Тринеева Ольга Валерьевна - доктор фармацевтических наук, доцент, фармацевтический факультет, кафедра фармацевтической химии и фармацевтической технологии.
394006, Воронеж, Университетская пл., д. 1.
Olga V. Trineeva - Faculty of Pharmacy, Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmaceutical Technology.
1, University Square, Voronezh, 394006.
Введение. Микотоксины (МТ) - это вторичные метаболиты микроскопических плесневых грибов, обладающие выраженными токсическими свойствами.
Текст. В настоящее время в пищевой и фармацевтической промышленности приобретает особое значение разработка экспресс-методов определения содержания МТ, обладающих мутагенными, тератогенными и канцерогенными свойствами. Создание методов их аналитического контроля продолжает оставаться в центре внимания крупнейших международных организаций (IUPAC, AOAC International и IFJU), специализированных национальных организаций стран ЕС и США, а также академий и министерств многих стран мира. Указом Президента Российской Федерации (РФ) была утверждена Доктрина продовольственной безопасности РФ № 120 от 30.01.2010 г. Министерством сельского хозяйства РФ был издан приказ «О внедрении плана государственного ветеринарного лабораторного мониторинга» № 780 от 30 мая 2003 г. В нашей стране исследования МТ, согласно плану мониторинга и Рекомендации Комиссии ЕС, ограничиваются определением содержания шести тестированных МТ - суммы афлатоксинов (АФЛ), охратоксинов (ОТ), зеараленона (ЗЕА), трихотеценов (ТТ), патулина (П), Т-2 токсина в сельскохозяйственном пищевом сырье, пищевых продуктах и кормах. МТ являются природными загрязнителями не только зерна злаковых, бобовых, семян подсолнечника, а также овощей и фруктов, но и лекарственного растительного сырья (ЛРС), а также фармацевтических субстанций растительного происхождения, в частности, таких как жирные растительные масла, широко применяемые в фармации в качестве самостоятельных лекарственных средств, а также вспомогательных компонентов для производства лекарственных препаратов, БАД, растворителей инъекционных препаратов и др. В РФ содержание МТ в ЛРС пока не нормируется. Предотвратить загрязнение ЛРС МТ практически невозможно, поэтому необходим строгий контроль данных веществ. Однако, данная проблема и необходимость введения подобного исследования в перечень показателей оценки доброкачественности ЛРС требует углубленного изучения и оценки степени его зараженности. Кроме того, стандартные методы определения нормируемых МТ, обычно, не рассчитаны на выявление трансформированных форм, и их содержание остается неучтенным. Поэтому модифицированные лекарственным растением метаболиты МТ, получили название замаскированных (конъюгированных, трансформированных) растением МТ, содержание которых также необходимо оценивать. МТ могут образовываться также при хранении ЛРС под действием развивающихся в них микроскопических грибов. Так как основой для получения лекарственных средств растительного происхождения являются лекарственные растения, которые относятся к сырью, наиболее контаминированному различными микроорганизмами, вирусами, плесневыми грибами, то при этом заражению может подвергаться не только ЛРС, но и почти все субстанции, и лекарственные растительные препараты (ЛРП). Показано, что МТ сохраняются в высушенном ЛРС более 100 лет. Установлено, что многое ЛРС густо обсеменено плесневыми грибами класса Deuteromycetes, что можно обнаружить при проведении микроскопического анализа. Целью настоящей работы являлась систематизация методов определения основных МТ на основе анализа отечественной литературы для возможного дальнейшего их применения в оценке качества ЛРС и ЛРП на его основе.
Заключение. МТ негативно действуют на организм животных и человека и с трудом поддаются деконтаминации. МТ могут присутствовать в ЛРС без видимого роста плесени. МТ не теряет токсичности в течение многих лет. Полностью исключить образование МТ в сырье не представляется возможным, поэтому задача контролирующих ее качество служб - выявить наличие МТ и сравнить обнаруженное количество с нормами предельного содержания. Содержание МТ в ЛРС в настоящее время в РФ не определяется по ГФ РФ XIV изд. Однако, решением Совета Евразийской экономической комиссии от 26.01.2018 г. № 15 утверждены Правила надлежащей практики выращивания, сбора, обработки и хранения исходного сырья растительного происхождения, в которых прописана недопустимость образования плесени в процессе первичной обработки, хранения и транспортировки ЛРС. Следовательно накопление экспериментального материала, а также развитие фармакопейных методов анализа ЛРС, постоянно ужесточающих требования к качеству, вероятно, может привести к включению данного показателя в фармакопейные статьи (ФС). В связи с чем, интересным представилось проведение обзора существующих методов анализа МТ, с возможным последующим их включением в ОФС и ФС. Традиционными методами анализа МТ является физико-химические методы. Наибольшее распространение нашли хроматографические методы: ВЭЖХ, ГЖХ с применением различных детекторов (масс-спектрометрического, флуоресцентного, амперометрического и т. д.). Особое место среди методов разделения занимает ТСХ. Данные методы, безусловно, способны обеспечить достаточную специфичность и необходимую чувствительность определения, однако являются дорогостоящими, рассчитаны преимущественно на специализированные и хорошо оснащенные стационарные лаборатории, а также требуют высокой квалификации персонала. Ни один из них также нельзя отнести к экспресс-методам. Сложность определения МТ в ЛРС связана с продолжительной и трудоемкой пробоподготовкой, а также с использованием дорогостоящих высокочувствительных методов (ВЭЖХ, ЖХ, ГЖХ), которые не могут быть применены непосредственно на месте производства и переработки ЛРС. Наиболее перспективными являются иммунохимические тест-методы определения МТ, основанные на иммунохимической реакции между антителом и антигеном. Показано, что высокая специфичность и возможность выявления МТ в низких концентрациях в сочетании с существующим разнообразным приборным обеспечением позволяют рассматривать иммунохимические методы анализа как наиболее перспективные для широкого практического использования.
Introduction. Mycotoxins (MT) are secondary metabolites of microscopic mold fungi with pronounced toxic properties.
Text. Currently, the development of express methods for determining the content of MT with mutagenic, teratogenic and carcinogenic properties is of particular importance in the food and pharmaceutical industries. The creation of methods for their analytical control continues to be the focus of attention of the largest international organizations (IUPAC, AOAC International and IFJU), specialized national organizations of the EU and the USA, as well as academies and ministries of many countries of the world. By the Decree of the President of the Russian Federation (RF), the Doctrine of Food Security of the RF № 120 dated January 30, 2010 was approved. The Ministry of Agriculture of the RF issued an order «On the implementation of the state veterinary laboratory monitoring plan» № 780 dated May 30, 2003. In our country, MT studies, according to the plan Monitoring and Recommendations of the EU Commission are limited to determining the content of six tested MTs - the sum of aflatoxins (AFL), ochratoxins (OT), zearalenone (ZEA), trichothecenes (TT), patulin (P), T-2 toxin in agricultural raw materials, food products and feed. MTs are natural pollutants not only of grains of cereals, legumes, sunflower seeds, as well as vegetables and fruits, but also of medicinal plant materials (MPM), as well as pharmaceutical substances of plant origin, in particular, such as fatty vegetable oils widely used in pharmacy in as independent drugs, as well as auxiliary components for the production of drugs, dietary supplements, solvents for injection drugs, etc. In the RF, the MT content in MPM is not yet standardized. It is almost impossible to prevent contamination of the MPM MT, therefore, strict control of these substances is necessary. However, this problem and the need to introduce such a study into the list of indicators for evaluating the quality of MPM requires an in-depth study and an assessment of the degree of its infection. In addition, standard methods for determining normalized MTs are usually not designed to detect transformed forms, and their content remains unaccounted for. Therefore, MT metabolites modified by a medicinal plant are called masked (conjugated, transformed) MT plants, the content of which also needs to be evaluated. MTs can also form during storage of MPM under the action of microscopic fungi developing in them. Since the basis for obtaining herbal medicines are medicinal plants, which are raw materials that are most contaminated with various microorganisms, viruses, and molds, not only MPM, but also almost all substances and herbal medicines (HM) can be infected. It has been shown that MTs remain in dried MPM for more than 100 years. It was found that a lot of MPM densely seeded with Deuteromycetes class molds, which can be detected by microscopic analysis. The aim of this work was to systematize the methods for determining the main MT based on the analysis of domestic literature for their possible further use in assessing the quality of MPM and HM based on it.
Conclusion. MTs adversely affect the body of animals and humans and are difficult to decontaminate. MTs may be present in MPM without visible mold growth. MT does not lose toxicity for many years. It is not possible to completely eliminate the formation of MT in raw materials, therefore, the task of controlling its quality of services is to identify the presence of MT and compare the detected amount with the norms of maximum content. The content of MT in MPM is currently not determined in the RF by the RF GF XIV ed. However, by the decision of the Council of the Eurasian Economic Commission dated January 26, 2018 №15, the Rules of Good Practice for the cultivation, collection, processing and storage of raw materials of plant origin were approved, which stipulate the inadmissibility of mold formation during the primary processing, storage and transportation of cattle. Therefore, the accumulation of experimental material, as well as the development of pharmacopoeial methods for the analysis of MPM, constantly tightening quality requirements, can lead to the inclusion of this indicator in pharmacopoeial articles (PA). In this connection, it was interesting to conduct a review of existing methods of MT analysis, with their possible subsequent inclusion in the GPA and PA. The traditional methods of MT analysis are physicochemical methods. The most widely used chromatographic methods: HPLC, GLC using various detectors (mass spectrometric, fluorescence, amperometric, etc.). TLC occupies a special place among the separation methods. These methods, of course, are able to provide sufficient specificity and the necessary sensitivity of the determination, however, they are expensive, designed primarily for specialized and well-equipped stationary laboratories, and also require highly qualified personnel. None of them can also be attributed to express methods. The complexity of determining MT in MPM is associated with long and laborious sample preparation, as well as with the use of expensive highly sensitive methods (HPLC, GLC), which cannot be applied directly at the place of production and processing of MPM. The most promising are immunochemical test methods for determining MT, based on the immunochemical reaction between the antibody and antigen. It was shown that the high specificity and the possibility of detecting MT in low concentrations in combination with the existing diverse instrumentation make it possible to consider immunochemical methods of analysis as the most promising for wide practical use.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.