Количественное определение феназепама и его активного метаболита в плазме крови человека при различных процедурах экстракции

Введение. Наличие активного метаболита 3-гидроксифеназепама (3-ОН-ФЕН), широкая межиндивидуальная вариабельность активной фракции феназепама (ФЕН) в крови, а также его терапевтического эффекта определяют актуальность терапевтического лекарственного мониторинга (ТЛМ). Для этого исследователь должен располагать экспрессной методикой с широким аналитическим диапазоном, низким пределом количественного определения (НПКО), робастной при разных методах пробоподготовки.

Цель. Разработка и валидация методик количественного определения ФЕН и 3-гидроксифеназепама для измерения содержания этих аналитов в плазме крови человека при разных методах экстракции.

Материалы и методы. Определение ФЕН и 3-ОН-ФЕН в плазме крови человека проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (ВЭЖХ-МС/МС). Для пробоподготовки использовали твердофазную экстракцию (SPE, от англ. «solid phase extraction») и жидкостную экстракцию с поддержкой (SLE, от англ. «supported liquid extraction»), иначе называемую жидкостно-жидкостной экстракцией на твердой фазе. Внутренний стандарт (ВС) − метопролол. Подвижная фаза: 0,2%-й водный раствор муравьиной кислоты (элюент А) и 100%-й ацетонитрил (элюент B); режим: градиентный. Колонка: Hypersil GOLD® C18, 50 × 2,1 мм, 3,5 мкм.

Результаты и обсуждение. Разработаны две методики количественного определения ФЕН и 3-ОН-ФЕН в плазме крови человека при разных методах пробоподготовки: SPE и SLE. Подобраны условия хроматографического разделения и масс-спектрометрической детекции изучаемых аналитов. Для обеих методик были определены следующие валидационные характеристики: селективность, калибровочная кривая, точность, прецизионность, степень экстракции, НПКО, эффект переноса, фактор матрицы, стабильность рабочих растворов и аналита в матрице.

Заключение. Результаты валидации разработанных методик соответствуют установленным критериям, что позволяет их использовать для количественного определения ФЕН и 3-ОН-ФЕН в плазме крови человека. Широкий аналитический диапазон обеих методик – 1–1000,00 нг/мл – позволяет применять их для проведения исследований фармакокинетики и биоэквивалентности, а также в токсикологии.

1. Moosmann B., Huppertz L. M., Hutter M., Buchwald A., Ferlaino S., Auwärter V. Detection and identification of the designer benzodiazepine flubromazepam and preliminary data on its metabolism and pharmacokinetics. Journal of Mass Spectrometry. 2013;48(11):1150–1159.

2. Воронина Т. А., Середенин С. Б. Перспективы поиска новых анксиолитиков. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2002;65(5):4–17.

3. Городничев А. В., Костюкова Е. Г. Место феназепама в современном применении бензодиазепиновых транквилизаторов. Современная терапия психических расстройств. 2011;2:26–29.

4. Середенин С. Б., Воронина Т. А., Незнамов Г. Г., Жердев В. П. Феназепам: 25 лет в медицинской практике. Москва: Наука; 2007. 222 с.

5. Осадший Ю. Ю., Вобленко Р. А., Арчаков Д. С., Тараканова Е. А. Место бензодиазепинов в современной терапии психических расстройств (обзор доказательных исследований). Современная терапия психических расстройств. 2016;1:2–10.

6. Brunetti P., Giorgetti R., Tagliabracci A., Huestis M. A., Busardò F. P. Designer benzodiazepines: a review of toxicology and public health risks. Pharmaceuticals. 2021;14(6):560. DOI: 10.3390/ph14060560.

7. Kerrigan S., Mellon M. B. Hinners P. Detection of phenazepam in impaired driving. Journal of Analytical Toxicology. 2013;37(8):605–610. DOI:10.1093/jat/bkt075.

8. Stephenson J. B., Golz D. E., Brasher M. J. Phenazepam and its Effects on Driving. Journal of Analytical Toxicology. 2013;37(1):25–29. DOI: 10.1093/jat/bks080.

9. Воронина Т. А. Ларионов В. Б., Головенко Н. Я., Неробкова Л. Н., Гайдуков И. О. Роль 3-оксиметаболита феназепама и леваны в реализации их нейротропного действия. Фармакокинетика и фармакодинамика. 2014;1:44–49.

10. Zastrozhin M. S., Skryabin V. Yu., Sorokin A. S., Petukhov A. E., Smirnov V. V., Pankratenko E. P., Grishina E. A., Ryzhikova K. A., Panov A. S., Savchenko L. M., Bryun E. A., Sychev D. A. CYP3A subfamily activity affects the equilibrium concentration of Phenazepam® in patients with anxiety disorders and comorbid alcohol use disorder. Pharmacogenomics. 2020;21(7):449–457. DOI: 10.2217/pgs-2019-0071.

11. Pennings E., van Amsterdam J. G. C., Schoones J. W., Kershaw S. Phenazepam Pre-Review Report Agenda item 5.8 Expert Committee on Drug Dependence Thirty-seventh Meeting. World Health Organization. 2015.

12. Жердев В. П., Воронина Т. А., Гарибова Т. Л., Колыванов Г. Б., Литвин А. А., Сариев А. К., Тохмахчи В. Н., Васильев А. Е. Оценка фармакокинетики и эффективности феназепама у крыс при трансдермальном и энтеральном способах введения. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2003;66(1):50–53.

13. Ékonomov A. L., Zherdev V. P. Method of quantitative gas-chromatographic determination of phenazepam and its metabolite 3-hydroxyphenazepam in plasma. Pharmaceutical Chemistry Journal. 1980;14(8):579–582.

14. O’Connor L. C., Torrance H. J., McKeown D. A. ELISA detection of phenazepam, etizolam, pyrazolam, flubromazepam, diclazepam and delorazepam in blood using Immunalysis® benzodiazepine kit. Journal of Analytical Toxicology. 2016;40(2):159–161. DOI: 10.1093/jat/bkv122.

15. Mastrovito R. A., Papsun D. M., Logan B. K. The Development and Validation of a Novel Designer Benzodiazepines Panel by LC-MS-MS. Journal of Analytical Toxicology. 2021;45(5):423–428. DOI: 10.1093/jat/bkab013.

16. Yang C.-A., Tsai C.-Y., H.-C. Liu, Liu R. H., Lin D.-L. Designer benzodiazepines and their metabolites in post- and antemortem specimens: Quantitation by UHPLC-MS/MS and findings in Taiwan. Toxicologie Analytique et Clinique. 2022;34(3):S180. DOI: 10.1016/j.toxac.2022.06.312.

17. Mei V., Concheiro M., Pardi J., Cooper G. Validation of an LC-MS/MS Method for the Quantification of 13 Designer Benzodiazepines in Blood. Journal of Analytical Toxicology. 2019;43(9):688–695. DOI: 10.1093/jat/bkz063.

18. Pettersson Bergstrand M., Beck O., Helander A. Urine analysis of 28 designer benzodiazepines by liquid chromatography-high-resolution mass spectrometry. Clinical Mass Spectrometry. 2018;10:25–32. DOI: 10.1016/j.clinms.2018.08.004.

19. Crichton M. L., Shenton C. F., Drummond G., Beer L. J., Seetohul L. N., Maskell P. D. Analysis of phenazepam and 3-hydroxyphenazepam in post-mortem fluids and tissues. Drug Testing and Analysis. 2015;7(10):926–936. DOI: 10.1002/dta.1790.

20. Bioanalytical Method Validation. Guidance for Industry. New Hampshire: Biopharmaceutics; 2018. 44 p.