Разработка и валидация методики на основе функционального клеточного теста для определения нейтрализующих антител к адалимумабу в сыворотке крови человека

Введение. Адалимумаб – рекомбинантное, полностью гуманизированное моноклональное антитело, которое связывается с высокой степенью сродства и специфичностью с растворимой и мембранной формами фактора некроза опухоли (TNFα) и используется для лечения ряда аутоиммунных заболеваний, таких как ревматоидный артрит и другие наиболее распространенные воспалительные артропатии (анкилозирующий спондилит, псориатический артрит). Несмотря на доказанную эффективность лечения адалимумабом, у части пациентов с течением времени происходит снижение клинической эффективности и возникает риск нежелательных явлений. Одним из объяснений данного эффекта является образование антилекарственных антител (ADA) к препарату, в том числе и нейтрализующих антител (NAb). В настоящее время при разработке новых препаратов и препаратов-биоаналогов неотъемлемой частью клинических испытаний стала оценка и характеристика нейтрализующих антител.

Цель. Разработка и валидация методики определения нейтрализующих антител к адалимумабу в сыворотке крови человека.

Материалы и методы. Определение нейтрализующих антител к адалимумабу основано на использовании клеточной линии L-929, чувствительной к индукции апоптоза посредством TNFα; нейтрализующие антитела связываются с адалимумабом, блокируя его взаимодействие с TNFα, что приводит к TNFα-опосредованной цитотоксичности. Измерение цитотоксичности проводили с помощью резазурина, ароматического соединения, представляющего собой окислительно-восстановительный индикатор.

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по показателям: пределу исключения, селективности, чувствительности, прецизионности, специфичности и стабильности (краткосрочной и долгосрочной). Важной частью разработки методики определения нейтрализующих антител является подбор концентраций TNFα (4 нг/мл) и адалимумаба (250 нг/мл), а также определение минимального необходимого разведения образца: данный параметр составил 1 : 20. По итогам валидации был выбран «плавающий» предел исключения с поправочным коэффициентом (фактор нормализации) равным 0,86. Чувствительность разработанной методики составила 108,9 нг/мл нейтрализующих антител к адалимумабу.

Заключение. Полученные при валидации методики результаты позволяют применять методику определения нейтрализующих антител к адалимумабу в сыворотке крови человека в исследовании иммуногенности препаратов адалимумаба, в том числе при проведении клинических исследований биоэквивалентности.

1. Lu R.-M., Hwang Y.-C., Liu I.-J., Lee C.-C., Tsai H.-Z., Li H.-J., Wu H.-C. Development of therapeutic antibodies for the treatment of diseases. Journal of biomedical science. 2020;27(1):1. DOI: 10.1186/s12929-019-0592-z.

2. Tobón G. J., Youinou P., Saraux A. The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis. Journal of autoimmunity. 2010;35(1):10–14. DOI: 10.1016/j.jaut.2009.12.009.

3. Zen M., Salmaso L., Barbiellini Amidei C., Giollo A., Fedeli U., Bellio S., Arru F., Gennaio I., Saia M., Doria A. AB1628 the incidence and prevalence of rheumatoid arthritis in Italy in the last decade. Annals of the rheumatic diseases. 2023;82(1):2048–2048. DOI: 10.1136/annrheumdis-2023-eular.1432.

4. Kukar M., Petryna O., Efthimiou P. Biological targets in the treatment of rheumatoid arthritis: a comprehensive review of current and in-development biological disease modifying anti-rheumatic drugs. Biologics: targets & therapy. 2009;3:443–457.

5. Rein P., Mueller R. B. Treatment with Biologicals in Rheumatoid Arthritis: An Overview. Rheumatology and therapy. 2017;4:247–261. DOI: 10.1007/s40744-017-0073-3.

6. Leonardi C., Langley R. G., Papp K., Tyring S. K., Wasel N., Vender R., Unnebrink K., Gupta S. R., Valdecantos W. C., Bagel J. Adalimumab for treatment of moderate to severe chronic plaque psoriasis of the hands and feet: efficacy and safety results from REACH, a randomized, placebo-controlled, double-blind trial. Archives of dermatology. 2011;147(4):429–436. DOI: 10.1001/archdermatol.2010.384.

7. Sator P. Safety and tolerability of adalimumab for the treatment of psoriasis: a review summarizing 15 years of real-life experience. Therapeutic advances in chronic disease. 2018;9(8):147–158. DOI: 10.1177/2040622318772705.

8. Mantovani L., Medaglia M., Piacentini P., Tricca M., Vena G. A., Vozza A., Castellino G., Roccia A. Burden of Moderate-to-Severe Plaque Psoriasis and New Therapeutic Approaches (Secukinumab): An Italian Perspective. Dermatology and therapy. 2016;6:151–167. DOI: 10.1007/s13555-016-0114-9.

9. Badri T., Kumar P., Oakley A.M. Plaque Psoriasis. StatPearls. 2022. Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK430879/ Accessed: 01.11.2023.

10. Bu J., Ding R., Zhou L., Chen X., Shen E. Epidemiology of Psoriasis and Comorbid Diseases: A Narrative Review. Frontiers in immunology. 2022;13:880201. DOI: 10.3389/fimmu.2022.880201.

11. Mansouri Y., Goldenberg G. Biologic safety in psoriasis: review of long-term safety data. The Journal of clinical and aesthetic dermatology. 2015;8(2):30–42.

12. Doevendans E., Schellekens H. Immunogenicity of Innovative and Biosimilar Monoclonal Antibodies. Antibodies. 2019;8(1). DOI: 10.3390/antib8010021.

13. Gehin J. E., Goll G. L., Brun M. K., Jani M., Bolstad N., Syversen S. W. Assessing Immunogenicity of Biologic Drugs in Inflammatory Joint Diseases: Progress Towards Personalized Medicine. BioDrugs. 2022;36(6):731–748. DOI: 10.1007/s40259-022-00559-1.

14. Liang S., Zhang C. Prediction of immunogenicity for humanized and full human therapeutic antibodies. PLOS ONE. 2020;15(8):e0238150. DOI: 10.1371/journal.pone.0238150.

15. Myler H., Pedras-Vasconcelos J., Lester T., Civoli F., Xu W., Wu B., Vainshtein I., Luo L., Hassanein M., Liu S., Ramaswamy S. S., Mora J., Pennucci J., McCush F., Lavelle A., Jani D., Ambakhutwala A., Baltrukonis D., Barker B., Carmean R., Chung S., Dai S., DeWall S., Dholakiya S. L., Dodge R., Finco D., Yan H., Hays A., Hu Z., Inzano C., Kamen L., Lai C. H., Meyer E., Nelson R., Paudel A., Phillips K., Poupart M. E., Qu Q., Abhari M.R., Ryding J., Sheldon C., Spriggs F., Warrino D., Wu Y., Yang L., Pasas-Farmer S. Neutralizing Antibody Validation Testing and Reporting Harmonization. The AAPS Journal. 2023;25:69. DOI: 10.1208/s12248-023-00830-5.

16. Flick D. A., Gifford G. E. Comparison of in vitro cell cytotoxic assays for tumor necrosis factor. Journal of immunological methods. 1984;68(1–2):167–175. DOI: 10.1016/0022-1759(84)90147-9.

17. Jani D., Marsden R., Gunsior M., Hay L. S., Ward B., Cowan K. J., Azadeh M., Barker B., Cao L., Closson K. R., Coble K., Dholakiya S. L., Dusseault J., Hays A., Herl C., Hodsdon M. E., Irvin S. C., Kirshner S., Kolaitis G., Kulagina N., Kumar S., Lai C. H., Lipari F., Liu S., Merdek K. D., Moldovan I. R., Mozaffari R., Pan L., Place C., Snoeck V., Manning M. S., Stocker D., Tary-Lehmann M., Turner A., Vainshtein I., Verthelyi D., Williams W. T., Yan H., Yan W., Yang L., Yang L., Zemo J., Zhong Z. D. Anti-drug Antibody Sample Testing and Reporting Harmonization. The AAPS Journal. 2022;24:113. DOI: 10.1208/s12248-022-00762-6.