Разработка методики количественного определения генистеина для аттестации стандартного образца

Введение. Одно из актуальных направлений развития современной фармации – поиск новых высокоэффективных фармацевтических субстанций с широким спектром фармакологического действия и низкой токсичностью. В результате проведенных рядом авторов исследований были показаны положительные результаты применения генистеина для профилактики и при терапии сердечно-сосудистых заболеваний и остеопороза у женщин в период менопаузы. Он проявляет гипохолестеринемическое и антидиабетическое действие, а также радиозащитные свойства. Была проведена сравнительная оценка генистеина из жмыха семян сои культурной [Glycine max (L.) Merr.] и синтезированного ФГУП НПЦ «Фармзащита» ФМБА и кафедре ХТЛВ, СПХФУ. Исследования природного генистеина методом ГХ-МС показало наличие в образце примесь родственного изофлавона – дайдзеин. Синтезированный генистеин был оценен по показателям качественного анализа.

Цель. Цель нашего исследования являлось разработка методики количественного определения генистеина для его аттестации в качестве стандартного образца.

Материалы и методы. Объектом исследование являлся генистеин 96 %, (abcr. Gute Chemie, Германия). Количественное определение методом неводного титрования проводили на pH-метре лабораторном F20 (METTLER TOLEDO, США) в среде диметилформамида (ДМФА) х.ч. (АО «ЭКОС-1», Россия). Исследование методом ВЭЖХ выполняли на высокоэффективном жидкостном хроматографе LC-20 Prominence (Shimadzu, Япония).

Результаты и обсуждение. За основу разработки методики количественного определения генистеина использовали рекомендованную ГФ РФ XIV издания метод неводного титрования в среде ДМФА, титрант 0,1 М раствора гидроксида натрия. Конечная точка титрования (КТТ) устанавливалась с помощью индикатора тимолового синего. Однако была отмечена сложность в визуальной фиксации изменением окраски индикатора. Было предложено использовать потенциометрическое определение конечной точки титрования. Для количественного определения генистеина в БАВ и лекарственных средствах предложена методика ВЭЖХ.

Заключение. Разработана методика неводного титрования генистеина с потенциометрическим определением конечной точки титрования в среде ДМФА. Интегральная кривая потенциометрического титрования не обладает достаточной информативностью. Поэтому рекомендуется строить дифференциальную кривую титрования для определения конечной точки титрования. Валидационная оценка полученных результатов показала, что методика является правильной (RSD, % = 1,25), сходимой (RSD, % = 1,21) и внутрилабораторно прецизионной (в первый день RSD, % = 1,21, во второй день RSD, % = 1,41).  

1. Зверев Я. Ф. Противоопухолевая активность флавоноидов. Бюллетень сибирской медицины. 2019;18(2):181–194. DOI: 10.20538/1682-0363-2019-2-181-194.

2. Thangavel P., Puga-Olguín A., Rodríguez-Landa J. F., Zepeda R. C. Genistein as potential therapeutic candidate for menopausal symptoms and other related diseases. Molecules. 2019;24(21):1–17. DOI: 10.3390/molecules24213892.

3. Garbiec E., Cielecka-Piontek J., Kowalówka M., Hołubiec M., Zalewski P. Genistein – opportunities related to an interesting molecule of natural origin. Molecules. 2022;27(3):1–22. DOI: 10.3390/molecules27030815.

4. Yamagata К., Yamori Y. Potential еffects of soy isoflavones on the prevention of metabolic syndrome. Molecules. 2021;26(19):1–20. DOI: 10.3390/molecules26195863.

5. Jaiswal N., Akhtar J., Singh S. P., Badruddeen, Ahsan F. An Overview on Genistein and its Various Formulations. Drug Research. 2019;69(06):305–313. DOI: 10.1055/a-0797-3657.

6. Стрелова О. Ю., Волкова К. В., Гребенюк А. Н., Теслов Л. С. Оценка показателей качества перспективной фармацевтической субстанции на основе синтетического генистеина. Бутлеровские сообщения. 2016;48(12):94–101.

7. Леонтьев Д. А., Подпружников Ю. В., Воловик Н. В. Роль стандартных образцов в обеспечении качества лекарственных средств: регуляторные и метрологические аспекты. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016;3(16):180–188.

8. Щепочкина О. Ю., Гегечкори В. И., Прокофьева В. И., Чепило Д. А., Левко А. А., Чадова Н. Н., Шестаков В. Н. Современные подходы к разработке стандартных образцов лекарственных средств. Химико-фармацевтический журнал. 2020;54(7):49–54. DOI: 10.30906/0023-1134-2020-54-7-49-54.

9. Чикунов И. Е. Отчет о научно-исследовательской работе по теме Генистеин. Химки: ФМБА НПЦ «ФАРМЗАЩИТА»; 2012. 22 с.

10. Жигалина А. А., Дударев В. Г., Тихонова В. В., Стрелова О. Ю. Разработка синтеза генистеина для использования в качестве стандартного образца. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021;10(4–1):20–31. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-4(1)-20-31.

11. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 1. М.: ФЭМБ; 2018. 1814 с.

12. Нгуен К. Б., Абышев А. З. Валидация методик количественного определения субстанции 4,4'-диметил-7,7'-этилендиокси-2н-1-дибензопиран-2,2'-диона. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2019;8(1):59–65. DOI: 10.33380/2305-2066-2019-8-1-59-65.

13. Кутовая А. М., Давыдова В. Н., Перова И. Б., Эллер К. И. Определение профиля флавоноидов в гипогликемическом сборе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Тонкие химические технологии. 2020;15(3):39–46. DOI: 10.32362/2410-6593-2020-15-3-39-46.

14. Старчак Ю. А., Гаврилин М. В., Шинева Н. В. Трансфер аналитических методик (обзор). Разработка и регистрация лекарственных средств. 2020;9(3):182–187. DOI: 10.33380/2305-2066-2020-9-3-182-187.

15. Эпштейн Н. А. Валидация хроматографических методик: контроль чистоты пиков и специфичности методик с использованием диодно-матричных детекторов (обзор). Разработка и регистрация лекарственных средств. 2020;9(3):129–136. DOI: 10.33380/2305-2066-2020-9-3-129-136.

16. Эпштейн Н. А. Валидация аналитических методик: графические и расчетные критерии для оценки линейности методик на практике. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2019;8(2):122–130. DOI: 10.33380/2305-2066-2019-8-2-122-130.