Применение высокоэффективной жидкостной хроматографии в анализе новой субстанции VMA-10-18

Введение. Лекарственные препараты производных хиназолина обладают широким спектром фармакологических свойств, что делает эту группу достаточно уникальной среди остальных классов гетероциклических соединений. Субстанция VMA-10-18, обладающая церебровазодилатирующим, антидепрессивным, анксиолитическим и ноотропным свойствами, может стать новым перспективным лекарственным препаратом. В связи с этим актуальной задачей является разработка методик стандартизации данной субстанции.

Цель. Разработка и валидация методики количественного определения родственных примесей в новой биологически активной субстанции VMA-10-18 (Хиназофен) методом ВЭЖХ.

Материалы и методы. Для разработки условий хроматографического анализа использовали высокоочищенную субстанцию 3-[2-(4-метоксифениламино)-2-оксоэтил]-хиназолин-4(3Н)-она, а также ее родственные примеси: примесь I [исходный незамещенный хиназолин-4(3Н)-он] и примесь II (4-метоксихлорацетанилид). В качестве растворителя использовали спирт этиловый 95 %. Хроматограф Dionex UltiMate 3000 (Dionex, США) со спектрофотометрическим детектором. Система сбора и обработки данных Chromeleon v.7. Подвижная фаза - смесь ацетонитрила и ортофосфорной кислоты. Анализ выполняли в изократическом режиме.

Результаты и обсуждение. Разработаны оптимальные условия хроматографирования субстанции VMA-10-18 и ее примесей. Установлено, что для четкого разделения пиков субстанции и примесей между собой подвижная фаза должна содержать ацетонитрил и ортофосфорную кислоту в соотношении 80 : 20. Валидацию разработанной методики проводили с учетом требования ГФ XIV издания и рекомендациям ICH. Подтверждена специфичность, линейность, правильность и прецизионность разработанной методики. Линейность и правильность методики определяли на 7 уровнях концентраций. Коэффициент корреляции превысил значение 0,99. Свободный член уравнения линейной зависимости (a) для обеих примесей был меньше его доверительного интервала (Δа), что доказывает отсутствие систематической погрешности методики. При определении показателя «Сходимость» рассчитанное относительное стандартное отклонение не превышало 2 %. При определении внутрилабораторной прецизионности рассчитывали t-критерий Стьюдента и F-критерий Фишера. Оба показателя отвечали заявленным требованиям.

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения примесей в субстанции VMA-10-18 методом ВЭЖХ.

1. Бартон Д., Оллис У. Д. Общая органическая химия. М.: Химия; 1985. Т. 8. 752 с.

2. Armarego W. L. F. Chemistry of Heterocyclic Compounds: Fused Pyrimidines. Part I. Quinazolines. Volume 24. New York: John Wiley & Sons; 1967. 539 p.

3. Chern J.-W., Tao P.-L., Wang K.-C., Gutcait A., Liu S.-W., Yen M.-H., Chien S.-L., Rong J.-K. Studies on quinazolines and 1,2,4-ben-zothiadiazine 1,1-dioxides. 8.1,2synthesis and pharmacological evaluation of tricyclic fused quinazolines and 1,2,4-benzothia-diazine 1,1-dioxides as potential a1-adrenoceptor antagonists. Journal of Medicinal Chemistry. 1998;41(17):3128-3141. DOI: 10.1021/jm970159v.

4. El-Hashash M. A. E.-A., Azab M. E., Faty R. A. E.-A., Amr A. E.-G. E. Synthesis, Antimicrobial and Anti-inflammatory Activity of Some New Benzoxazinone and Quinazolinone Candidates. Chemical and Pharmaceutical Bulletin. 2016;64(3):263-271. DOI: 10.1248/cpb.c15-00904.

5. Das N., Garabadu D., Banerjee A. G., Krishnamurthy S., Shrivastava S. K. Synthesis and pharmacological evaluation of some N3-aryl/heteroaryl-substituted 2-(2-chlorostyryl)-6,7-dimethoxy-quinazolin-4(3H)-ones as potential anticonvulsant agents. Medicinal Chemistry Research. 2014;23(9):4167-4176. DOI: 10.1007/s00044-014-0990-4.

6. Alafeefy A. M., Ashour A. E., Prasad O., Sinha L., Pathak S., Alasmari F. A., Rishi A. K., Abdel-Aziz H. A. Development of certain novel N-(2-(2-(2-oxoindolin-3-ylidene)hydrazinecarbonyl)phenyl)-benzamides and 3-(2-oxoindolin-3-ylideneamino)-2-substituted quinazolin-4(3H)-ones as CFM-1 analogs: design, synthesis, QSAR analysis and anticancer activity. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;92:191-201. DOI: 10.1016/j.ejmech.2014.12.048.

7. Mahdavi M., Pedrood K., Safavi M., Saeedi M., Pordeli M., Ardestani S. K., Emami S., Adib M., Foroumadi A., Shafiee A. Synthesis and anticancer activity of N-substituted 2-arylquinazolinones bearing trans-stilbene scaffold. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;95:492-499. DOI: 10.1016/j.ejmech.2015.03.057.

8. Yin S., Zhou L., Lin J., Xue L., Zhang C. Design, synthesis and biological activities of novel oxazolo[4,5-g]quinazolin-2(1H)-one derivatives as EGFR inhibitors. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;101:462-475. DOI: 10.1016/j.ejmech.2015.07.008.

9. Петров В. И., Тюренков И. Н., Озеров А. А. Производные хиназолина, обладающие антидепрессивной, анксиолитической и ноотропной активностью. Патент РФ № 2507199. 20.02.2014. Бюл. № 5. 15 с. Доступно по: https://patents.google.com/patent/RU2507199C1/ru. Ссылка активна на 20.002.2014.

10. Тюренков И. Н., Озеров А. А., Солодунова Е. А., Арчакова Ю. В., Глухова Е. Г., Шматова Е. Н. Аномалия в ряду фармакологических свойств производных хиназолин-4(3Н)-она, имеющих фрагменты ацетанилида в качестве заместителей. Вестник ВолгГМУ. 2012;2(42):66-68.

11. Арчакова Ю. В. Синтез и психотропные свойства новых амидов хиназолинового ряда. Инновации в современной фармакологии. Тез. докл. 4 съезда фармакологов России. 18-21 сентября 2012. Казань; 2012. 14 с.

12. Шатц В. Д. Сахартова О. В. Высокоэффективная жидкостная хроматография: Основы теории. Методология применения в лекарственной химии. Рига: Зинатне; 1988. 390 с.

13. Государственная фармакопея Российской Федерации. 14-е изд. Т. I. М.: Министерство здравоохранения Российской Федерации; 2018. 1814 с. Доступно по: http://femb.ru/femb/pharmacopea.php. Ссылка активна на 20.002.2014.

14. Validation of Analytical Procedures: Text and Methodology Q2(R1). International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of Pharmaceuticals for Human Use. Available at: https://database.ich.org/sites/default/files/q2_r1__guideline.pdf. Accessed: 10.12.2020.