Qualitative and quantitative assessment of the composition of biologically active substances of the aboveground part of the plant species Hippophaё rhamnoides L. Bulletin of the Scientific and Technical Society «KAKHAK». 2015;4(51):4–10. (In Russ.)Тарасов А. В., Бухаринова М. А., Хамзина Е. И. Определение антиоксидантной активности водных экстрактов некоторых растений Уральского региона. Химия пищи и гигиена питания. 2018;3(2):31–38. DOI: 10.29141/2500-1922-2018-3-2-5.Tarasov A. V., Bukharinova M. A., Khamzina E. I. Aqueous Extracts Antioxidant Activity Determination of Some Plants from the Ural Region. Food Chemistry and Hygiene. 2018;3(2):31–38. (In Russ.) DOI: 10.29141/2500-1922-2018-3-2-5.Мурзахметова М. К., Утегалиева Р. С., Аралбаева А. Н., Лесова Ж. Т. Исследование антиоксидантных и мембранопротекторных свойств экстрактов облепихи. Actualscience. 2015;1(5(5)):26–28.Murzakhmetova M. K., Utegalieva R. S., Aralbaeva A. N., Lesova Z. T. Study of antioxidant and membrane-protective properties of sea buckthorn extracts. Actualscience. 2015;1(5(5)):26–28. (In Russ.)Кароматов И. Д., Букаев М. К. Облепиха как адаптогенное, повышающее физическую силу лекарственное растение. Биология и интегративная медицина. 2018;6(23):37–47.Karomatov I. D., Bukaev M. K. Sea buckthorn as an adaptogenic medicinal plant that increases physical strength. Biology and Integrative Medicine. 2018;6(23):37–47. (In Russ.)Vijayaraghavan R., Gautam A., Kumar O., Pant S. C., Sharma M., Singh S., Kumar H. T., Singh A. K., Nivsarkar M., Kaushik M. P., Sawhney R. C., Chaurasia O. P., Prasad G. B. K. S. Protective effect of ethanolic and water extracts of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) against the toxic effects of mustard gas. Indian Journal of Experimental Biology. 2006;44(10):821–831.Vijayaraghavan R., Gautam A., Kumar O., Pant S. C., Sharma M., Singh S., Kumar H. T., Singh A. K., Nivsarkar M., Kaushik M. P., Sawhney R. C., Chaurasia O. P., Prasad G. B. K. S. Protective effect of ethanolic and water extracts of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) against the toxic effects of mustard gas. Indian Journal of Experimental Biology. 2006;44(10):821–831.Usha T., Middha S. K., Goyal A. K., Karthik M., Manoj D., Faizan S., Goyal P., Prashanth H., Pande V. Molecular docking studies of anti-cancerous candidates in Hippophae rhamnoides and Hippophae salicifolia. The Journal of Biomedical Research. 2014;28(5):406–415. DOI: 10.7555/JBR.28.20130110.Usha T., Middha S. K., Goyal A. K., Karthik M., Manoj D., Faizan S., Goyal P., Prashanth H., Pande V. Molecular docking studies of anti-cancerous candidates in Hippophae rhamnoides and Hippophae salicifolia. The Journal of Biomedical Research. 2014;28(5):406–415. DOI: 10.7555/JBR.28.20130110.Saggu S., Divekar H. M., Gupta V., Sawhney R. C., Banerjee P. K., Kumar R. Adaptogenic and safety evaluation of seabuckthorn (Hippophae rhamnoides) leaf extract: a dose dependent study. Food and Chemical Toxicology. 2007;45(4):609–617. DOI: 10.1016/j.fct.2006.10.008.Saggu S., Divekar H. M., Gupta V., Sawhney R. C., Banerjee P. K., Kumar R. Adaptogenic and safety evaluation of seabuckthorn (Hippophae rhamnoides) leaf extract: a dose dependent study. Food and Chemical Toxicology. 2007;45(4):609–617. DOI: 10.1016/j.fct.2006.10.008.Богомолова Н. И., Лупин М. В. Уровень биологического потенциала продуктивности облепихи крушиновидной в естественных и промышленных насаждениях России. Вестник аграрной науки. 2021;6(93):62–67. DOI: 10.17238/issn2587-666X.2021.6.62.Bogomolova N. I., Lupin M. V. Biological potential of sea buckthorn productivity in natural and industrial stands of Russia. Bulletin of Agrarian Science. 2021;6(93):62–67. (In Russ.) DOI: 10.17238/issn2587-666X.2021.6.62.Новрузов Э. Н., Мамедов З. Г., Мустафаева Л. А., Мирюсифова Х. М., Зейналова А. М. Состав и содержание флавоноидов листьев Hippophae rhamnoides L., произрастающих в Азербайджане. Химия растительного сырья. 2018;3:209–214. DOI: 10.14258/jcprm.2018033772.Novruzov E. N., Mamedov Z. G., Mustafaeva L. A., Miryusifova Kh. M., Zeynalova A. M. Composition and content of flavonoids of leaves of Hippophae rhamnoides L., relating in Azerbaijan. Chemistry of plant raw materials. 2018;3:209–214. (In Russ.) DOI: 10.14258/jcprm.2018033772.Ковалёва Н. А., Тринеева О. В., Бузлама А. В., Кузнецов А. Ю. Фармакологическая активность облепихи крушиновидной листьев: in silico и in vivo. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2023;12(3):174–188. DOI 10.33380/2305-2066-2023-12-3-174-188.Kovaleva N. A., Trineeva O. V., Buzlama A. V., Kuznetsov A. Yu. Pharmacological activity of sea buckthorn leaves: in silico and in vivo. Drug development & registration. 2023;12(3):174-188. (In Russ.) DOI: 10.33380/2305-2066-2023-12-3-174-188.Ковалёва Н. А., Тринеева О. В., Чувикова И. В., Сливкин А. И. Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в листьях облепихи крушиновидной методом спектрофотометрии. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2023;13(2):216–226. DOI: 10.30895/1991-2919-2023-531.Kovaleva N. A., Trineeva O. V., Chuvikova I. V., Slivkin A. I. Development and Validation of a Procedure for Quantitative Determination of Flavonoids in Sea Buckthorn Leaves by Spectrophotometry. Bulletin of the Scientific Centre for Expert Evaluation of Medicinal Products. Regulatory Research and Medicine Evaluation. 2023;13(2):216–226. (In Russ.) DOI: 10.30895/1991-2919-2023-531.Кабанов Д. С. Качественный состав и противоопухолевое действие полифенольных соединений из листьев Hippophae rhamnoides L. при использовании разных экстрагентов (мини-обзор). В сб.: Сборник материалов Международной конференции «Достижения и перспективы создания новых лекарственных средств растительного происхождения». 2024. С. 408–413.Kabanov D. S. Qualitative composition and antitumor effect of polyphenolic compounds from Hippophae rhamnoides L. leaves using different extractants (mini-review). In: Collection of materials of the International Conference "Achievements and prospects for creating new herbal medicines". 2024. P. 408–413. (In Russ.)Кабанов Д. С., Рубцова Т. А., Балеев Д. Н. Влияние гидролизуемых таннинов из листьев Hippophae rhamnoides L. на метаболическую активность кератиноцитов человека (НаСаТ). В сб.: Сборник научных трудов Международной научно-практической конференции «Достижения и перспективы создания новых лекарственных растительных препаратов». 2023. С. 349–357.Kabanov D. S., Rubtsova T. A., Baleev D. N. Effect of hydrolyzable tannins from Hippophae rhamnoides L. leaves on the metabolic activity of human keratinocytes (НаСаТ). In: Collection of scientific papers of the International scientific and practical conference "Achievements and prospects for creating new herbal medicines". 2023. P. 349–357. (In Russ.)Тринеева О. В., Ковалёва Н. А., Сафонова Е. Ф., Сливкин А. И. Применение ТСХ для оценки профиля флавоноидов листьев облепихи крушиновидной различных фаз заготовки. Сорбционные и хроматографические процессы. 2023;23(4):547–557. DOI: 10.17308/sorpchrom.2023.23/11564.Trineeva O. V., Kovaleva N. A., Safonova E. F., Slivkin A. I. Application of TLC for the assessment of the flavonoid profile of sea buckthorn leaves during different phases of their preparation. Sorbtsionnye i khromatograficheskie protsessy. 2023;23(4):547–557. (In Russ.) DOI: 10.17308/sorpchrom.2023.23/11564.Гейсс Ф. Основы тонкослойной хроматографии. М.: Мир; 1999. 405 с.Geyss F. Fundamentals of thin-layer chromatography. Moscow: Mir; 1999. 405 p. (In Russ.)Рудаков О. Б., Востров И. А., Федоров С. В., Филиппов А. А., Селеменев В. Ф., Приданцев А. А. Спутник хроматографиста. Методы жидкостной хроматографии. Воронеж: Водолей; 2004. 528 с.Rudakov O. B., Vostrov I. A., Fedorov S. V., Filippov A. A., Selemenev V. F., Pridantsev A. A. Chromatographer’s Companion. Liquid Chromatography Methods. Voronezh: Vodoley; 2004. 528 p. (In Russ.)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.