198515, г. Санкт-Петербург, поселок Стрельна, ул. Связи, д. 34-А
34-A, Svyazi str., Strelna settlement, Saint-Petersburg, 198515
198515, г. Санкт-Петербург, поселок Стрельна, ул. Связи, д. 34-А127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20/1
34-A, Svyazi str., Strelna settlement, Saint-Petersburg, 19851520/1, Delegatskaya str., Moscow, 127473
198515, г. Санкт-Петербург, поселок Стрельна, ул. Связи, д. 34-А
34-A, Svyazi str., Strelna settlement, Saint-Petersburg, 198515
198515, г. Санкт-Петербург, поселок Стрельна, ул. Связи, д. 34-А127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20/1
34-A, Svyazi str., Strelna settlement, Saint-Petersburg, 19851520/1, Delegatskaya str., Moscow, 127473
198515, г. Санкт-Петербург, поселок Стрельна, ул. Связи, д. 34-А
34-A, Svyazi str., Strelna settlement, Saint-Petersburg, 198515
Введение. Тирзепатид – это молекула, способная контролировать уровень глюкозы в крови за счет объединения двойного агонизма рецепторов глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP) и глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1). GLP-1 и GIP – инкретиновые гормоны, участвующие в регуляции гликемии и энергетического обмена. Их комбинированная агонизация усиливает инсулиновый ответ, снижает секрецию глюкагона и аппетит, что делает ее эффективной стратегией при лечении сахарного диабета 2 типа (СД2) и ожирения. Специфическую биологическую активность таких соединений можно оценить in vitro на клеточных линиях, экспрессирующих рецепторы GLP-1R или GIPR.
Цель. Провести валидацию методики определения активации рецептора GLP-1R in vitro с использованием клеточной линии при стимуляции тирзепатидом в тесте «Кальциевые токи». Данный подход необходим для последующего исследования сопоставимости биоэквивалентных препаратов.
Материалы и методы. В качестве модели была применена генно-инженерная клеточная линия HTS163L, экспрессирующая человеческий рецептор GLP-1. Активацию рецептора регистрировали по изменению флуоресцентного сигнала, вызванного увеличением внутриклеточной концентрации кальция, после инкубации клеток с тирзепатидом в различных концентрациях. Валидация методики проводилась в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи РФ, ICH и EMA. Статистическую обработку полученных результатов проводили с применением программного обеспечения MARS (BMG LABTECH).
Результаты и обсуждение. Данная методика показала высокий уровень специфичности (сигнал плацебо <2 % от сигнала препарата), удовлетворительный предел количественного определения (сигнал превышает сигнал холостой пробы на 43 %), хорошую линейность (R2 = 0,981), правильность (в пределах 77–119 % от номинального EC50) и прецизионность (CV ≤ 5 % внутри серии, ≤15 % между сериями). Все исследуемые валидационные показатели соответствовали установленным критериям приемлемости, что подтверждает корректность выбранного подхода.
Заключение. Предложенный метод обладает высокой чувствительностью и воспроизводимостью, что делает его пригодным для функционального анализа биологической активности агонистов рецептора GLP-1, включая тирзепатид, в in-vitro-моделях.
Introduction. Tirzepatide is a molecule capable of controlling blood glucose levels by combining dual agonism of the glucose-dependent insulinotropic polypeptide (GIP) and glucagon-like peptide-1 (GLP-1) receptors. GLP-1 and GIP are incretin hormones involved in the regulation of glycemia and energy metabolism. Their combined agonism enhances the insulin response, reduces glucagon secretion and appetite, making it an effective strategy for the treatment of type 2 diabetes mellitus (T2DM) and obesity. The specific biological activity of such compounds can be evaluated in vitro using cell lines expressing GLP-1R or GIPR.
Aim. To validate a method for determining GLP-1R receptor activation in vitro using a cell line stimulated with tirzepatide in the "Calcium Flux" assay. This approach is necessary for subsequent studies of the comparability of bioequivalent drugs.
Materials and methods. A genetically engineered HTS163L cell line expressing the human GLP-1 receptor was used as the model. Receptor activation was recorded by changes in fluorescence signal caused by an increase in intracellular calcium concentration after incubation of cells with tirzepatide at various concentrations. Method validation was carried out in accordance with the requirements of the State Pharmacopoeia of the Russian Federation, ICH, and EMA. Statistical analysis of the results was performed using MARS software (BMG LABTECH).
Results and discussion. The applied method demonstrated a high level of specificity (placebo signal <2 % of the drug signal), a satisfactory limit of quantification (signal exceeded the blank by 43 %), good linearity (R2 = 0.981), accuracy (within 77–119 % of nominal EC50), and precision (CV ≤ 5 % within runs, ≤15 % between runs). All validation parameters met the established acceptance criteria, confirming the correctness of the chosen approach.
Conclusion. The proposed method demonstrates high sensitivity and reproducibility, making it suitable for functional analysis of the biological activity of GLP-1 receptor agonists, including tirzepatide, in in vitro models.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.