Разработка и валидация методики определения деферазирокса в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ

Введение. Деферазирокс является одним из наиболее известных комплексообразующих лекарственных средств и успешно применяется в хелатирующей терапии для лечения избытка железа в организме человека. Также деферазирокс входит в перечень жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, что свидетельствует о значимости данного лекарственного средства для российского здравоохранения. В указанном перечне присутствуют препараты только зарубежного производителя, поэтому в рамках тенденции к импортозамещению разработка препаратов деферазирокса отечественного производства является необходимым и перспективным направлением. В связи с чем возникает необходимость разработки методики, позволяющей с минимальными временными и ресурсными затратами количественно определить деферазирокс в плазме крови человека в рамках фармакокинетического исследования.

Цель. Целью исследования является разработка и валидация методики определения деферазирокса в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием (ВЭЖХ-УФ) для дальнейшего исследования фармакокинетики и биоэквивалентности лекарственных препаратов.

Материалы и методы. Определение деферазирокса в плазме крови человека проводили методом ВЭЖХ-УФ. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения белков ацетонитрилом. Раствор эрлотиниба использовался в качестве внутреннего стандарта. Подвижная фаза: 0,3%-й раствор ортофосфорной кислоты в воде, доведенный до pH 3,0 (элюент А) и 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в ацетонитриле (элюент В). Колонка: Symmetry®, 75 × 4,6 мм (Waters, США). Аналитический диапазон методики для деферазирокса: 0,25–70,00 мкг/мл в плазме крови. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны поглощения 299 ± 2 нм.

Результаты и обсуждение. Валидация разработанной методики проводилась по следующим валидационным параметрам: селективность, калибровочная кривая, точность, прецизионность, степень извлечения, нижний предел количественного определения, перенос пробы, стабильность (стабильность исходных и рабочих стандартных растворов аналита и внутреннего стандарта; краткосрочная стабильность; стабильность при трехкратной заморозке-разморозке аналита; долгосрочная стабильность аналита в матрице).

Заключение. Была разработана и валидирована методика определения лекарственного средства деферазирокс в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ. Аналитический диапазон методики был подтвержден и составил 0,25–70,00 мкг/мл для деферазирокса в плазме крови. Данная методика была использована в рамках проведения исследования фармакокинетики и биоэквивалентности препаратов деферазирокса.

1. Díaz-García J. D., Gallegos-Villalobos A., Gonzalez-Espinoza L., Sanchez-Niño M. D., Villarrubia J., Ortiz A. Deferasirox Nephrotoxicity – the Knowns and Unknowns. Nature Reviews Nephrology. 2014;10(10):574–586. DOI: 10.1038/nrneph.2014.121.

2. Yang L. P. H., Keam S.J., Keating G. M. Deferasirox. A Review of its Use in the Management of Transfusional Chronic Iron Overload. Drugs. 2007;67(15):2211–2230. DOI: 10.2165/00003495-200767150-00007.

3. Бабаева Т. Н., Поспелова Т. И., Нечунаева И. Н. Формирование избытка железа у пациентов с миелодиспластическим синдромом в группах промежуточного и низкого риска. Сибирский научный медицинский журнал. 2019;39(1):77–83. DOI: 10.15372/SSMJ20190111.

4. Bollig C., Schell L. K., Rücker G., Allert R., Motschall E., Niemeyer C. M., Bassler D., Meerpohl J. J. Deferasirox for Managing Iron Overload in People with Thalassaemia. Cochrane Database Systematic Reviews. 2017;8(8):CD007476. DOI: 10.1002/14651858.CD007476.pub3.

5. Timoshnikov V. A., Kichigina L. A., Selyutina O. Y., Polyakov N. E., Kontoghiorghes G. J. Antioxidant Activity of Deferasirox and its Metal Complexes in Model Systems of Oxidative Damage: Comparison with Deferiprone. Molecules. 2021;26(16):5064. DOI: 10.3390/molecules26165064.

6. Kang H., Han M., Xue, J., Baek Y., Chang J. O., Hu S., Nam H., Jo M. J., Fakhri G. E., Hutchens M. P., Choi H. S., Kim J. Renal Clearable Nanochelators for Iron Overload Therapy. Nature Communications. 2019;10(1):1–11. DOI: 10.1038/s41467-019-13143-z.

7. Piolatto A., Berchialla P., Allegra S., De Francia S., Ferrero G. B., Piga A. Pharmacological and Clinical Evaluation of Deferasirox Formulations for Treatment Tailoring. Scientific Reports. 2021;11(1):1–12. DOI: 10.1038/s41598-021-91983-w.

8. Waldmeier F., Bruin G. J., Glaenzel U., Hazell K., Sechaud R., Warrington S., Porter J. B. Pharmacokinetics, Metabolism and Disposition of Deferasirox in β-thalassemic Patients with Transfusion-dependent Iron Overload who are at Pharmacokinetic Steady State. Drug Metabolism and Disposition. 2010;38(5):808–816. DOI: 10.1124/dmd.109.030833.

9. Tanaka C. Clinical Pharmacology of Deferasirox. Clinical Pharmacokinetics. 2014;53(8):679–694. DOI: 10.1007/s40262-014-0151-4.

10. Chen J., Xu Y., Lou H., Jiang B., Shao R., Yang D., Hu Y., Ruan Z. Effect of Genetic Polymorphisms on the Pharmacokinetics of Deferasirox in Healthy Chinese Subjects and an Artificial Neural Networks Model for Pharmacokinetic Prediction. European Journal of Drug Metabolism and Pharmacokinetics. 2020;45(6):761–770. DOI: 10.1007/s13318-020-00647-z.

11. Paramanindita A. S., Harahap Y., Wijayanti T. R., Lusthom W., Prasaja B., Widjaja E., Sandra M., Puspanegara G. Efficacy of Deferasirox Through Bioequivalence Study in Indonesian Healthy Volunteer. Iranian Journal of Blood and Cancer. 2021;13(2):48–53.

12. Onal C., Tekkeli S. E. K., Sagiroglu A. A. Liquid Chromatographic Analysis for the Determination of Deferasirox in Pharmaceutical Formulations and Spiked Plasma Samples Using Dansyl Chloride Reagent. Journal of Chemical Metrology. 2020;14(1):35–41. DOI: 10.25135/jcm.35.20.01.1518.

13. Li T., Cui Z., Wang Y., Yang W., Li D., Song Q., Sun L., Ding L. A Simple LC–MS/MS Method for Determination of Deferasirox in Human Plasma: Troubleshooting of Interference from Ferric Ion in Method Development and its Application. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2018;151:145–150. DOI: 10.1016/j.jpba.2017.12.052.

14. Golpayegani M. R., Akramipour R., Fattahi N. Sensitive Determination of Deferasirox in Blood of Patients with Thalassemia Using Dispersive Liquid-liquid Microextraction Based on Solidification of Floating Organic Drop Followed by HPLC–UV. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2021;193:113735. DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113735.

15. Onal C., Tekkeli S. E. K., Sagiroglu A. A. A Liquid Chromatographic Analysis of Deferasirox in Human Breast Milk with Fluorimetric Detection. Chromatographia. 2020;83(11):1329–1333. DOI: 10.1007/s10337-020-03953-5.

16. De Francia S., Massano D., Piccione F. M., Pirro E., Racca S., Di Carlo F., Piga A. A New HPLC UV Validated Method for Therapeutic Monitoring of Deferasirox in Thalassaemic Patients. Journal of Chromatography B. 2012;893-894:127–133. DOI: 10.1016/j.jchromb.2012.02.047.