Определение фавипиравира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС

Введение. Одним из наиболее известных препаратов широкого спектра действия против многих РНК-вирусов, в том числе и вируса тяжелого острого респираторного синдрома 2 [severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2)] является фавипиравир. За счет своей структуры фавипиравир встраивается в РНК вируса и блокирует его дальнейшую репликацию в клетке организма человека. Также фавипиравир указан в перечне жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов, что подтверждает значимость для российского здравоохранения этого лекарственного средства в борьбе с распространенными РНК-вирусами. Нами уже были опубликованы биоаналитические методики определения фавипиравира в плазме крови методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектором (ВЭЖХ-УФ) с целью изучения фармакокинетики фавипиравира при парентеральном введении (аналитический диапазон методики составил 0,25–200,00 мкг/мл для дозировки фавипиравира 400 мг в 1 флаконе лиофилизата для приготовления концентрата для приготовления раствора для инфузий) и методом ВЭЖХ с тандемным масс-селективным детектированием (ВЭЖХ-МС/МС) с целью изучения фармакокинетики β-D-N4-гидроксицитидина и фавипиравира при их совместном определении в плазме крови при пероральном введении (аналитический диапазон методики составил 250,00– 20000,00 нг/мл для дозировки фавипиравира 400 мг в 1 таблетке). Ожидание низких значений концентраций фавипиравира (в данном исследовании дозировка фавипиравира в рассматриваемых лекарственных средствах составляет 200 мг в 1 таблетке) и, в связи с этим расширение диапазона за счет снижения значения нижнего предела количественного определения (НПКО), применяемого в данном исследовании, обуславливает необходимость разработки другой методики. Поэтому в настоящем исследовании освещается разработка и валидация методики определения фавипиравира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС с аналитическим диапазоном 50,00– 15000,00 нг/мл.

Цель. Разработка и валидация методики определения фавипиравира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС для дальнейшего исследования фармакокинетики и биоэквивалентности лекарственных средств фавипиравира является целью настоящего исследования.

Материалы и методы. В процессе пробоподготовки использовался способ осаждения белков метанолом. Раствор меченного стабильными изотопами фавипиравира-13С3 применялся как внутренний стандарт, подвижной фазой служили 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в воде (элюент А) и метанол (элюент В). Хроматографическая колонка – Phenomenex Kinetex C18, 100 × 3,0 мм. Определение фавипиравира в плазме крови человека проводили методом ВЭЖХ посредством тандемного масс-спектрометрического детектора с тройным квадруполем. Аналитический диапазон для фавипиравира – 50,00–15000,00 нг/мл в плазме крови человека.

Результаты и обсуждение. Проведение валидации разработанной методики было осуществлено по следующим параметрам: селективность, калибровочная кривая, точность, прецизионность, эффект матрицы, перенос пробы, степень извлечения, НПКО, стабильность (стабильность исходных и рабочих стандартных растворов аналита; краткосрочная стабильность; стабильность при трехкратной заморозке-разморозке; долгосрочная стабильность аналита в матрице).

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения фавипиравира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС с подтвержденным аналитическим диапазоном 50,00–15000,00 нг/мл в плазме крови человека. Данная методика позволяет использовать ее для аналитической части исследований фармакокинетики и биоэквивалентности лекарственных средств, содержащих фавипиравир, с целью расширения их ассортимента на отечественном фармацевтическом рынке.

1. Балакин К. В., Стороженко Р. В., Якубова Е. В. Фавипиравир как средство терапии COVID-19. Научный бюллетень ХимРар. 2023:1;1–26.

2. Furuta Y., Gowen B. B., Takahashi K., Smee D. F., Barnard D. L. Favipiravir (T-705), a Novel Viral RNA Polymerase Inhibitor. Antiviral research. 2013;100(2):446–454. DOI: 10.1016/j.antiviral.2013.09.015.

3. Peng Q., Peng R., Yuan B., Wang M., Zhao J., Fu L., Qi J., Shi Y. Structural Basis of SARSCoV-2 Polymerase Inhibition by Favipiravir. The Innovation. 2021;2(1):100080. DOI: 10.1016/j.xinn.2021.100080.

4. Shannon A., Selisko B., Le NTT, Huchting J., Touret F., Piorkowski G., Fattorini V., Ferron F., Decroly E., Meier C., Coutard B., Peersen O., Canard B. Favipiravir strikes the SARS-CoV-2 at its Achilles heel, the RNA polymerase. BioRxiv. 2020. DOI: 10.1101/2020.05.15.098731.

5. Du Y. X., Chen X. P. Favipiravir: Pharmacokinetics and Concerns about Clinical Trials for 2019‐nCoV Infection. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 2020;108(2):242–247. DOI: 10.1002/cpt.1844.

6. Sood S., Bhatia G. K., Seth P., Kumar P., Kaur J., Gupta V., Punia S., Tuli H. S. Efficacy and Safety of New and Emerging Drugs for COVID-19: Favipiravir and Dexamethasone. Current Pharmacology Reports. 2021;7:49–54. DOI: 10.1007/s40495-021-00253-w.

7. Shiraki K., Sato N., Sakai K., Matsumoyo Sh., Kszynski R. H., Takemoto M. Antiviral Therapy for COVID-19: Derivation of Optimal Strategy Based on Past Antiviral and Favipiravir Experiences. Pharmacology & Therapeutics. 2022;235:108121. DOI: 10.1016/j.pharmthera.2022.108121.

8. Карнакова П. К., Комаров Т. Н., Арчакова О. А., Щелгачева Д. С., Алешина А. В., Багаева Н. С., Карпова П. А., Шохин И. Е. Совместное определение кандесартана и гидрохлоротиазида в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021;10(4):177–189. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-4-177-189.

9. Tiris G., Gazioglu I., Furton K. G., Kabir A., Locatelli M. Fabric Phase Sorptive Extraction Combined with High Performance Liquid Chromatography for the Determination of Favipiravir in Human Plasma and Breast Milk. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2023;223:115131. DOI: 10.1016/j.jpba.2022.115131.

10. Abdallah I. A., Hammad Sh. F., Bedair A., Mansour F. R. Menthol-assisted Homogenous Liquid-Liquid Microextraction for HPLC/UV Determination of Favipiravir as an Antiviral for COVID-19 in Human Plasma. Journal of Chromatography B. 2022;1189:123087. DOI: 10.1016/j.jchromb.2021.123087.

11. Комаров Т. Н., Карнакова П. К., Арчакова О. А., Щелгачева Д. С., Багаева Н. С., Шохин И. Е., Заславская К. Я., Белый П. А. Разработка и валидация методики определения фавипиравира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2022;11(3):220–229. DOI: 10.33380/2305-2066-2022-11-3-220-229.

12. Abd Allah F. I., Abdelhmaid A., Himida M., Elkashlan A. M., El-Attar A.-A. M. M. Fully Validated UPLC–MS/MS Method for Quantifying Favipiravir in Human Plasma Boosted Lean Six Sigma: An Application For a Bioequivalence Study. Biomedical Chromatography. 2022;36(9):e5381. DOI: 10.1002/bmc.5381.

13. Комаров Т. Н., Карнакова П. К., Арчакова О. А., Щелгачева Д. С., Багаева Н. С., Шохин И. Е., Заславская К. Я., Белый П. А. Совместное определение основного метаболита молнупиравира (β-D-N4-гидроксицитидина) и фавипиравира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2023;12(1):215–226. DOI: 10.33380/2305-2066-2023-12-1-215-226.

14. Onmaz D. E., Abusoglu S., Omnaz M., Yerlikaya F. H., Unlu A. Development and Validation of a Sensitive, Fast and Simple LC-MS/MS Method for the Quantitation of Favipiravir in Human Serum. Journal of Chromatography B. 2021;1176:122768. DOI: 10.1016/j.jchromb.2021.122768.

15. Challenger E., Penchala S. D., Hale C., Fitzgerald R., Walker L., Reynolds H., Chiong J., Fletcher T., Khoo S., Else L. Development and Validation of an LC-MS/MS Method for Quantification of Favipiravir in Human Plasma. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2023;233:115436. DOI: 10.1016/j.jpba.2023.115436.

16. Bekegnran C. P., Driouich J. S., Breuer J., Barthelemy K., Giocanti M., de Lamballerie X., Kreins A. Y., Nougairede A., Solas C. Simultaneous Quantitation of Favipiravir and its Hydroxide Metabolite in Human Plasma and Hamster Matrices Using a UPLC–MS/MS Method. Biomedical Chromatography. 2023;37(9):e5689. DOI: 10.1002/bmc.5689.

17. Sağlam O., Demiray G., Güney B., Doğan-Kurtoğlu E., Ulusoy M. G., Saraner N., Sevici G., Nacak M., Erenmemişoğlu A., Tüzer V. Single Dose, Two-way Crossover Bioequivalence Study of Favipiravir Tablet in Healthy Male Subjects. Journal of Pharmacy and Drug Development. 2020;2(2):1–9. DOI: 10.5281/zenodo.4361817.

18. Алешина А. В., Комаров Т. Н., Арчакова О. А., Щелгачева Д. С., Багаева Н. С., Давыданова В. В., Савченко А. Ю., Шохин И. Е. Определение транексамовой кислоты в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021;10(2):120–127. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-2-120-127.