pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2020-9-1-40-45pharmjournal-753Research ArticleМЕТОДЫ АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВANALYTICAL METHODSПрименение люминесцентной микроскопии в анализе анатомо-диагностических признаков плодов облепихи крушиновиднойApplication of Luminescent Microscopy in Analysis of Anatomic-diagnostic Signs of Fruits of Sea Buckthornhttps://orcid.org/0000-0002-1421-5067ТринееваО. В.TrineevaO. V.

Тринеева Ольга Валерьевна

394006, г. Воронеж, Университетская пл., д. 1

Olga V. Trineeva

1, University Square, Voronezh, 394006

trineevaov@mail.ruГудковаА. А.GudkovaA. A.

394006, г. Воронеж, Университетская пл., д. 1

Alevtina A. Gudkova

1, University Square, Voronezh, 394006

alinevoroneg@mail.ruРудаяМ. А.RudayaM. A.

394006, г. Воронеж, Университетская пл., д. 1

Margarita A. Rudaya

1, University Square, Voronezh, 394006

margaritkazmin@yandex.ruФГБОУ ВО «Воронежский государственный университет»Voronezh State University202015012020914045Copyright © Тринеева О.В., Гудкова А.А., Рудая М.А., 20202020Тринеева О.В., Гудкова А.А., Рудая М.А.Trineeva O.V., Gudkova A.A., Rudaya M.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/753Введение

Введение. Облепиха крушиновидная (Hippophae rhamnoides), семейства Лоховые (Eleagnaceae) – перспективный источник биологически активных веществ, традиционным сырьем которого являются плоды. В существующей нормативной документации (НД) отсутствует такой показатель подлинности и доброкачественности плодов как «микроскопия». Несмотря на имеющиеся данные по анатомии и гистологии плодов данного вида лекарственного растительного сырья (ЛРС), в научной литературе не описаны особенности люминесценции тканей плодов облепихи крушиновидной. Известно, что люминенсцентные особенности тканей позволяют выявлять локализацию биологически активных структур, а также, в некоторых случаях, проводить селективную диагностику ЛРС.

Цель

Цель. Целью настоящей работы являлось изучение особенностей люминесценции тканей высушенных измельченных плодов облепихи крушиновидной, а также оптимизация условий проведения анализа.

Материалы и методы

Материалы и методы. Объектом исследования служили высушенные измельченные плоды облепихи крушиновидной различных сортов. Изучение микродиагностических признаков проводили согласно ГФ XIV РФ ОФС.1.5.3.0003.15 «Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов». Стереомикроскопическое исследование осуществляли на микроскопе Биомед-6. Люминесценцию тканей плодов облепихи крушиновидной исследовали с использованием люминесцентного микроскопа марки Микромед-3 Люм.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Наиболее выраженное желтое свечение наблюдается для тканей мякоти и эпидермиса плода, что связано с наибольшим содержанием в данных структурах жирного масла. Зеленоватый оттенок объектам придают, содержащиеся наряду с маслом, группы фенольных соединений, а коричневатый оттенок – конденсированные танины. Пластинки, из которых состоят щитковидные волоски, не обладают яркой люминесценцией, слабое свечение характерно для мест сочлинения пластинок волоска. Стенки звезчатых волосков обладают слабым зеленоватым свечением. Фрагменты собственно плода («мешочек») коричневатого цвета без собственной люминесценции, также как и кожура семени. Зародыш обладает собственной люминесценцией зеленоватого цвета ввиду наличия как жирного масла, так и комплекса запасающих веществ.

Заключение

Заключение. Впервые проведён люминесцентный анализ плодов облепихи крушиновидной. Экспериментально обоснован выбор способа подготовки исследуемого ЛРС к проведению микроскопического исследования. Проведенный люминесцентный анализ позволил выявить особенности свечения тканей плодов облепихи крушиновидной. Уточнены основные микродиагностические признаки измельченных плодов облепихи крушиновидной высушенных и их биометрические характеристики. Анализ полученных данных позволит в дальнейшем разработать раздел «Микроскопические признаки» для включения в проект ФС на ЛРС, широко культивируемое и используемое отечественной фармацевтической промышленностью для производства лекарственных растительных препаратов.

Introduction

Introduction. Sea buckthorn (Hippophae rhamnoides), the family Eleagnaceae – a promising source of biologically active substances, the traditional raw materials of which are fruits. The existing regulatory documentation (ND) lacks such an indicator of the authenticity and good quality of the fruit as «microscopy». Despite the available data on the anatomy and histology of the fruits of this type of medicinal plant material (MPM), the scientific literature does not describe the luminescence features of the tissues of sea buckthorn fruit. It is known that the luminescent features of tissues make it possible to identify the localization of biologically active structures, and also, in some cases, to conduct selective diagnosis of MPM.

Aim

Aim. The aim of this work was to study the characteristics of the luminescence of the tissues of dried crushed fruits of sea buckthorn, and also to optimize the conditions for analysis.

Materials and methods

Materials and methods. The object of the study was the dried, crushed fruits of sea buckthorn of various species. The study of microdiagnostic signs was carried out according to the State Pharmacopoeia of the XIV RF GPA.1.5.3.0003.15 «Technique of microscopic and microchemical studies of medicinal plant materials and herbal medicines». A stereomicroscopic study was carried out on a Biomed-6 microscope. The luminescence of sea buckthorn fruit tissues was examined using a luminescent microscope of the Micromed-3 Lum brand.

Results and discussion

Results and discussion. The most pronounced yellow glow is observed for the tissue of the pulp and epidermis of the fetus, which is associated with the highest content of fatty oil in these structures. Groups of phenolic compounds contained along with oil give a greenish tint to objects, while condensed tannins give a brownish tint. The plates that make up the corymbose hairs do not exhibit bright luminescence; a weak glow is characteristic of the joints of the hair platelets. The walls of stellate hairs have a faint greenish glow. Fragments of the actual fruit («sac») are brownish in color, without their own luminescence, as well as the seed peel. The embryo has its own greenish luminescence due to the presence of both a fatty oil and a complex of storage substances.

Conclusion

Conclusion. The luminescent analysis of sea buckthorn fruits was carried out for the first time. The choice of a method for preparing the studied MPM for microscopic examination is experimentally substantiated. The luminescent analysis revealed the peculiarities of the glow of the tissues of the fruits of sea buckthorn. The main microdiagnostic signs of crushed dried sea buckthorn fruits and their biometric characteristics are specified. The analysis of the obtained data will allow us to further develop the section «Microscopic signs» for inclusion in the PA project on MPM, widely cultivated and used by the domestic pharmaceutical industry for the production of herbal medicines.

облепиха крушиновиднаялюминесцентный анализанатомо-диагностические признакибиометрические характеристикиsea buckthornluminescent analysisanatomical and diagnostic featuresbiometric characteristicsReferencesБукштынов А. Д., Трофимов Т. Т., Ермаков Б. С. и др. Облепиха. М.: Изд-во «Лесная промышленность». 1978: 192.Bukshtynov A. D., Trofimov T. T., Ermakov B. S. et al. Sea buckthorn. M.: Publishing house «Forest industry». 1978: 192 (In Russ.).Тринеева О. В. Комплексное исследование содержания и специфического профиля биологически активных веществ плодов облепихи крушиновидной. Воронеж: Издательский дом ВГУ. 2016: 224.Trineeva O. V. Comprehensive study of content and the digital profile of biologically active substances of buckthorn fruits. Voronezh: VSU Publishing House. 2016: 224. (In Russ.).Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издание. 2015; 2: 1004. Available at: http://193.232.7.120/feml/clinical_ref/pharmacopoeia_1/HTML/Russian Federation State Pharmacopoeia XIII ed. 2015; 2: 1004. Available at: http://193.232.7.120/feml/clinical_ref/pharmacopoeia_1/HTML/ (in Russ.).Государственная Фармакопея Российской Федерации XIV издание. 2018; 4: 7019. Available at: http://femb.ru/femb/pharmacopea.phpRussian Federation State Pharmacopoeia XIV ed. 2018; 4: 7019. Available at: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php (in Russ.).Рудая М. А., Тринеева О. В., Гудкова А. А., Сливкин А. И., Даньшина И. А. Изучение диагностических признаков плодов облепихи различных сортов. Фармация. 2017; 66(7): 11–15.Rudaya M. A., Trineeva O. V., Gudkova A. A., Slivkin A. I., Danshina I. A. Study of diagnostic signs of sea buckthorn fruits of various varieties. Pharmacy. 2017; 66(7): 11–15. (In Russ.).Рудая М. А., Тринеева О. В., Гудкова А. А., Сливкин А. И., Бойко Г. А., Даньшина И. А. Плоды облепихи крушиновидной: морфолого-анатомические признаки различных сортов. Фармация. 2018; 67(2): 21–26.Rudaya M. A., Trineeva O. V., Gudkova A. A., Slivkin A. I., Boyto G. A., Danshina I. A. Fruits of buckthorn buckthorn: morphological and anatomical characters of various varieties. Pharmacy. 2018; 67(2): 21–26 (In Russ.).Тринеева О. В., Шикунова Н. С., Мальцева А. А., Сливкин А. И. Исследование микроскопических признаков высушенных плодов облепихи крушиновидной. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2014; 4: 135–139.Trineeva O. V., Shikunova N. S., Maltseva A. A., Slivkin A. I. Study of microscopic signs of dried fruits of sea buckthorn. Bulletin of Voronezh State University. Series: Chemistry. Biology. Pharmacy. 2014; 4: 135–139 (In Russ.).Тринеева О. В., Сливкин А. И., Самылина И. А. Исследования по разработке проектов фармакопейных статей на плоды и масло облепихи крушиновидной. Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. 2016; 3: 126–133.Trineeva O. V., Slivkin A. I., Samylina I. A. Research on the development of draft pharmacopoeial articles on the fruits and buckthorn oil of buckthorn. Bulletin of Voronezh State University. Series: Chemistry. Biology. Pharmacy. 2016; 3: 126–133 (In Russ.).Астафьева А. А., Куприянова Е. А., Куркин В. А., Рыжов В. М., Тарасенко Л. В., Помогайбин А. В. Исследование люминесценции тканей побегов тополя краснонервного (Populus rubrinervis Hort.) как перспективного источника флавоноидов. В сборнике: Фармацевтическая ботаника: современность и перспективы III-я Межвузовская научно-практическая конференция, посвященная 100-летию Самарского государственного медицинского университета. Сборник материалов. ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России. 2018: 73–78.Astafyeva A. A., Kupriyanova E. A., Kurkin V. A., Ryzhov V. M., Tarasenko L. V., Pomogaybin A. V. Study of the luminescence of tissues of shoots of the Red-nosed poplar (Populus rubrinervis Hort.) As a promising source flavonoids. In the collection: Pharmaceutical Botany: Modernity and Prospects III Interuniversity Scientific and Practical Conference dedicated to the 100 th anniversary of Samara State Medical University. Collection of materials. Samara State Medical University. 2018: 73–78 (In Russ.).Васькова А. И., Рыжов В. М., Тарасенко Л. В. Люминесцентный анализ листьев тысячелистника хрящеватого (Аchillea cartilaginea Ledeb.). В сборнике: Фармацевтическая ботаника: современность и перспективы Сборник материалов. ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России. 2017: 119–127.Vaskova A. I., Ryzhov V. M., Tarasenko L. V. Luminescent analysis of cartilaginous yarrow leaves (Achillea cartilaginea Ledeb.). In the collection: Pharmaceutical botany: modernity and prospects. Collection of materials. Samara State Medical University. 2017: 119127 (in Russ.).Никитина А. С., Логвиненко Л. А., Никитина Н. В., Нигарян С. А. Морфометрическое и гистохимическое исследование травы мелиссы лекарственной из коллекции никитского ботанического сада. Фармация и фармакология. 2018; 6(6): 504–534.Nikitina A. S., Logvinenko L. A., Nikitina N. V., Nigaryan S. A. Morphometric and histochemical study of the lemon balm herb from the collection of the Nikitsky Botanical Garden. Pharmacy and pharmacology. 2018; 6(6): 504–534 (In Russ.).Лапина А. С., Куркин В. А., Рыжов В. М., Тарасенко Л. В. Новые аспекты в морфолого-анатомической диагностике травы монарды дудчатой (Мonarda fistulosa L.). Аспирантский вестник Поволжья. 2019; 1-2: 19–26.Lapina A. S., Kurkin V. A., Ryzhov V. M., Tarasenko L. V. New aspects in the morphological and anatomical diagnosis of duodenal monarda grass (Monarda fistulosa L.). Graduate student of the Volga region. 2019; 1-2: 19–26 (In Russ.).Азизова Т. М., Рыжов В. М., Тарасенко Л. В. Результаты люминесцентного анализа плодов фенхеля обыкновенного (Foeniculum vulgare Mill). В сборнике: Фармацевтическая ботаника: современность и перспективы. Сборник материалов. ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России. 2017: 104–113.Azizova T. M., Ryzhov V. M., Tarasenko L. V. Results of luminescence analysis of common fennel fruits (Foeniculum vulgare Mill). In the collection: Pharmaceutical botany: modernity and prospects. Collection of materials. Samara State Medical University. 2017: 104113 (In Russ.).Левшанова Е. В., Хусайнова А. И., Рыжов В. М., Тарасенко Л. В., Куркина А. В. Результаты люминесцентного анализа соцветий пижмы обыкновенной (Tanacetum vulgare L.). В сборнике: Фармацевтическая ботаника: современность и перспективы III-я Межвузовская научно-практическая конференция, посвященная 100-летию Самарского государственного медицинского университета. Сборник материалов. ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России. 2018: 79–87.Levshanova E. V., Khusainova A. I., Ryzhov V. M., Tarasenko L. V., Kurkina A. V. Results of luminescence analysis of common tansy inflorescences (Tanacetum vulgare L.). In the collection: Pharmaceutical Botany: Modernity and Prospects III Inter-University Scientific and Practical Conference dedicated to the 100 th anniversary of Samara State Medical University. Collection of materials. Samara State Medical University. 2018: 79–87 (In Russ.).Егорова А. В., Рыжов В. М., Тарасенко Л. В., Зюлин Н. С. Результаты люминесцентного анализа утилизированной надземной части пихты сибирской (Abies sibirica). В сборнике: Современные проблемы фармакогнозии Сборник материалов III-й Межвузовской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 100-летию Самарского государственного медицинского университета. ФГБОУ ВО Самарский государственный медицинский университет Минздрава России. 2018: 111–118.Egorova A. V., Ryzhov V. M., Tarasenko L. V., Zyulin N. S. Results of luminescence analysis of the utilized aerial part of Siberian fir (Abies sibirica). In the collection: Modern problems of pharmacognosy. The collection of materials of the III Interuniversity scientific-practical conference with international participation, dedicated to the 100 th anniversary of Samara State Medical University. Samara State Medical University. 2018: 111–118 (In Russ.).Морозова Т. В. Фармакогностическое исследование некоторых видов рода боярышник (Crataegus L.). Автореферат диссертации кандидата фарм. наук. Самара. 2019: 23.Morozova T. V. Pharmacognostic study of certain species of the genus Hawthorn (Crataegus L.). Abstract of the dissertation of the candidate farm. sciences. Samara. 2019: 23 (In Russ.).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.