pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2026-15-4-2335pharmjournal-2473Research ArticleМЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВANALYTICAL METHODSРазработка и валидация аналитической методики количественного определения 2-[2-[(5RS)-5-(гидроксиметил)-3-метил-1,3-оксазолидин-2-илиден]-2-цианоэтилиден]-1H-индол-3(2H)-она в лекарственном препарате методом ВЭЖХ-ДМДDevelopment and validation of an analytical method for the quantitative determination of 2-[2-[(5RS)-5-(hydroxymethyl)-3-methyl-1,3-oxazolidin-2-ylidene]-2-cyanoethylidene]-1H-indol-3(2H)-one in the medicinal product by HPLC-DADhttps://orcid.org/0009-0004-9694-5259ШинкинК. Д.ShinkinK. D.

634021, г. Томск, ул. Елизаровых, д. 79/4; 634050, г. Томск, Московский тракт, д. 2

79/4, Elizarovikh str., Tomsk, 634021; 2, Moskovsky trakt, Tomsk, 634050

shinkin.kostya@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5505-7141КривощековС. В.KrivoshchekovS. V.

634050, г. Томск, Московский тракт, д. 2

2, Moskovsky trakt, Tomsk, 634050

https://orcid.org/0000-0002-8707-2394БондаревА. А.BondarevA. A.

634021, г. Томск, ул. Елизаровых, д. 79/4

79/4, Elizarovikh str., Tomsk, 634021

https://orcid.org/0000-0002-5145-2184БыковВ. В.BykovV. V.

634021, г. Томск, ул. Елизаровых, д. 79/4; 634050, г. Томск, Московский тракт, д. 2

79/4, Elizarovikh str., Tomsk, 634021; 2, Moskovsky trakt, Tomsk, 634050

https://orcid.org/0000-0003-4597-1743КаминскийИ. П.KaminskyI. P.

634050, г. Томск, Московский тракт, д. 2

2, Moskovsky trakt, Tomsk, 634050

https://orcid.org/0000-0001-6112-403XКнязевА. С.KnyazevA. S.

634050, г. Томск, пр. Ленина, д. 36

36, prospekt Lenina, Tomsk, 634050

https://orcid.org/0000-0002-2153-7945БелоусовМ. В.BelousovM. V.

634050, г. Томск, Московский тракт, д. 2

2, Moskovsky trakt, Tomsk, 634050

Общество с ограниченной ответственностью «Инновационные Фармакологические Разработки» (ООО «Ифар»); Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СибГМУ Минздрава России)РоссияLimited Liability Company "Innovative Pharmacology Research" (IPHAR); Siberian State Medical UniversityRussian FederationФедеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СибГМУ Минздрава России)РоссияSiberian State Medical UniversityRussian FederationОбщество с ограниченной ответственностью «Инновационные Фармакологические Разработки» (ООО «Ифар»)РоссияLimited Liability Company "Innovative Pharmacology Research" (IPHAR)Russian FederationФедеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Томский государственный университет» (НИ ТГУ; ТГУ)РоссияNational Research Tomsk State UniversityRussian Federation20260210202600Принято в печать2473Copyright © Шинкин К.Д., Кривощеков С.В., Бондарев А.А., Быков В.В., Каминский И.П., Князев А.С., Белоусов М.В., 20262026Шинкин К.Д., Кривощеков С.В., Бондарев А.А., Быков В.В., Каминский И.П., Князев А.С., Белоусов М.В.Shinkin K.D., Krivoshchekov S.V., Bondarev A.A., Bykov V.V., Kaminsky I.P., Knyazev A.S., Belousov M.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/2473Введение

Введение. Производное индолинона – 2-[2-[(5RS)-5-(гидроксиметил)-3-метил-1,3-оксазолидин-2-илиден]-2-цианоэтилиден]-1Н-индол-3(2Н)-он (далее – GRS) – новый стимулятор растворимой гуанилатциклазы, является действующим веществом в новом антитромботическом лекарственном препарате, капсулы, 20 мг. В фармацевтической разработке и промышленном выпуске лекарственных препаратов многоступенчатый контроль качества выступает детерминирующим фактором их эффективности и безопасности. В связи с этим разработка и валидация экспрессных и прецизионных аналитических методик является актуальной научно-практической задачей.

Цель

Цель. Разработка и валидация методики количественного определения действующего вещества (GRS) в лекарственном препарате, капсулы, 20 мг, с применением метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с диодно-матричным детектором.

Материалы и методы

Материалы и методы. В качестве объектов исследования использовали: лекарственный препарате на основе GRS, капсулы, 20 мг, используемые при его производстве вспомогательные вещества и АФС GRS, субстанция-порошок. Условия хроматографирования: хроматографическая колонка Kromasil C18, 250 × 4,6 мм, 5 мкм; температура термостата – 40 °С; длина волны детекции – 372 нм; подвижная фаза А – ацетатный буфер с pH 4,0, подвижная фаза Б – метанол. Градиентный режим элюирования в течение 17 мин.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Разработанная методика валидирована по показателям «специфичность», «линейность в аналитическом диапазоне», «правильность», «прецизионность» и «робастность».

Заключение

Заключение. Разработанная методика количественного определения действующего вещества GRS в лекарственном препарате, капсулы, 20 мг, методом ВЭЖХ обладает приемлемыми значениями валидационных характеристик, а также экспрессностью, простотой пробоподготовки, что позволяет использовать ее в рутинном анализе для контроля качества при производстве.

Introduction

Introduction. The indolinone derivative 2-[2-[(5RS)-5-(hydroxymethyl)-3-methyl-1,3-oxazolidin-2-ylidene]-2-cyanoethylidene]-1H-indol-3(2H)-one (hereinafter referred to as GRS) is a novel soluble guanylate cyclase stimulator and serves as the active pharmaceutical ingredient in the new antithrombotic drug, capsules 20 mg. In pharmaceutical development and industrial manufacturing of medicinal products, multistage quality control is a determining factor for their efficacy and safety. Therefore, the development and validation of rapid and precise analytical methods is an important scientific and practical task.

Aim

Aim. To develop and validate a method for the quantitative determination of the active substance (GRS) in the drug product (capsules, 20 mg) using high-performance liquid chromatography with a diode array detector.

Materials and methods

Materials and methods. The study objects included the drug containing GRS, (capsules, 20 mg), excipients used in its manufacturing, and the GRS API (powder). Chromatographic conditions were as follows: Kromasil C18 chromatographic column (250 × 4.6 mm, 5 μm); column oven temperature 40 °C; detection wavelength 372 nm; mobile phase A – acetate buffer (pH 4.0); mobile phase B – methanol. Gradient elution mode was performed over 17 min.

Results and discussion

Results and discussion. The developed method has been validated according to the following parameters: specificity, linearity within the analytical range, accuracy, precision, and robustness.

Conclusion

Conclusion. The developed method of high-performance liquid chromatography for the quantitative determination of the active substance GRS in the drug product (capsules, 20 mg), has acceptable validation characteristics and is rapid and simple in terms of sample preparation, which allows it to be used in routine analysis for quality control during production.

разработка аналитической методикипроизводное индолинонаGRSвалидацияВЭЖХколичественное определениеdevelopment of an analytical methodologyindolinone derivativeGRSvalidationHPLCquantitative determinationReferencesRoth G. A., Mensah G. A., Johnson C. O., Addolorato G., Ammirati E., Baddour L. M., Barengo N. C., Beaton A. Z., Benjamin E. J., Benziger C. P., Bonny A., Brauer M., Brodmann M., Cahill T.J., Carapetis J., Catapano A. L., Chugh S. S., Cooper L. T., Coresh J., Criqui M., DeCleene N., Eagle K. A., Emmons-Bell S., Feigin V. L., Fernandez-Sola J., Fowkes G., Gakidou E., Grundy S. M., He F. J., Howard G., Hu F., Inker L., Karthikeyan G., Kassebaum N., Koroshetz W., Lavie C., Lloyd-Jones D., Lu H. S., Mirijello A., Temesgen A. M., Mokdad A., Moran A. E., Muntner P., Narula J., Neal B., Ntsekhe M., Moraes de Oliveira G., Otto C., Owolabi M., Pratt M., Rajagopalan S., Reitsma M., Ribeiro A. L. P., Rigotti N., Rodgers A., Sable C., Shakil S., Sliwa-Hahnle K., Stark B., Sundström J., Timpel P., Tleyjeh I. M., Valgimigli M., Vos T., Whelton P. K., Yacoub M., Zuhlke L., Murray C., Fuster V. Global burden of cardiovascular diseases and risk factors, 1990–2019: update from the GBD study. Journal of the American College of Cardiology. 2020;76(25):2982–3021. https://doi.org/10.1016/j.jacc.2020.11.010Roth G. A., Mensah G. A., Johnson C. O., Addolorato G., Ammirati E., Baddour L. M., Barengo N. C., Beaton A. Z., Benjamin E. J., Benziger C. P., Bonny A., Brauer M., Brodmann M., Cahill T.J., Carapetis J., Catapano A. L., Chugh S. S., Cooper L. T., Coresh J., Criqui M., DeCleene N., Eagle K. A., Emmons-Bell S., Feigin V. L., Fernandez-Sola J., Fowkes G., Gakidou E., Grundy S. M., He F. J., Howard G., Hu F., Inker L., Karthikeyan G., Kassebaum N., Koroshetz W., Lavie C., Lloyd-Jones D., Lu H. S., Mirijello A., Temesgen A. M., Mokdad A., Moran A. E., Muntner P., Narula J., Neal B., Ntsekhe M., Moraes de Oliveira G., Otto C., Owolabi M., Pratt M., Rajagopalan S., Reitsma M., Ribeiro A. L. P., Rigotti N., Rodgers A., Sable C., Shakil S., Sliwa-Hahnle K., Stark B., Sundström J., Timpel P., Tleyjeh I. M., Valgimigli M., Vos T., Whelton P. K., Yacoub M., Zuhlke L., Murray C., Fuster V. Global burden of cardiovascular diseases and risk factors, 1990–2019: update from the GBD study. Journal of the American College of Cardiology. 2020;76(25):2982–3021. https://doi.org/10.1016/j.jacc.2020.11.010Timmis A., Aboyans V., Vardas P., Townsend N., Torbica A., Kavousi M., Boriani G., Huculeci R., Kazakiewicz D., Scherr D., Karagiannidis E., Cvijic M., Kapłon-Cieślicka A., Ignatiuk B., Raatikainen P., De Smedt D., Wood A., Dudek D., Van Belle E., Weidinger F., ESC National Cardiac Societies. European Society of Cardiology: the 2023 atlas of cardiovascular disease statistics. European Heart Journal. 2024;45(38):4019–4062. https://doi.org/10.1093/eurheartj/ehae466Timmis A., Aboyans V., Vardas P., Townsend N., Torbica A., Kavousi M., Boriani G., Huculeci R., Kazakiewicz D., Scherr D., Karagiannidis E., Cvijic M., Kapłon-Cieślicka A., Ignatiuk B., Raatikainen P., De Smedt D., Wood A., Dudek D., Van Belle E., Weidinger F., ESC National Cardiac Societies. European Society of Cardiology: the 2023 atlas of cardiovascular disease statistics. European Heart Journal. 2024;45(38):4019–4062. https://doi.org/10.1093/eurheartj/ehae466Быков В. В., Быкова А. В., Станкевич С. А., Алиев О. И., Сидехменова А. В., Дунаева О. И., Хазанов В. А., Венгеровский А. И., Удут В. В. Фармакологические эффекты нового стимулятора растворимой гуанилатциклазы при экспериментальной легочной артериальной гипертензии. Бюллетень сибирской медицины. 2023;22(1):14–22. https://doi.org/10.20538/1682-0363-2023-1-14-22Bykov V. V., Bykova A. V., Stankevich S. A., Aliev O. I., Sidehmenova A. V., Dunaeva O. I., Hazanov V. A., Vengerovskii A. I., Udut V. V. Pharmacological effects of a novel soluble guanylate cyclase stimulator in experimental pulmonary arterial hypertension. Bulletin of Siberian Medicine. 2023;22(1):14–22. (In Russ.) https://doi.org/10.20538/1682-0363-2023-1-14-22Быков В. В., Смольякова В. И., Чернышева Г. А., Алиев О. И., Анищенко А. М., Сидехменова А. В., Дунаева О. И., Станкевич С. А., Хазанов В. А. Влияние нового антитромботического средства GRS – стимулятора растворимой гуанилатциклазы на эндотелиальную дисфункцию у крыс после инфаркта миокарда. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2021;172(12):707–710. https://doi.org/10.47056/0365-9615-2021-172-12-707-710Bykov V. V., Smol'yakova V. I., Chernysheva G. A., Aliev O. I., Anishchenko A. M., Sidekhmenova A. V., Dunaeva O. I., Stankevich S. A., Khazanov V. A. Effects of a new antithrombotic drug GRS, a soluble guanylate cyclase stimulator, on endothelial dysfunction in rats with myocardial infarction. Bulletin of Experimental Biology and Medicine. 2021;172(12):707–710. (In Russ.) https://doi.org/10.47056/0365-9615-2021-172-12-707-710Мартынов А. И., Барбараш О. Л., Кобалава Ж. Д., Малявин А. Г., Бощенко А. А., Венгеровский А. И., Затейщиков Д. А., Чесникова А. И., Якушин С. С., Кашталап В. В., Хазанов В. А., Быков В. В., Ларченко В. В. Резолюция совета экспертов «Перспективные возможности применения препарата GRS в терапевтической практике». Терапия. 2024;10(5):144–149. https://doi.org/10.18565/therapy.2024.5.144-149Martynov A. I., Barbarash O. L., Kobalava Zh. D., Malyavin A. G., Boshchenko A. A., Vengerovsky A. I., Zateyshchikov D. A., Chesnikova A. I., Yakushin S. S., Kashtalap V. V., Khazanov V. A., Bykov V. V., Larchenko V. V. Expert Council Resolution: «Promising Opportunities for the Use of the Drug GRS in Therapeutic Practice». Therapy. 2024;10(5):144–149. (In Russ.) https://doi.org/10.18565/therapy.2024.5.144-149Temova Rakuša Ž., Grobin A., Roškar R. A comprehensive approach for the simultaneous analysis of all main water-soluble vitamins in multivitamin preparations by a stability-indicating HPLC-DAD method. Food Chemistry. 2021;337:127768. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.127768Temova Rakuša Ž., Grobin A., Roškar R. A comprehensive approach for the simultaneous analysis of all main water-soluble vitamins in multivitamin preparations by a stability-indicating HPLC-DAD method. Food Chemistry. 2021;337:127768. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.127768Debnath S., Das M., Mondal S., Sarkar B. K., Babu G. Advances in chromatography: contemporary techniques and applications. Essential Chem. 2025;2(1):1–27. https://doi.org/10.1080/28378083.2025.2466624Debnath S., Das M., Mondal S., Sarkar B. K., Babu G. Advances in chromatography: contemporary techniques and applications. Essential Chem. 2025;2(1):1–27. https://doi.org/10.1080/28378083.2025.2466624Петраков А. И., Кривощеков С. В., Гурьев А. М., Белоусов М. В. Получение и аттестация первичного стандартного образца 6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-F]ксантина. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2025;15(6):655–663. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2025-15-6-655-663Petrakov A. I., Krivoshchekov S. V., Guryev A. M., Belousov M. V. Obtaining and Certifying Primary Reference Standard of 6,8-Dimethyl-2-Piperidinomethyl-2,3-Dihydrothiazolo[2,3-F]xanthine. Regulatory Research and Medicine Evaluation. 2025;15(6):655–663. (In Russ.) https://doi.org/10.30895/1991-2919-2025-15-6-655-663Граник В. Г., Рябова С. Ю., Паршин В. А., Михайлова Л. А., Григорьев Н. Б. Новое антитромботическое и антиатеросклеротическое средство и способ его получения (варианты). Патент РФ на изобретение № RU 2483066C1. 27.05.2013. Доступно по: https://patents.google.com/patent/RU2483066C1/ru Ссылка активна на 23.07.2026Granik V. G., Ryabova S. Yu., Parshin V. A., Mikhailova L. A., Grigor’ev N. B. Novel antithrombotic and anti-atherosclerotic agent and method for producing the same (variants). Patent RUS № 2483066C1. 27.05.2013. Available at: https://patents.google.com/patent/RU2483066C1/ru Accessed: 23.07.2026. (In Russ.)Эпштейн Н. А. О стрессовых экспериментах при разработке / усовершенствовании аналитических методик и технологий лекарственных субстанций и препаратов. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016;(3):118–132.Epshtein N. A. About stress experiments by developing / improving analytical methods and technology of drug substances and medicines. Drug development & registration. 2016;(3):118–132. (In Russ.)Liu X., Bordunov A. V., Pohl C. A. Preparation and evaluation of a hydrolytically stable amide-embedded stationary phase. Journal of Chromatography A. 2006;1119(1–2):128–134. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2005.11.086Liu X., Bordunov A. V., Pohl C. A. Preparation and evaluation of a hydrolytically stable amide-embedded stationary phase. Journal of Chromatography A. 2006;1119(1–2):128–134. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2005.11.086Барам Г. И., Грачев С. А. Использование перхлората лития при выделении и анализе олиго- и полинуклеотидов. Биоорганическая химия. 1985;11(10):1420–1422.Baram G. I., Grachev S. A. Use of lithium perchlorate in the isolation and analysis of oligo- and polynucleotides. Russian Journal of Bioorganic Chemistry. 1985;11(10):1420–1422. (In Russ.)Азарова И. Н., Барам Г. И. Применение перхлората лития в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии аминосоединений. Сорбционные и хроматографические процессы. 2014;14(1):65–74.Azarova I. N., Baram G. I. Application of lithium perchlorate in reversed-phase high-performance liquid chromatography of amino compounds. Sorbtsionnye i khromatograficheskie protsessy. 2014;14(1):65–74. (In Russ.)Эпштейн Н. А. Валидация хроматографических методик: контроль чистоты пиков и специфичности методик с использованием диодно-матричных детекторов (обзор). Разработка и регистрация лекарственных средств. 2020;9(3):129–136. https://doi.org/10.33380/2305-2066-2020-9-3-129-136Epshtein N. A. Validation of Chromatographic Methods: Checking the Peak Purity and the Specificity of Methods with Diode Array Detectors (Review). Drug development & registration. 2020;9(3):129–136. (In Russ.) https://doi.org/10.33380/2305-2066-2020-9-3-129-136Эпштейн Н. А., Севастьянова В. Л., Королева А. И. Исследование робастности при валидации методик ВЭЖХ и УЭЖХ: современный подход, включающий анализ рисков. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2018;(1):96–109.Epshtein N. A., Sevastianova V. L., Koroleva A. I. Investigation of robustness at validation of hplc and uplc methods: a modern approach including risk analysis. Drug development & registration. 2018;(1):96–109. (In Russ.)

The authors declare that there are no conflicts of interest present.