pharmjournalРазработка и регистрация лекарственных средствDrug development & registration2305-20662658-5049LLC «CPHA»10.33380/2305-2066-2020-9-2-140-144pharmjournal-804Research ArticleДОКЛИНИЧЕСКИЕ И КЛИНИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯPRECLINICAL AND CLINICAL STUDIESОценка иммуногенности препаратов пэгфилграстима у пациентов с диагнозом «рак молочной железы»Immunogenicity Assessment of Pegfilgrastim in Patients with Breast CancerМедведевЮ. В.MedvedevYu. V.

Медведев Юрий Владимирович

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, 

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Yuri V. Medvedev

8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991, 

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

y125195@yandex.ruКолгановаМ. А.KolganovaM. A.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Maria A. Kolganova

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

СасО. А.SasO. A.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Olga A. Sas

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

КомаровТ. Н.KomarovT. N.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Timofey N. Komarov

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

ФишерЕ. Н.FisherE. N.

119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2, 

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3

Elizaveta N. Fisher

8/2, Trubetskaya str., Mosсow, 119991, 

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246

ШохинИ. Е.ShohinI. E.

117246, г. Москва, Научный пр., д. 20, стр. 3, 

117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6

Igor E. Shohin

20/3, Nauchny proezd, Moscow, 117246, 

6, Mikluho-Maklaya str., Moscow, 117198

АммурЮ. И.AmmourYu. I.

105064, г. Москва, Малый Казенный пер., д. 5А

Yulia I. Ammour

5А, Maly Kazenny lane, Moscow, 105064

ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И. М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет); ООО «Центр Фармацевтической Аналитики» (ООО «ЦФА»)I. M. Sechenov First MSMU of the Ministry of Health of the Russian Federation (Sechenov University); LLC «CPHA»ООО «Центр Фармацевтической Аналитики» (ООО «ЦФА»)LLC «CPHA»ООО «Центр Фармацевтической Аналитики» (ООО «ЦФА»); ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов» (Российский университет дружбы народов, РУДН)LLC «CPHA»; Peoples Friendship University of Russia (RUDN University)ФГБНУ « Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова» (ФГБНУ НИИВС им. И. И. Мечникова)Federal State Budgetary Scientific Institution «I. I. Mechnikov Research Institute of Vaccines and Sera»20203005202092140144Copyright © Медведев Ю.В., Колганова М.А., Сас О.А., Комаров Т.Н., Фишер Е.Н., Шохин И.Е., Аммур Ю.И., 20202020Медведев Ю.В., Колганова М.А., Сас О.А., Комаров Т.Н., Фишер Е.Н., Шохин И.Е., Аммур Ю.И.Medvedev Y.V., Kolganova M.A., Sas O.A., Komarov T.N., Fisher E.N., Shohin I.E., Ammour Y.I.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://www.pharmjournal.ru/jour/article/view/804Введение

Введение. Одним из побочных эффектов, развивающихся при противоопухолевой терапии (лекарственной или лучевой), является нейтропения, при которой наблюдается снижение числа нейтрофилов в крови. Нейтропения может привести к повышению риска и тяжести развития бактериальной и грибковой инфекции. Для предотвращения развития нейтропении, а также для лечения применяют гранулоцитарные колониестимулирующие факторы, например филграстим и его конъюгированные формы. Одним из нежелательных явлений характерных для лекарственных веществ пептидной природы является развитие иммуногенности, что обуславливает необходимость изучение иммуногенности у таких ЛС.

Цель

Цель. Валидировать методику определения антител к пэгфилграстиму в сыворотке крови, оценить иммуногенность препаратов пэгфилграстима.

Материалы и методы

Материалы и методы. Для оценки наличия антител к пэгфлиграстиму, оценки ингибирования сигнала и установления титра антител использовался набор PEGylated Filgrastim (Neulasta®) ADA ELISA. Для подтверждения применимости данного набора к требуемым задачам методика анализа была подвергнута валидации. Оптическую плотность образцов измеряли с помощью планшетного иммуноферментного анализатора Stat Fax 3200, промывку планшетов осуществляли с помощью автоматического промывателя планшетов.

Результаты и обсуждения

Результаты и обсуждения. В ходе выполнения работы была проведена валидация методики определения антител к пэгфилграстиму в сыворотке крови. Разработанная методика была применена в рамках простого слепого сравнительного многоцентрового рандомизированного исследования эффективности и безопасности препаратов пэгфилграстима у пациентов с диагнозом «рак молочной железы», получающих миелосупрессивную терапию. Образцы, полученные от клинического центра, были подвергнуты скринингу на наличие антител к пэгфилграстиму, были выявлены пробы, содержащие антитела, проведен подтверждающий анализ, рассчитан процент ингибирования и установлен титр антител.

Заключение

Заключение. Методика определения антител была подвергнута валидации, после чего применена для оценки иммуногенности препараторов пэгфилграстима.

Introduction

Introduction. Neutropenia, which is an abnormally low concentration of neutrophils in the blood, is one of the common side effects in patients receiving radio- or chemotherapy. Neutropenia usually leads to higher risks of severe bacterial and fungal infections. Such medicines as colonystimulating factor filgrastim (and its conjugates) are used to prevent and treat neutropenia in oncology patients. Immunogenicity is a potential concern for any biological product, thus, its assessment is one of the most critical necessities during the development and registration of such products.

Aim

Aim. The main aim of this study was to validate the ELISA method for anti-pegfilgrastim antibodies detection in human serum samples and to apply the validated method to pegfilgrastim drugs immunogenicity assessment.

Materials and methods

Materials and methods. To assess pegfilgrastim immunogenicity, the commercial ELISA kit «PEGylated Filgrastim (Neulasta®) ADA ELISA» was used for screening, confirmatory and titer assay. Moreover, to confirm the chosen commercial kit suits the study aims it was revalidated. The absorbance values were obtained using plate immunoassay analyzer Stat Fax 3200, plate washing was performed using an automatic twochannel plate washer.

Results and discussion

Results and discussion. The ELISA method for anti-pegfilgrastim antibodies determination in human serum samples was validated and applied to the analytical part of the comparative, multicenter, blind, randomized study of pegfilgrastim efficacy and safety in patients with breast cancer, receiving myelosuppressive chemotherapy. Human serum samples were first screened for anti-drug antibodies, then «screening positive» samples were analyzed in confirmatory assay with % inhibition calculation for each sample. The «confirmed positive» samples were further characterized in titer assay.

Conclusions

Conclusions. The ELISA method for anti-pegfilgrastim antibodies determination in human serum samples was successfully validated and applied for pegfilgrastim drugs immunogenicity assessment.

пэгфилграстимиммуногенностьИФАпротиволекарственные антителаpegfilgrastimimmunogenicityELISAanti-drug antibodies (ADA)ReferencesНейпоген®. Available at: https://www.rlsnet.ru/tn_index_id_2263.htm.Neupogen®. Available at: https://www.rlsnet.ru/tn_index_id_2263.htm (in Russ.).Динова Е. А., Зимин С. Б., Щербина А. Ю. Применение препарата Грасальва в лечении первичной и вторичной иммунной нейтропении у детей. Вопросы гематологии/онкологии и иммунопатологии в педиатрии. 2008; 7(4): 38–40.Dinova E. A., Zimin S. B., Shcherbina A.Yu. Grasalva treatment of primary and secondary immune neutropenia in children. Pediatric Hematology / oncology and Immunopathology. 2008; 7(4): 38–40 (in Russ.).Грицаев С. В., Кузяева А. А., Запреева И. М. и др. Опыт применения пэгфилграстима в посттрансплантационном периоде у больных множественной миеломой при трансплантации аутологичных гемопоэтических стволовых клеток. Медицина экстремальных ситуации. 2016; 58 (4): 37–44.Gritsaev S. V., Kuzyaeva A. A., Zapreeva I. M. et all. Pegfilgrastim after autologous stem cell transplantation in patients with multple myeloma Federal State Budget Institution «Russian Research Institution of Hematology and Transfusiology at Federal Medical Biological Agency». Medicine of Extreme Situations. 2016; 58 (4): 37– 44 (in Russ.).Алексеева Е. И., Валиева С. И., Бзарова Т. М. и др. Эффективность и безопасность отечественного рекомбинантного человеческого гранулоцитарного колониестимулирующего фактора при нейтропениях, развивающихся на фоне анти- в клеточной и иммуносупрессивной терапии у больных ювенильным ревматоидным артритом. Вопросы современной педиатрии. 2010; 9(4): 94–100.Alekseeva E. I., Valieva S. I., Bzarova T. M. et all. Effectiveness and safety of recombinant human granulocytic colony-stimulatinfactor in treatment of granulocytopenia developed during immunosuppressive therapy in patients with juvenile rheumatoid arthritis. Current pediatrics. 2010; 9(4): 94–100 (in Russ.).Финогенова Н. А. Характеристика гранулоцитарного колониестимулирующего фактора: показания к применению. Современная онкология. 2007; 9(4): 18–20.Finogenova N. A. Characteristics of granulocytic colony stimulating factor: indications for use. Journal of Moder Oncology (Sovremennaya onkologiya). 2007; 9(4): 18–20 (in Russ.).Неуластим®. Available at: https://www.rlsnet.ru/tn_index_id_35598.htm.Neulastim®. Available at: https://www.rlsnet.ru/tn_index_id_35598.htm (in Russ.).Липэгфилграстим. Available at: https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_6542.htm.Lipegfilgrastim. Available at: https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_6542.htm (in Russ.).Эмпэгфилграстим. Available at: https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_6712.htm.Empegfilgrastimum. Available at: https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_6712.htm (in Russ.).Pegfilgrastim. Available at: https://www.drugs.com/monograph/pegfilgrastim.html.Pegfilgrastim. Available at: https://www.drugs.com/monograph/pegfilgrastim.html.Kramer D. Binding Antibodies: Assay Methodologies, Screening Confirmation, Characterization of Anti-Drug-Antibodies. EIP Open Symposium Munchen 2013. Germany. 2013.Kramer D. Binding Antibodies: Assay Methodologies, Screening Confirmation, Characterization of Anti-Drug-Antibodies. EIP Open Symposium Munchen 2013. Germany. 2013.A Comparison of Proposed Biosimilar LA-EP2006 and Reference Pegfilgrastim for the Prevention of Neutropenia in Patients With Early-Stage Breast Cancer Receiving Myelosuppressive Adjuvant or Neoadjuvant Chemotherapy: Pegfilgrastim Randomized Oncology (Supportive Care) Trial to Evaluate Comparative Treatment (PROTECT-2), a Phase III, Randomized, Double-Blind Trial. Oncologist. 2016: 21(7): 789–794. https://doi.org/10.1634/theoncologist.2016-0011.A Comparison of Proposed Biosimilar LA-EP2006 and Reference Pegfilgrastim for the Prevention of Neutropenia in Patients With Early-Stage Breast Cancer Receiving Myelosuppressive Adjuvant or Neoadjuvant Chemotherapy: Pegfilgrastim Randomized Oncology (Supportive Care) Trial to Evaluate Comparative Treatment (PROTECT-2), a Phase III, Randomized, Double-Blind Trial. Oncologist. 2016; 21(7): 789–794. https://doi.org/10.1634/theoncologist.2016-0011.Advani S. H., Achreckar S., Thomas D., Krishnanrutty B. Granulocyte colony-stimulating factor (filgrastim) in chemotherapy-induced febrile neutropenia. Indian Journal of Medical and Paediatric Oncology. 2010; 31: 79–82. DOI: 10.4103/0971-5851.73590.Advani S. H., Achreckar S., Thomas D., Krishnanrutty B. Granulocyte colony-stimulating factor (filgrastim) in chemotherapy-induced febrile neutropenia. Indian Journal of Medical and Paediatric Oncology. 2010; 31: 79–82. DOI: 10.4103/0971-5851.73590.Waller C., Ranganna G. M., Pennella E. et all. Comparison of Immunogenicity between the Proposed Pegfilgrastim Biosimilar MYL-1401H and Reference Pegfilgrastim. Blood. 2017; 130: 3568. DOI: https://doi.org/10.1182/blood.V130.Suppl_1.3568.3568/Waller C., Ranganna G. M., Pennella E. et all. Comparison of Immunogenicity between the Proposed Pegfilgrastim Biosimilar MYL-1401H and Reference Pegfilgrastim. Blood. 2017; 130: 3568. DOI: https://doi.org/10.1182/blood.V130.Suppl_1.3568.3568.А. Н. Миронов. Руководство по экспертизе лекарственных средств. – M.: Гриф и К. Том I. 2013: 328.Mironov A. N. Guidelines for the examination of medicines. V. I. – M.: Grief and K. 2013: 328 (in Russ.).

The authors declare that there are no conflicts of interest present.