Опыт проведения валидации методики оценки нейтрализующих антител ромиплостима в плазме крови человека

Введение. Ромиплостим представляет собой аналог пептида слитого белка тромбопоэтина (ТПО), который увеличивает количество тромбоцитов за счет связывания и активации человеческого рецептора ТПО. Используется для лечения тромбоцитопении, связанной с хронической иммунной тромбоцитопенией. Для ромиплостима одной из возможных нежелательных реакций со стороны иммунной системы является иммуногенность – выработка противолекарственных антител к препарату, в том числе нейтрализующих антител, которые могут влиять на эффективность и профиль безопасности препарата.

Цель. Валидировать методику определения нейтрализующих антител к ромиплостиму в плазме крови человека для дальнейшего проведения клинических исследований иммуногенности.

Материалы и методы. В исследовании были использованы поликлональные антитела кролика к ромиплостиму, в качестве стандартного образца брали Энплейт® производства Amgen Europe, для оценки специфичности брали плацебо производства ООО «ГЕРОФАРМ», клеточная линия 32D-hTPOR clone 63 со стабильной экспрессией TPO-рецептора человека и набор для определения хемилюминесценции CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay от Promega. Эксперимент проводили на клеточной линии 32D-hTPOR clone 63, которую рассевали в первый день и вносили раститровку концентраций нейтрализующих антител с константной концентрацией ромиплостима, затем на второй день детектировали хемилюминесценцию. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием программного обеспечения Prism 9.

Результаты и обсуждение. Продемонстрированы показатели специфичности методики; в максимальной концентрации препарат отличается от плацебо в 309 раз по остаточному уровню жизнеспособности клеток. Линейность методики по коэффициенту детерминации 0,9969. Определена прецизионность методики: сходимость составила 1–9 %, внутрилабораторная прецизионность – 3–18 %. Коэффициент вариации селективности методики составил 22 %. Для параметра «правильность» определены значения «внесено/найдено» на уровне 90–101 %. Доказано отсутствие эффекта матрицы.

Заключение. Можно утверждать, что методика является линейной, специфичной, высокопрецизионной, правильной, селективной и с доказанным отсутствием эффекта матрицы, что позволяет применять ее для определения иммуногенности препаратов ромиплостим при проведении клинических исследований.

1. Kayal L., Jayachandran S., Singh K. Idiopathic thrombocytopenic purpura. Contemporary Clinical Dentistry. 2014;5(3):410–414. DOI: 10.4103/0976-237X.137976.

2. Provan D., Arnold D. M., Bussel J. B., Chong B. H., Cooper N., Gernsheimer T., Ghanima W., Godeau B., González-López T. J., Grainger J., Hou M., Kruse C., McDonald V., Michel M., Newland A. C., Pavord S., Rodeghiero F., Scully M., Tomiyama Y., Wong R. S., Zaja F., Kuter D. J. Updated international consensus report on the investigation and management of primary immune thrombocytopenia. Blood Advances. 2019;3(22):3780–3817. DOI: 10.1182/bloodadvances.2019000812.

3. Zufferey A., Kapur R., Semple J. Pathogenesis and Therapeutic Mechanisms in Immune Thrombocytopenia (ITP). Journal of Clinical Medicine. 2017;6(2):16. DOI: 10.3390/jcm6020016.

4. Pietras N. M., Pearson-Shaver A. L. Immune Thrombocytopenic Purpura. StatPearls. Treasure Island (FL): StatPearls Publishing; 2022.

5. Neunert C., Noroozi N., Norman G., Buchanan G. R., Goy J., Nazi I., Kelton J. G., Arnold D. M. Severe bleeding events in adults and children with primary immune thrombocytopenia: a systematic review. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 2015;13(3):457–464. DOI: 10.1111/jth.12813.

6. Soff G. A., Miao Y., Bendheim G., Batista J., Mones J. V., Parameswaran R., Wilkins C. R., Devlin S. M., Abou-Alfa G. K., Cercek A., Kemeny N. E., Sarasohn D. M., Mantha S. Romiplostim Treatment of Chemotherapy-Induced Thrombocytopenia. Journal of Clinical Oncology. 2019;37(31):2892–2898. DOI: 10.1200/JCO.18.01931.

7. Bussel J. B., Soff G., Balduzzi A., Cooper N., Lawrence T., Semple J. W. A Review of Romiplostim Mechanism of Action and Clinical Applicability. Drug Design, Development and Therapy. 2021;15:2243–2268. DOI: 10.2147/DDDT.S299591.

8. Kuter D. J. Romiplostim. In: Lyman G. H., Dale D. C., editors. Hematopoietic Growth Factors in Oncology. New York: Springer; 2011. P. 267–288. DOI: 10.1007/978-1-4419-7073-2_16.

9. Yang A. S. Development of romiplostim: a novel engineered peptibody. Seminars in Hematology. 2015;52(1):12–15. DOI: 10.1053/j.seminhematol.2014.10.007.

10. Bussel J.B., Kuter D. J., George J. N., McMillan R., Aledort L. M., Conklin G. T., Lichtin A. E., Lyons R. M., Nieva J., Wasser J. S., Wiznitzer I., Kelly R., Chen C.-F., Nichol J. L. AMG 531, a thrombopoiesis-stimulating protein, for chronic ITP. New England Journal of Medicine. 2006;355(16):1672–1681. DOI: 10.1056/NEJMoa054626.

11. Kuter D. J., Bussel J. B., Lyons R. M., Pullarkat V., Gernsheimer T. B., Senecal F. M., Aledort L. M., George J. N., Kessler C. M., Sanz M. A., Liebman H. A., Slovick F. T., de Wolf J. T. M., Bourgeois E., Guthrie T. H., Newland A., Wasser J. S., Hamburg S. I., Grande C., Lefrère F., Lichtin A. E., Tarantino M. D., Terebelo H. R., Viallard J.-F., Cuevas F. J., Go R. S., Henry D. H., Redner R. L., Rice L., Schipperus M. R., Guo D. M., Nichol J. L. Efficacy of romiplostim in patients with chronic immune thrombocytopenic purpura: a double-blind randomised controlled trial. The Lancet. 2008;371(9610):395–403. DOI: 10.1016/S0140-6736(08)60203-2.

12. Shirasugi Y., Ando K., Miyazaki K., Tomiyama Y., Okamoto S., Kurokawa M., Kirito K., Yonemura Y., Mori S., Usuki K., Iwato K., Hashino S., Wei H., Lizambri R. Romiplostim for the treatment of chronic immune thrombocytopenia in adult Japanese patients: a double-blind, randomized Phase III clinical trial. International Journal of Hematology. 2011;94(1):71–80. DOI: 10.1007/s12185-011-0886-8.

13. Schellekens H. Immunogenicity of therapeutic proteins: Clinical implications and future prospects. Clinical Therapeutics. 2002;24(11):1720–1740. DOI: 10.1016/s0149-2918(02)80075-3.

14. Civoli F., Kroenke M. A., Reynhardt K., Zhuang Y., Kaliyaperumal A., Gupta S. Development and optimization of neutralizing antibody assays to monitor clinical immunogenicity. Bioanalysis. 2012;4(22):2725–2735. DOI: 10.4155/bio.12.239.

15. Chalmers S., Tarantino M. D. Romiplostim as a treatment for immune thrombocytopenia: a review. Journal of Blood Medicine. 2015;6:37–44. DOI: 10.2147/JBM.S47240.

16. Shankar G., Devanarayan V., Amaravadi L., Barrett Y. C., Bowsher R., Finco-Kent D., Fiscella M., Gorovits B., Kirschner S., Moxness M., Parish T., Quarmby V., Smith H., Smith W., Zuckerman L. A., Koren E. Recommendations for the validation of immunoassays used for detection of host antibodies against biotechnology products. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2008;48(5):1267–1281. DOI: 10.1016/j.jpba.2008.09.020.

17. Shen M., Dai T. Statistical methods of screening cut point determination in immunogenicity studies. Bioanalysis. 2021;13(7):551–563. DOI: 10.4155/bio-2019-0296.

18. Arefeva A. N., Makarenko I. E., Saparova V. B., Karal-ogli D. D., Afanaseva A. N., Dorotenko A. R., Kalatanova A. V., Kurkin D. V., Khokhlov A. L., Drai R. V. Comparability of biosimilar romiplostim with originator: Protein characterization, animal pharmacodynamics and pharmacokinetics. Biologicals. 2023;81:101666. DOI: 10.1016/j.biologicals.2023.101666.

19. Jawa V., Hokom M., Hu Z., El-Abaadi N., Zhuang Y., Berger D., Gupta S., Swanson S. J., Chirmule N. Assessment of immunogenicity of romiplostim in clinical studies with ITP subjects. Annals of Hematology. 2010;89(1):75–85. DOI: 10.1007/s00277-010-0908-2.

20. Mytych D. T., Park J. K., Kim J., Barger T. E., Boshier A., Jawa V., Kuter D. J. Assessment of romiplostim immunogenicity in adult patients in clinical trials and in a global postmarketing registry. British Journal of Haematology. 2020;190(6):923–932. DOI: 10.1111/bjh.16658.

21. Fang Q., Huang F., Liang J., Chen Y., Li C., Zhang M., Wu X., Luo W. Safety of romiplostim and eltrombopag for children with immune thrombocytopenia: a pharmacovigilance study of the FDA adverse event reporting system database. Expert Opinion on Drug Safety. 2023;22(8):707–714. DOI: 10.1080/14740338.2023.2182288.