Определение примесей в перспективных антиоксидантах бис-[3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]сульфиде и додецил(3,5-диметил-4-гидроксибензил)сульфиде

Введение. Додецил(3,5-диметил-4-гидроксибензил)сульфид (T1) и бис-[3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]сульфид (T2) – совместная разработка кафедры химии Новосибирского государственного педагогического университета и Новосибирского института антиоксидантов. В исследованиях и экспериментах была показана антиоксидантная, противовоспалительная, гепатопротекторная, цитопротекторная, гемореологическая активность данных веществ, что позволяет считать их перспективными лекарственными антиоксидантами. Для контроля качества при последующем производстве субстанций указанных соединений необходимо разработать параметры стандартизации и составить Проект Нормативной документации.

Цель. Разработка и валидация методик определения примесей новых перспективных биологически активных веществ T1 и T2.

Материалы и методы. Определение примесей проводили методом ВЭЖХ с УФ-детектированием при длине волны 278 нм на колонке ZORBAX SB-C18 (5 мкм, 150 × 4,6 мм) в изократическом режиме с использованием в качестве подвижной фазы смеси ацетонитрил – вода 95 : 5 при анализе T1 и ацетонитрила при анализе T2.

Результаты и обсуждение. В ходе разработки методик было установлено присутствие в исследуемых образцах Т1 двух неидентифицированных примесей, содержание которых в течение срока годности не превышает 0,1 %. На хроматограмме Т2 обнаружены побочный продукт синтеза – бис-[3-(3,5-ди-трет-бутил-4-гидроксифенил)пропил]дисульфид (Т2-ДС) с установленной биологической безопасностью и пределом содержания 2,5 %, а также неидентифицированная примесь с содержанием не более 0,1 %. Проведена валидация разработанных методик ВЭЖХ по характеристикам «Специфичность», «Предел количественного определения», «Линейность», «Прецизионность», «Правильность», «Аналитическая область».

Заключение. Методики определения примесей T1 и T2 валидированы по указанным выше параметрам. Полученные результаты удовлетворяют критериям приемлемости: вещества и примеси четко разделяются на хроматограммах между собой; коэффициент корреляции (r) при определении линейности для примесей превышает 0,980; свободный член уравнений линейной зависимости статистически значимо не отличается от нуля; величина относительного стандартного отклонения (RSD%) не более 5 %; рассчитанные значения критериев Стьюдента и Фишера не превышают табличные. Разработанные методики могут применяться для контроля качества опытных образцов и в будущем при производстве субстанций исследуемых веществ.

1. Бахтина И. А., Антипьева Е. В., Просенко А. Е., Стрельцова Г. П., Душкин М. И., Зенков Н. К., Меньщикова Е. Б., Рагино Ю. И. Влияние антиоксиданта «тиофан» на параметры антиокислительного стресса при ишемической болезни сердца. Бюллетень СО РАМН. 2000;(3–4):24–29.

2. Фридлянд И. Ф., Просенко А. Е., Клепикова С. Ю., Кандалинцева Н. В., Леплина О. Ю., Тихонова М. А., Останин А. А., Черных Е. Р. Влияние антиоксидантов на функциональную активность мононуклеарных клеток периферической крови больных вирусным гепатитом С. Медицинская иммунология. 2001;3(2):243.

3. Плотников М. Б., Просенко А. Е., Смольякова В. И., Иванов И. С., Чернышева Г. А., Кандалинцева Н. В. Синтез и антиокислительная активность 3,5-диметил-4-гидроксибензилтиододекана. Химико-фармацевтический журнал. 2010;44(3):65–67.

4. Меньщикова Е. Б., Ланкин В. З., Кандалинцева Н. В. Фенольные антиоксиданты в биологии и медицине. Saarbrucken: LAP LAMBERT Academic Publishing; 2012. 488 с.

5. Боровская Т. Г., Гольдберг Е. Д., Щемерова Ю. А., Пахомова А. В., Перова А. В., Просенко А. Е., Дюбченко О. И. Средство для коррекции нарушений женской репродуктивной функции, вызванных цитостатическим воздействием. Патент РФ на изобретение № 2367420 С1. 20.09.2009. Доступно по: https://new.fips.ru/iiss/document.xhtml?faces-redirect=true&id=a0a3f5f82b5424e5337046838c394e0a. Ссылка активна на 04.10.2021.

6. Просенко А. Е., Гросс М. А., Кандалинцева Н. В., Толстикова Т. Г., Сорокина И. В. Средство для коррекции цитотоксических эффектов паранеопластических процессов и химиотерапии, обладающее противоопухолевой активностью. Патент РФ на изобретение № 2447888 С1. 20.04.2012. Доступно по: https://new.fips.ru/iiss/document.xhtml?faces-redirect=true&id=c9dbc6a5ec333ebf1998a2e91bdc6654. Ссылка активна на 04.10.2021.

7. Плотников М. Б., Смольякова В. И., Иванов И. С., Чернышева Г. А., Просенко А. Е., Гросс М. А., Бойко М. А. Средство, обладающее антиагрегантной, уменьшающей повышенную вязкость крови и антитромбогенной активностью. Патент РФ на изобретение № 2368376 С1. 27.09.2009. Доступно по: https://new.fips.ru/iiss/document.xhtml?faces-redirect=true&id=2dd769e1785fe39dfd1f744dee2cafa8. Ссылка активна на 04.10.2021.

8. Воевода Т. В., Толстикова Т. Г., Сорокина И. В. Изучение токсического действия нового фенольного антиоксиданта СО-3 в субхроническом эксперименте. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2000;63(4):57–60.

9. Чернышева Г. А., Гурто Р. В., Хазанов В. А., Плотников М. Б., Смольякова В. И., Просенко А. Е., Кандалинцева Н. В. Фармакокинетика тиофана при внутрижелудочном введении. Химико-фармацевтический журнал. 2010;44(4):7–11.

10. Okamoto M. Assay validation and technology transfer: Problems and solutions. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2014;87:308–12. DOI: 10.1016/j.jpba.2013.06.028.

11. Sahu P. K., Ramisetti N. R., Cecchi T., Swain S., Patro C. S., Panda J. An overview of experimental designs in HPLC method development and validation. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2018;147:590–611. DOI: 10.1016/j.jpba.2017.05.006.

12. Epshtein N. A. Validation of Analytical Procedures: Graphic and Calculated Criteria for Assessment of Methods Linearity in Practice. Drug development and registration. 2019;8(2):122–30. DOI: 10.33380/2305-2066-2019-8-2-122-130.

13. Эпштейн Н. А., Севастьянова В. Л., Королева А. И. Валидация методик «родственные примеси» для неидентифицированных примесей. Химико-фармацевтический журнал. 2020;54(9):48–56. DOI: 10.30906/0023-1134-2020-54-9-48-56.

14. Raposo F., Ibelli-Bianco C. Performance parameters for analytical method validation: Controversies and discrepancies among numerous guidelines. Trends in Analytical Chemistry. 2020;129:115913. DOI: 10.1016/j.trac.2020.115913.