Разработка, валидация и апробация аналитической методики количественного определения таурина методом ВЭЖХ-УФ в рамках проведения теста сравнительной кинетики растворения

Введение. Таурин является непротеиногенной аминокислотой. Молекула участвует в липидном обмене, адсорбирует жирорастворимые витамины, а его конъюгаты с желчными кислотами способствуют эмульгированию жиров в кишечнике. Лекарственные препараты, в состав которых входит молекула таурина обладают антикатарактным, кардиотоническим, метаболическим действием, а также стимулируют регенерацию. Среди лекарственных форм, где в качестве действующего вещества выступает таурин есть твердая лекарственная форма – таблетки, покрытые пленочной оболочкой. Одним из методов оценки качества твердых лекарственных форм является тест сравнительной кинетики растворения. Широко распространенным методом количественно определения в рамках теста растворения является высокоэффективная хроматография с ультрафиолетовым детектированием, однако для таурина, не содержащего хромофорных групп в своей структуре, этот метод на прямую не применим. Для решения данной проблемы можно применить метод предколоночной дериватизации, в результате которой в структуру вводится фрагмент, обеспечивающий батохромный сдвиг в УФ-спектре исходного соединения.

Цель. Разработка, валидация и апробация аналитической методики количественного определения таурина методом высокоэффективной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием в рамках проведения теста сравнительной кинетики растворения таблеток таурина дозировкой 250 и 500 мг.

Материалы и методы. Для анализа использовались препараты: таурин таблетки, покрытые пленочной оболочкой 250 мг и 500 мг, отечественного производства с действующим сроком годности. Тест сравнительной кинетики растворения проводили на приборе для теста «Растворение» DT 126 Light (ERWEKA GmbH, Германия). Хроматографическое разделение и детектирование проводили на высокоэффективном жидкостном хроматографе Nexera-i LC-2040 (Shimadzu Corporation, Япония), оснащенном термостатом колонок и образцов, дегазатором, автосамплером и ультрафиолетовым детектором. Детектирование проводилось при длине волны 254 нм после дериватизации молекулы таурина 4-толуолсульфонилхлоридом. Использовали колонку Shim-pack Velox C18 5 μm 4.6 × 150 мм (Shimadzu Corporation, Япония) и предколонку Shim-pack Velox C18 EXP Guard Column Cartridge 5 μm 4.6 × 5 мм (Shimadzu Corporation, Япония). Обработку первичных данных проводили при помощи программного обеспечения LabSolutions Single LC (Shimadzu Corporation, Япония).

Результаты и обсуждение. Подобраны оптимальные условия дериватизации таурина, разработана и валидирована методика количественного определения таурина методом ВЭЖХ-УФ в рамках теста сравнительной кинетики растворения в трёх средах растворения: 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты с рН 1,2, ацетатный буферный раствор с рН 4,5, фосфатный буферный раствор с рН 6,8, а также в среде контроля качества – воде очищенной. При проведении валидации разработанной методики установлено, что валидационные характеристики находятся в пределах критериев приемлемости во всех средах растворения. Аналитический диапазон методики составил 0,05–1,2 мг/мл и позволяет применять разработанную методику для количественного определения в рамках теста сравнительной кинетики растворения таблеток с дозировкой 250 мг и 500 мг.

Заключение. Методика была апробирована в трех средах растворения: 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты с рН 1,2, ацетатный буферный раствор с рН 4,5, фосфатный буферный раствор с рН 6,8, а также в среде контроля качества – воде очищенной. Во всех средах наблюдалось полное высвобождение у обеих дозировок (более 85 % к 30 минуте).

1. Gentile C. L., Nivala A. M., Gonzales J. C., Pfaffenbach K. T., Wang D., Wei Y., Jiang H., Orlicky D. J., Petersen D. R., Pagliassotti M. J., Maclean K. N. Experimental evidence for therapeutic potential of taurine in the treatment of nonalcoholic fatty liver disease. American Journal of Physiology-Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 2011;301(6):1710–1722. DOI: 10.1152/ajpregu.00677.2010.

2. Page L. K., Jeffries O., Waldron M. Acute taurine supplementation enhances thermoregulation and endurance cycling performance in the heat. European journal of sport science. 2019;19(8):1101–1109. DOI: 10.1080/17461391.2019.1578417.

3. Jacobsen J. G., Smith L. H. Biochemistry and physiology of taurine and taurine derivatives. Physiological Reviews. 1968;48(2):424–511. DOI: 10.1152/physrev.1968.48.2.424.

4. Xavier J. M., Morgado A. L., Rodrigues C. M., Solá S. Tauroursodeoxycholic acid increases neural stem cell pool and neuronal conversion by regulating mitochondria-cell cycle retrograde signaling. Cell Cycle. 2014;13(22):3576–3589. DOI: 10.4161/15384101.2014.962951.

5. Płotka-Wasylka J. M., Morrison C., Biziuk M., Namiesnik J. Chemical derivatization processes applied to amine determination in samples of different matrix composition. Chemical Reviews. 2015;115(11):4693–4718. DOI: 10.1021/cr4006999.

6. Zaki M. M., Abdel-Al H., Al-Sawi M. Assessment of plasma amino acid profile in autism using cation-exchange chromatography with postcolumn derivatization by ninhydrin. Turkish Journal of Medical Sciences. 2017;47(1):260–267. DOI: 10.3906/sag-1506-105.

7. Önal A. A review: Current analytical methods for the determination of biogenic amines in foods. Food chemistry. 2007;103(4):1475–1486. DOI: 10.1016/j.foodchem.2006.08.028.

8. Lehtonen P., Saarinen M., Vesanto M., Riekkola M. L. Determination of wine amines by HPLC using automated precolumn derivatisation with o-phthalaldehyde and fluorescence detection. Zeitschrift für Lebensmittel-Untersuchung und Forschung. 1992;194(5):434–437. DOI: 10.1007/BF01197724.

9. Gomes E. P., Borges C. V., Monteiro G. C., Belin M. A. F., Minatel I. O., Junior A. P., Tecchio M. A., Lima G. P. P. Preharvest salicylic acid treatments improve phenolic compounds and biogenic amines in ‘Niagara Rosada’ table grape. Postharvest Biol. Technol. 2021;176:111–505. DOI: 10.1016/j.postharvbio.2021.111505.

10. Omer M., Omar M., Thiel A., Elbashir A. High Performance Liquid Chromatographic Methods for Analysis of Taurine in Energy Drinks after Pre-column Derivatization. Eurasian Journal of Analytical Chemistry. 2018;13(5). DOI: 10.29333/ejac/93422.