Разработка и валидация методики определения фавипиравира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ

Введение. Новая коронавирусная инфекция COVID-19 (Coronavirus Disease 2019) – это острое инфекционное заболевание, вызываемое вирусом SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2). Фавипиравир – синтетический противовирусный препарат, применяемый для этиотропной терапии COVID-19. Выпускается в лекарственных формах для перорального и парентерального введения, при этом парентеральный путь введения фавипиравира имеет ряд преимуществ перед пероральным. Разработка и валидация методики количественного определения фавипиравира в плазме крови человека является необходимой процедурой для проведения аналитической части клинического исследования препарата фавипиравира для парентерального введения в виде инфузий, изучения его фармакокинетических параметров и выбора оптимальных доз препарата.

Цель. Целью исследования является разработка и валидация методики определения фавипиравира в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с использованием с использованием ультрафиолетового детектора (ВЭЖХ-УФ) для дальнейшего изучения фармакокинетики.

Материалы и методы. Определение фавипиравира в плазме крови человека проводили методом ВЭЖХ-УФ при длине волны 323 ± 2 нм. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения метанолом. Внутренний стандарт: ралтегравир. Подвижная фаза: 0,1%-й раствор муравьиной кислоты в воде с прибавлением 0,08%-го аммиака (элюент А); 0,1%-й раствор муравьиной кислоты, 10%-й раствор воды в ацетонитриле с прибавлением 0,08%-го аммиака (элюент В). Колонка: Phenomenex Kinetex^®, C18, 150 × 4,6 мм, 5 мкм. Аналитический диапазон методики: 0,25–200,00 мкг/мл.

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим валидационным параметрам: селективность, калибровочная кривая, точность, прецизионность, степень извлечения, нижний предел количественного определения, перенос пробы, стабильность (стабильность исходных и рабочих стандартных растворов аналита и внутреннего стандарта; краткосрочная стабильность; стабильность при трехкратной заморозке-разморозке аналита; долгосрочная стабильность аналита в матрице).

Заключение. Разработана и валидирована методика определения фавипиравира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ. Подтвержденный аналитический диапазон методики составил 0,25–200,00 мкг/мл в плазме крови. Полученный аналитический диапазон позволяет применять разработанную методику для проведения фармакокинетических исследований препаратов фавипиравира.

1. Yu Y., Lau M. M., Lau J. T. Application of the protection motivation theory to understand determinants of compliance with the measure of banning gathering size >4 in all public areas for controlling COVID-19 in a Hong Kong Chinese adult general population. Plos one. 2022;17(5):e0268336. DOI: 10.1371/journal.pone.0268336.

2. Заплатников А. Л., Бурцева Е. И., Гирина А. А., Свинцицкая В. И., Леписева И. В. Активная специфическая иммунопрофилактика гриппа в условиях пандемии COVID-19 и начало вакцинации против коронавирусной инфекции, вызванной вирусом SARS-CoV-2. Педиатрия. Consilium Medicum. 2020;4:12–16. DOI: 10.26442/26586630.2020.4.200580.

3. Chenchula S., Karunakaran P., Sharma S., Chavan M. Current evidence on efficacy of COVID‐19 booster dose vaccination against the Omicron variant: A systematic review. Journal of Medical Virology. 2022;94(7):2969–2976. DOI: 10.1002/jmv.27697.

4. Tseng H. F., Ackerson B. K., Luo Y., Sy L. S., Talarico C. A., Tian Y., Bruxvoort K. J., Tubert J. E., Florea A., Ku J. H., Lee G. S. Effectiveness of mRNA-1273 against SARS-CoV-2 Omicron and Delta variants. Nature Medicine. 2022;28(5):1063–1071. DOI: 10.1038/s41591-022-01818-y.

5. Zhao L., Zhong W. Mechanism of action of favipiravir against SARS-CoV-2: Mutagenesis or chain termination? The Innovation. 2021;2(4):100165. DOI: 10.1016/j.xinn.2021.100165.

6. Pavlova V., Hristova S., Uzunova K., Vekov T. A review on the mechanism of action of favipiravir and hydroxychloroquine in COVID-19. Res. Rev. Insights. 2021;5:1–7. DOI: 10.15761/RRI.1000167.

7. Cakir B. K., Firat O., Demirkan K. Administration of Potential Medications for COVID-19 Treatment Through Feeding Tube. Turkish Journal of Pharmaceutical Sciences. 2021;18(3):250. DOI: 10.4274/tjps.galenos.2021.52223.

8. Балыкова Л. А., Заславская К. Я., Павелкина В. Ф., Пятаев Н. А., Селезнева Н. М., Кириченко Н. В., Иванова А. Ю., Родоман Г. В., Колонтарев К. Б., Скрупский К. С., Симакина Е. Н. Эффективность и безопасность инфузионного введения фавипиравира у пациентов, госпитализированных с COVID-19. Фармация и фармакология. 2022;10(1):113–126. DOI: 10.19163/2307-9266-2022-10-1-113-126.

9. Hailat M., Al-Ani I., Hamad M., Zakareia Z., Abu Dayyih W. Development and Validation of a Method for Quantification of Favipiravir as COVID-19 Management in Spiked Human Plasma. Molecules. 2021;26(13):3789. DOI: 10.3390/molecules26133789.

10. Abdallah I. A., Hammad S. F., Bedair A., Elshafeey A. H., Mansour F. R. Determination of favipiravir in human plasma using homogeneous liquid–liquid microextraction followed by HPLC/UV. Bioanalysis. 2021;14(4):205–216. DOI: 10.4155/bio-2021-0219.

11. Duse P. V., G Baheti K. G. Bioanalytical Method Development and Validation for the Determination of Favipiravir in Spiked Human Plasma by using RP-HPLC. Journal of Pharmaceutical Research International. 2021;33(47A):275–281. DOI: 10.9734/JPRI/2021/v33i47A33014.

12. Abdallah I. A., Hammad S. F., Bedair A., Mansour F. R. Menthol-assisted homogenous liquid-liquid microextraction for HPLC/UV determination of favipiravir as an antiviral for COVID-19 in human plasma. Journal of Chromatography B. 2022;1189:123087. DOI: 10.1016/j.jchromb.2021.123087.

13. Megahed S., Habib A., Hammad S., Kamal A. Chemometric Approach Based on Factorial and Box-Behnken Designs for Determination of Anti Coronavirus Drug; Favipiravir in Bulk and Spiked Human Plasma by Green HPLC Method. Turkish Journal of Analytical Chemistry. 2021;3(2):70–78. DOI: 10.51435/turkjac.963652.

14. Morsy M. I., Nouman E. G., Abdallah Y. M., Zainelabdeen M. A., Darwish M. M., Hassan A. Y., Gouda A. S., Rezk M. R., Abdel-Megied A. M., Marzouk H. M. A Novel LC-MS/MS Method for Determination of the Potential Antiviral Candidate Favipiravir for the Emergency Treatment of SARS-CoV-2 Virus in Human Plasma: Application to a Bioequivalence Study in Egyptian Human Volunteers. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2021;199:114057. DOI: 10.1016/j.jpba.2021.114057.

15. Rezk M. R., Badr K. A., Abdel-Naby N. S., Ayyad M. M. A Novel, Rapid and Simple UPLC–MS/MS Method for Quantification of Favipiravir in Human Plasma: Application to a Bioequivalence Study. Biomedical Chromatography. 2021;35(7):e5098. DOI: 10.1002/bmc.5098.

16. Onmaz D. E., Abusoglu S., Onmaz M., Yerlikaya F. H., Unlu A. Development and validation of a sensitive, fast and simple LC-MS/MS method for the quantitation of favipiravir in human serum. Journal of Chromatography B. 2021;1176:122768. DOI: 10.1016/j.jchromb.2021.122768.

17. Bulduk İ. HPLC-UV method for quantification of favipiravir in pharmaceutical formulations. Acta Chromatographica. 2021;33(3):209–215. DOI: 10.1556/1326.2020.00828.