Исследование противовирусной активности экспериментальных образцов препаратов, полученных из травы и корней Alchemilla vulgaris L. в отношении вирусов осповакцины и оспы мышей

Введение. Отмена вакцинации против натуральной оспы после ее ликвидации в 1980 году привела к снижению противооспенного иммунитета у людей. Близкие по структуре к вирусу натуральной оспы зоонозые вирусы оспы обезьян, верблюдов, буйволов и коров тоже представляют опасность для человека. В России на сегодняшний день отсутствуют эффективные и безопасные лекарственные средства для профилактики и лечения натуральной оспы и других ортопоксвирусных инфекций человека и животных. Манжетка обыкновенная (Alchemilla vulgaris) является перспективным источником для разработки новых противовирусных препаратов. Проведенные ранее исследования показали, что водные растворы сухого этанольного извлечения из надземной части и этилацетатного извлечения из корней Alchemilla vulgaris проявляют активность в отношении вируса гриппа и вируса простого герпеса.

Цель. Цель данной работы заключалась в исследовании химического состава и противовирусной активности экстрактов из корней и травы Alchemilla vulgaris в отношении ортопоксвирусов.

Материалы и методы. Качественный анализ образцов экстрактов проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Количественный анализ проводили, используя комплекс спектрофотометрических методов. Определение токсичности и противовирусной активности препаратов на основе Alchemilla vulgaris in vitro проводили на перевиваемой культуре клеток Vero. Противовирусную активность полученных препаратов оценивали по снижению инфекционности (титра) ортопоксвирусов в монослое клеток Vero, зараженных ортопоксвирусами в присутствии препаратов с различной концентрацией, относительно культуры клеток, зараженной ортопоксвирусами без препаратов.

Результаты и обсуждение. Показано, что образец препарата, полученный методом этилацетатного извлечения из корней исследуемого растения и очищенный хлороформом, содержит в основном катехины и лейкоантоцианы (70 %). В то же время очищенный хлороформом этанольный экстракт из сырой массы травы растения содержит сумму флавоноидов (71 %). При этом содержание флавоноидов в неочищенных этанольных экстрактах из корней и травы Alchemilla vulgaris составляло 5 % и 6 % соответственно. Выявлено, что противовирусную активность в отношении вирусов осповакцины и оспы мышей проявили очищенные препараты, полученные из корней Alchemilla vulgaris при использовании в качестве экстрагента этилацетата, а также препараты, полученные из травы путем этанольного извлечения.

Заключение. Таким образом, очищенные этилацетатные экстракты из корней и этанольные экстракты из сырой массы травы Alchemilla vulgaris проявляют противовирусную активность в отношении ортопоксвирусов in vitro. 

1. Борисевич С. В., Маренникова С. С., Махлай А. А. Терентьев А. И., Логинова С. Я., Перекрест В. В., Краснянский В. П., Бондарев В. П., Рыбак С. И. Оспа обезьян: особенности распространения после отмены обязательного оспопрививания. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2012; 2: 69–73.

2. Parker S., Chen N. G., Foster S. et al. Evaluation of disease and viral biomarkers as triggers for therapeutic intervention in respiratory mousepox – an animal model of smallpox. Antiviral Research. 2012: 94(1): 44–53.

3. Yang G., Pevear D. C., Davies M. H. et al. An Orally Bioavailable Antipoxvirus Compound (ST-246) Inhibits Extracellular Virus Formation and Protects Mice from Lethal orthopoxvirus Challenge. Journal of Virology. 2005: 79(20): 13139–13149.

4. Grosenbach D. W., Honeychurch K., Rose E. A., Chinsangaram, J., Frimm A., Maiti B., Lovejoy C., Meara I., Long P., Hruby D. E. Oral tecovirimat for the treatment of smallpox. New England Journal of Medicine. 2018; 379: 44–53.

5. Parker S., Touchette E., Oberle C., Almond M., Robertson A., Trost L. C., Lampert B., Painter G., Buller R. M. Efficacy of therapeutic intervention with an oral ether–lipid analogue of cidofovir (CMX001) in a lethal mousepox model. Antiviral Res., 2008; 77(1): 39–49.

6. Rice A. D., Adams M. M., Wallace, G. et al. Efficacy of CMX001 as a post exposure antiviral in New Zealand white rabbits infected with rabbitpox virus, a model for orthopoxvirus infections of humans. Viruses. 2011; 3: 47–62.

7. Mazurkov O. Yu., Kabanov A. S., Shishkina L. N., Sergeev Al. А., Skarnovich M. O., Bormotov N. I., Skarnovich M. A., Ovchinnikova A. S., Titova K. A., Galahova D. O., Bulychev L. Ye., Sergeev A. A., Taranov O. S., Selivanov B. A., Tikhonov A. Ya., Zavjalov E. L., Agafonov A. P., Sergeev A. N. The new effective chemically synthesized anti-smallpox compound NIOCH-14. Journal of General Virology. 2016; 97: 1229–1239. Doi:10.1099/jgv.0.000422.

8. Damon I., Karem K., Olson V. Use of live variola virus to evaluate antiviral agents // WHO Advisory Committee on Variola Virus Research Report of the Thirteenth Meeting, Geneva, Switzerland, 31 Oct. – 1 Nov. 2011: 23–24.

9. Arndt W., Mitnik C., Denzler K.L., White S., Waters R. Jacobs B. L., Rochon Y., Olson V. A., Damon I. K., Langland J. O. In vitro Characterization of a Nineteenth-Century Therapy for Smallpox // PLoS ONE. 2012; 7(3): e32610. Doi:10.1371/journal.pone.0032610.

10. Bhanuprakash V., Hosamani M., Balamurugan V., Gandhale P., Naresh R., Swarup D., Singh R. K. In vitro antiviral activity of plant extracts on goatpox virus replication. Indian Journal of Experimental Biology. 2008; 46: 120–127.

11. Dimins F., Mikelsone V., Kaneps M. Antioxidant characteristics of Latvian herbal tea types. Proceedings of the Latvian Academy of Sciences, Section B: Natural, Exact and Applied Sciences. 2013; 67(4/5): 433–436. DOI:10.2478/prolas-2013-0067.

12. Jayanegara A., Marquardt S., Kreuzer M., Leiber F. Nutrient and energy content, in vitro ruminal fermentation characteristics and methanogenic potential of alpine forage plant species during early summer. Journal of the Science of Food and Agriculture. 2011; 91(10): 1863–1870. DOI:10.1002/jsfa.4398.

13. Shrivastava R., John G. Treatment of aphthous stomatitis with topical Alchemilla vulgaris in glycerine. Clinical Drug Investigation. 2006; 26(10): 567–573. DOI:10.2165/00044011-200626100-00003.

14. Вайс Р. Ф., Финтельманн Ф. Фитотерапия. Руководство. Пер. с нем. Ю. Коршикова. М.: Медицина. 2004: 552.

15. Мазуркова Н. А., Кукушкина Т. А., Высочина Г. И., Ибрагимова Ж. Б., Лобанова И. Е., Филиппова Е. И., Мазурков О. Ю., Макаревич Е. В., Шишкина Л. Н., Агафонов А. П. Изучение противогерпетической активности экстрактов манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.). Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016; 1(14): 118–127.

16. Филиппова Е. И., Кукушкина Т. А., Лобанова И. Е., Высочина Г. И., Мазуркова Н. А. Противовирусные свойства препарата на основе суммы флавоноидов манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.) в отношении вируса гриппа. Фундаментальные исследования. 2015; 2: 5139–5144.

17. Проценко М. А., Костина Н. Е., Теплякова Т. В. Подбор питательных сред для глубинного культивирования дереворазрушающего гриба Daedaleopsis tricolor (Bull.) Bondartsev et Singer. Биотехнология. 2018: 34(1): 45–51.

18. Патент РФ № 2128516. Способ получения Р-витаминного средства / Т. А. Кукушкина, Т. А. Жанаева, А. А Зыков, Л. А. Обухова, В. Г. Селятитская. 1999.

19. Беликов В. В., Шрайбер М. С. Методы анализа флавоноидных соединений. Фармация. 1970; 1: 66–72.

20. Кукушкина Т. А., Зыков А. А., Обухова Л. А. Манжетка обыкновенная (Alchemilla vulgaris L.) как источник лекарственных средств. Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения. Фитофарм. 2003: 64–69.

21. Федосеева Л. М. Изучение дубильных веществ подземных и надземных органов бадана толстолистного (Bergenia crassifolia (L.) Fitsch.), произрастающего на Алтае. Химия растительного сырья. 2005; (2): 45–50.

22. Закс Л. Статистическое оценивание. Статистика. 1976: 598.

23. Muhammad A., Guerrero-Analco J. A., Martineau L. C., Musallam L., Madiraju P., Nachar A., Saleem A., Haddad P. S., Arnason J. T. Antidiabetic compounds from Sarracenia purpurea used traditionally by the Eeyou Istchee Cree First Nation. J. Nat. Prod. 2012; 75(7): 1284– 1288. Doi:10.1021/np3001317.