pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2020-9-1-99-108pharmjournal-761Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯPRECLINICAL AND CLINICAL STUDIESРазработка и валидация методики определения атазанавира и ритонавира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МСDevelopment and Validation of Atazanavir and Ritonavir Determination in Human Plasma by HPLC-MS MethodКомаровТ. Н.KomarovT. N.

Комаров Тимофей Николаевич

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Timofey N. Komarov

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

t.n.komarov@yandex.ruШохинИ. Е.ShohinI. E.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6

Igor E. Shohin

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 1172466, Mikluho-Maklaya str., Moscow, 117198 

МискивО. А.MiskivO. A.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Olga A. Miskiv

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

БогдановаД. С.BogdanovaD. S.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Dana S. Bogdanova

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

АлешинаА. В.AleshinaA. V.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Alexandra V. Aleshina

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

МедведевЮ. В.MedvedevYu. V.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3119991, Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2

Yuri V. Medvedev

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 1172468/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991 

БагаеваН. С.BagaevaN. S.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Natalia S. Bagaeva

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

ООО «Центр Фармацевтической Аналитики»LLC «CPHA»ООО «Центр Фармацевтической Аналитики»; ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов» (Российский университет дружбы народов, РУДН)LLC «CPHA»; Peoples Friendship University of Russia (RUDN University)ООО «Центр Фармацевтической Аналитики»; ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)LLC «CPHA»; I. M. Sechenov First MSMU of the Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University)2020260220209199108Copyright © Комаров Т.Н., Шохин И.Е., Мискив О.А., Богданова Д.С., Алешина А.В., Медведев Ю.В., Багаева Н.С., 20202020Комаров Т.Н., Шохин И.Е., Мискив О.А., Богданова Д.С., Алешина А.В., Медведев Ю.В., Багаева Н.С.Komarov T.N., Shohin I.E., Miskiv O.A., Bogdanova D.S., Aleshina A.V., Medvedev Y.V., Bagaeva N.S.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/761Введение

Введение. ВИЧ-инфекция является одним из наиболее актуальных заболеваний современности с медицинской, эпидемиологической и социальной точки зрения. Своевременная диагностика, выявление и контроль заболевания, адекватное назначение антиретровирусной терапии позволяют в достаточной степени снизить вирусную нагрузку на организм пациента, снизить риски передачи инфекции. В настоящее время в качестве терапии всё чаще назначаются комбинации различных антиретровирусных лекарственных средств. Одной из перспективных комбинаций является совместное применение атазанавира и ритонавира. Важнейшим этапом для изучения фармакокинетического взаимодействия, исследований сравнительной фармакокинетики и биоэквивалентности является разработка аналитической методики, позволяющей определять исследуемые вещества в плазме крови человека. В настоящее время нет опубликованных методик о совместном определении атазанавира и ритонавира в плазме крови человека с помощью метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-селективным детектированием с применением одноквадрупольного масс-детектора. В данной работе приведена разработка и валидация методики совместного определения атазанавира и ритонавира в плазме крови после пробоподготовки способом осаждения белков.

Цель

Цель. Целью исследования является разработка методики количественного определения атазанавира и ритонавира в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с одноквадрупольным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС) для проведения аналитической части фармакокинетических исследований.

Материалы и методы

Материалы и методы. Количественное определение атазанавира и ритонавира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения белков.

Результаты и обсуждение

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим валидационным параметрам: селективность, эффект матрицы, линейность, точность, прецизионность, предел количественного определения, перенос пробы, стабильность.

Заключение

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения атазанавира и ритонавира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС. Подтвержденный аналитический диапазон методики составил 50,0–10000,0 нг/мл для атазанавира и 10,0–2500,0 нг/мл для ритонавира. Полученный аналитический диапазон позволяет применять разработанную методику для проведения аналитической части исследований фармакокинетики препаратов, содержащих атазанавир и ритонавир.

Introduction

Introduction. HIV infection is one of the most relevant diseases from a medical, epidemiological and social point of view. Timely diagnosis, detection and control of the disease, adequate prescription of antiretroviral therapy can sufficiently reduce the viral load on the patient's body, reduce the risk of transmission of infection. Currently, combinations of various antiretroviral drugs are increasingly being prescribed as therapy. One of the most important is combination of atazanavir and ritonavir. The most important stage for the study of pharmacokinetics, studies of comparative pharmacokinetics and bioequivalence is the development of an analytical method that allows you to determine the investigated substances in human plasma. There are currently no published methods for the determination of atazanavir and ritonavir in human plasma using high performance liquid chromatography with mass selective detection using a single quadrupole mass detector. In this article presents the development and validation of a method for the determination of atazanavir and ritonavir in blood plasma after sample preparation by the method of protein precipitation.

Aim

Aim. The aim of the study is to develop a method for the quantitative determination of atazanavir and ritonavir in human plasma by HPLC with mass spectrometric detection for performing the analytical part of pharmacokinetic studies.

Materials and methods

Materials and methods. Determination of atazanavir and ritonavir in human plasma by HPLC with mass spectrometric detection. A sample was prepared using protein deposition.

Results and discussion

Results and discussion. The method was validated of selectivity, matrix effect, calibration curve, accuracy, precision, limit of quantification, carry-over effect and sample stability.

Conclusion

Conclusion. The method of the determination of atazanavir and ritonavir in human plasma was developed and validated by HPLC-MS. The analytical range of the was 50.0–10000.0 ng/mL in plasma for atazanavir and 10.0–2500.0 ng/mL in plasma for ritonavir. Method could be applied to determination of atazanavir and ritonavir in plasma for PK and BE studies.

атазанавирритонавирплазмаВЭЖХ-МСопределениевалидацияatazanavirritonavirplasmaHPLC-MSdeterminationvalidationReferencesЗайцева Н. Н., Ефимов Е. И., Солнцев Л. А. Электронный атлас в эпидемиологическом надзоре за ВИЧ-инфекцией. Медицинский альманах. 2014; 4(34): 63–67.Zaitseva N. N., Efimov E. I., Solntsev L. A. Electronic Atlas in HIV Surveillance. Medical almanac. 2014; 4(34): 63–67 (in Russ.).Эпидемиологическая ситуация по ВИЧ-инфекции в России. Available at: http://www.cgemo.ru/doks/news/epid-vich-2017.pdf.The epidemiological situation of HIV infection in Russia. Available at: http://www.cgemo.ru/doks/news/epid-vich-2017.pdf (in Russ.).Олейник А. Ф., Фазылов В. Х. Антиретровирусная терапия как метод профилактики ВИЧ-инфекции. Инфекционные болезни: новости, мнение, обучение. 2016; 3(6): 113–117.Oleinik A. F., Fazylov V. Kh. Antiretroviral therapy as a method of preventing HIV infection. Infectious diseases: news, opinion, education. 2016; 3(6): 113–117 (in Russ.).Severe P., Juste M. A. J, Ambroise A., Eliacin L., Marchand C., Apollon S., Edwards A., Bang H., Nicotera J., Godfrey C., Gulick R. M., Johnson W. D., Pape J. W., Fitzgerald D. W. Early versus standard antiretroviral therapy for HIV-infected adults in Haiti. New England Journal of Medicine. 2010; 3(363): 257–265. DOI: 10.1056/NEJMoa0910370.Severe P., Juste M. A. J, Ambroise A., Eliacin L., Marchand C., Apollon S., Edwards A., Bang H., Nicotera J., Godfrey C., Gulick R. M., Johnson W. D., Pape J. W., Fitzgerald D. W. Early versus standard antiretroviral therapy for HIV-infected adults in Haiti. New England Journal of Medicine. 2010; 3(363): 257–265. DOI: 10.1056/NEJMoa0910370.Кравченко А. В. Безопасность и эффективность применения атазанавира в составе современных схем АРВТ. Дальневосточный журнал инфекционной патологии. 2010; 17: 220–235.Kravchenko A. V. Safety and efficacy of atazanavir as part of modern ART regimens. Far Eastern Journal of Infectious Pathology. 2010; 17: 220–235 (in Russ.).Guaraldi G., Cocchi S., Motta A., Ciaffi S., Codeluppi M., Bonora S., Benedetto F. D., Masetti M., Floridia M., Baroncelli S., Pinetti D., D’Avolio A., Bertolini A., Esposito R. A pilot study on the efficacy, pharmacokinetics and safety of atazanavir in patients with endstage liver disease. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2008; 6(62): 1356–1364. DOI: 10.1093/jac/dkn383.Guaraldi G., Cocchi S., Motta A., Ciaffi S., Codeluppi M., Bonora S., Benedetto F.D., Masetti M., Floridia M., Baroncelli S., Pinetti D., D’Avolio A., Bertolini A., Esposito R. A pilot study on the efficacy, pharmacokinetics and safety of atazanavir in patients with endstage liver disease. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 2008; 6(62): 1356–1364. DOI: 10.1093/jac/dkn383.Wempe M. F., Anderson P. L. Atazanavir metabolism according to CYP3A5 status: an in vitro-in vivo assessment. Drug Metabolism and Disposition. 2011; 3(39): 522–527. DOI: 10.1124/dmd.110.036178.Wempe M. F., Anderson P. L. Atazanavir metabolism according to CYP3A5 status: an in vitro-in vivo assessment. Drug Metabolism and Disposition. 2011; 3(39): 522–527. DOI: 10.1124/dmd.110.036178.Противовирусные препараты для лечения ВИЧ-инфекции: Ингибиторы протеаз. Available at: http://medzai.net/substances/atazanavir.php.Antivirals for HIV: Protease Inhibitors. Available at: http://medzai.net/substances/atazanavir.php (in Russ.).Hull M. W., Montaner J. S. G. Ritonavir-boosted protease inhibitors in HIV therapy. Annals of medicine. 2011; 5(43): 375–388. DOI: 10.3109/07853890.2011.572905.Hull M. W., Montaner J. S. G. Ritonavir-boosted protease inhibitors in HIV therapy. Annals of medicine. 2011; 5(43): 375–388. DOI: 10.3109/07853890.2011.572905.Busti A. J., Hall R. G., Margolis D. M. Atazanavir for the treatment of human immunodeficiency virus infection. Pharmacotherapy: The Journal of Human Pharmacology and Drug Therapy. 2004; 12(24): 1732–1747. DOI: 10.1592/phco.24.17.1732.52347.Busti A. J., Hall R. G., Margolis D. M. Atazanavir for the treatment of human immunodeficiency virus infection. Pharmacotherapy: The Journal of Human Pharmacology and Drug Therapy. 2004; 12(24): 1732–1747. DOI: 10.1592/phco.24.17.1732.52347.Cateaua E., Tourniera N., Dupuisb A., Moalc G. L., Venisse N. Determination of atazanavir in human plasma using solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. 2005; 3-4(39): 791–795. DOI: 10.1016/j.jpba.2005.04.025.Cateaua E., Tourniera N., Dupuisb A., Moalc G.L., Venisse N. Determination of atazanavir in human plasma using solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. 2005; 3-4(39): 791–795. DOI: 10.1016/j.jpba.2005.04.025.Cattaneo D., Maggiolo F., Ripamonti D., Perico N.. Determination of atazanavir in human plasma by high-performance liquid chromatography with UV detection. Journal of chromatographic science. 2008; 6(46): 485–489. DOI: 10.1093/chromsci/46.6.485.Cattaneo D., Maggiolo F., Ripamonti D., Perico N. Determination of atazanavir in human plasma by high-performance liquid chromatography with UV detection. Journal of chromatographic science. 2008; 6(46): 485–489. DOI: 10.1093/chromsci/46.6.485.Кушакова А. С., Никитина Д. А., Новиков А. В. Методика определения концентрации атазанавира в плазме крови человека методом ОФ ВЭЖХ с УФ-детектированием. Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез. Материалы III Всероссийской конференции; 2017 21–27 мая, Краснодар, Россия. Краснодар: Кубанский государственный университет. 2017: 88.Kushakova A. S., Nikitina D. A., Novikov A. V. Method for determining the concentration of atazanavir in human blood plasma by RPHPLC with UV detection. Analytical chromatography and capillary electrophoresis. Materials of the III All-Russian Conference; 2017 May 21–27, Krasnodar, Russia. Krasnodar: Kuban State University; 2017: 88 (in Russ.).Reddy A.V.B., Jaafar J., Aris A.B., Majid Z.A., Umar K., Talib J., Madhavi G. Development and validation of a rapid ultra high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry method for the simultaneous determination of darunavir, ritonavir, and tenofovir in human plasma: Application to human pharmacokinetics. Journal of separation science. 2015; 15(38): 2580–2587. DOI: 10.1002/jssc.201500250.Reddy A. V. B., Jaafar J., Aris A. B., Majid Z. A., Umar K., Talib J., Madhavi G. Development and validation of a rapid ultra high performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry method for the simultaneous determination of darunavir, ritonavir, and tenofovir in human plasma: Application to human pharmacokinetics. Journal of separation science. 2015; 15(38): 2580–2587. DOI: 10.1002/jssc.201500250.Mishra T., Shrivastav P. S. Validation of simultaneous quantitative method of HIV protease inhibitors atazanavir, darunavir and ritonavir in human plasma by UPLC-MS/MS. The Scientific World Journal. 2014. DOI: 10.1155/2014/482693.Mishra T., Shrivastav P. S. Validation of simultaneous quantitative method of HIV protease inhibitors atazanavir, darunavir and ritonavir in human plasma by UPLC-MS/MS. The Scientific World Journal. 2014. DOI: 10.1155/2014/482693.Миронов А. Н. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Т. II. М.: Гриф и К. 2013: 280.Mironov A.N. Guidelines for the examination of medicines. T. II. M.: Grif and K. 2013: 280 (in Russ.).Food and Drug Administration. Available at: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry.Food and Drug Administration. Available at: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry.European Medicines Agency. Available at: https://www.ema.europa.eu/en/bioanalytical-method-validation.European Medicines Agency. Available at: https://www.ema.europa.eu/en/bioanalytical-method-validation.Reyataz. Available at: https://packageinserts.bms.com/pi/pi_reyataz.pdf.Reyataz. Available at: https://packageinserts.bms.com/pi/pi_reyataz.pdf.

The authors declare that there are no conflicts of interest present.