Совместное определение нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС

Введение. В настоящее время предполагается, что вирус SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2), вызывающий новую коронавирусную инфекцию COVID-19 (Coronavirus Disease 2019) останется постоянной глобальной угрозой. В связи с этим, вопрос разработки лекарственных препаратов для лечения COVID-19 остается актуальным. Комбинация нирматрелвира с ритонавиром обладает прямым противовирусным действием: при ее применении удается повысить эффективность терапии и снизить риск осложнений COVID-19. Разработка и валидация методики совместного определения нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека является необходимой задачей для проведения аналитической части клинического исследования с целью дальнейшего изучения фармакокинетических параметров.

Цель. Целью исследования является разработка и валидация методики совместного определения нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-селективным детектированием (ВЭЖХ-МС/ МС) для дальнейшего изучения фармакокинетики.

Материалы и методы. Определение нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека проводили методом ВЭЖХ-МС/МС. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения белков ацетонитрилом. Внутренний стандарт: прометазин. Подвижная фаза: 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в воде (элюент А), 0,1%-й муравьиной кислоты в ацетонитриле (элюент В). Колонка: Phenomenex Luna C18 50 × 2,0 мм, 5 мкм. Аналитический диапазон методики: 50,00–10000,00 нг/мл для нирматрелвира, 5,00–1000,00 нг/мл для ритонавира в плазме крови. Источник ионизации и ионизация: электроспрей, положительная. Условия детектирования: 499,90 → 110,10 m/z, 499,90 → 319,20 m/z (нирматрелвир), 720,90 → 426,00 m/z, 720,90 → 296,20 m/z, 720,90 → 268,10 m/z, 720,90 → 197,10 m/z, 720,90 → 139,90 m/z (ритонавир), 285,15 → 198,05 m/z (прометазин).

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим валидационным параметрам: селективность, эффект матрицы, калибровочная кривая, точность, прецизионность, степень извлечения, нижний предел количественного определения перенос пробы, стабильность.

Заключение. Разработана и валидирована методика совместного определения нирматрелвира и ритонавира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС. Подтвержденный аналитический диапазон методики составил 50,00–10000,00 нг/мл для нирматрелвира, 5,00– 1000,00 нг/мл для ритонавира в плазме крови. Полученный аналитический диапазон позволяет применять разработанную методику для проведения фармакокинетических исследований комбинированных препаратов нирматрелвира и ритонавира.

1. Garg I., Shekhar R., Sheikh A. B., Pal S. Impact of COVID-19 on the changing patterns of respiratory syncytial virus infections. Infectious Disease Reports. 2022;14(4):558–568. DOI: 10.3390/idr14040059.

2. Hiremath S., McGuinty M., Argyropoulos C., Brimble K. S., Brown P. A., Chagla Z., Cooper R., Hoar S., Juurlink D., Treleaven D., Walsh M. Prescribing nirmatrelvir/ritonavir for COVID-19 in advanced CKD. Clinical Journal of the American Society of Nephrology. 2022;17(8):1247–1250. DOI: 10.2215/CJN.05270522.

3. Hung Y. P., Lee J. C., Chiu C. W., Lee C. C., Tsai P. J., Hsu I. L., Ko W. C. Oral Nirmatrelvir/Ritonavir Therapy for COVID-19: The Dawn in the Dark? Antibiotics. 2022;11(2):220. DOI: 10.3390/antibiotics11020220.

4. Marzi M., Vakil M. K., Bahmanyar M., Zarenezhad E. Paxlovid: mechanism of action, synthesis, and in silico study. BioMed Research International. 2022;2022:7341493. DOI: 10.1155/2022/7341493.

5. Saravolatz L. D., Depcinski S., Sharma M. Molnupiravir and Nirmatrelvir-Ritonavir: Oral Coronavirus Disease 2019 Antiviral Drugs. Clinical Infectious Diseases. 2023;76(1):165–171. DOI: 10.1093/cid/ciac180.

6. Toussi S. S., Neutel J. M., Navarro J., Preston R. A., Shi H., Kavetska O., LaBadie R. R., Binks M., Chan P. L., Demers N., Corrigan B. Pharmacokinetics of Oral Nirmatrelvir/Ritonavir, a Protease Inhibitor for Treatment of COVID-19, in Subjects With Renal Impairment. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 2022;112(4):892–900. DOI: 10.1002/cpt.2688.

7. Extance A. Covid-19: What is the evidence for the antiviral Paxlovid? BMJ. 2022;377:o1037. DOI: 10.1136/bmj.o1037.

8. Guyon J., Novion M., Fulda V., Ducint D., Molimard M., Couzi L., Kaminski H., Salvo F., Bouchet S. A UPLC-MS/MS Method for Plasma Biological Monitoring of Nirmatrelvir and Ritonavir in the Context of SARS-CoV-2 Infection and Application to a Case. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 2022;33(10):1975–1981. DOI: 10.1021/jasms.2c00204.

9. Martens-Lobenhoffer J., Böger C. R., Kielstein J., Bode-Böger S. M. Simultaneous quantification of nirmatrelvir and ritonavir by LC-MS/MS in patients treated for COVID-19. Journal of Chromatography B. 2022;1212:123510. DOI: 10.1016/j.jchromb.2022.123510.

10. Lingscheid T., Kinzig M., Krüger A., Müller N., Bölke G., Tober-Lau P., Münn F., Kriedemann H., Witzenrath M., Sander L. E., Sörgel F. Pharmacokinetics of Nirmatrelvir and Ritonavir in COVID-19 Patients with End-Stage Renal Disease on Intermittent Hemodialysis. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2022;66(11). DOI: 10.1128/aac.01229-22.

11. Liu C., Zhu M., Cao L., Boucetta H., Song M., Hang T., Lu Y. Simultaneous determination of nirmatrelvir and ritonavir in human plasma using LC–MS/MS and its pharmacokinetic application in healthy Chinese volunteers. Biomedical Chromatography. 2022;36(11):e5456. DOI: 10.1002/bmc.5456.

12. Singh R. S., Toussi S. S., Hackman F., Chan P. L., Rao R., Allen R., Van Eyck L., Pawlak S., Kadar E. P., Clark F., Shi H., Anderson A. S., Binks M., Menon S., Nucci G., Bergman A. Innovative Randomized Phase I Study and Dosing Regimen Selection to Accelerate and Inform Pivotal COVID-19 Trial of Nirmatrelvir. C Clinical Pharmacology & Therapeutics. 2022;112(1):101–111. DOI: 10.1002/cpt.2603.