Разработка и валидация методики количественного определения тофацитиниба в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией

Введение. Применение тофацитиниба в медикаментозном лечении ревматоидного артрита не теряет актуальности в связи с прогнозируемым ростом распространенности данного заболевания. Вместе с тем, в результате ухода многих зарубежных компаний с фармацевтического рынка России возник спрос на выпуск лекарственных препаратов отечественного производства, в том числе воспроизведенных препаратов тофацитиниба, для регистрации которых обязательно проведение биоаналитических исследований. Необходимой частью аналитического этапа изучения биоэквивалентности является разработка и валидация методики количественного определения анализируемого вещества.

Цель. Целью данного исследования является разработка и валидация методики количественного определения тофацитиниба в плазме крови человека с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии в качестве системы разделения и тандемного масс-спектрометра в качестве метода детектирования.

Материалы и методы. Пробоподготовка биообразцов была основана на осаждении белков плазмы крови ацетонитрилом. В качестве внутреннего стандарта был выбран барицитиниб. Аналитический диапазон методики составил 1,00–200,00 нг/мл и в дальнейшем при проведении аналитического этапа исследования был расширен до 0,30–200,00 нг/мл. Подвижная фаза включала воду и ацетонитрил, подкисленные муравьиной кислотой до значения 0,1 % об. Неподвижная фаза была представлена Phenomenex Kinetex C₁₈, 100 × 3,0 мм, 5 мкм (Phenomenex, США). Разделение и детектирование проб проводили в системе высокоэффективного жидкостного хроматографа с тандемным масс-спектрометрическим детектором (ВЭЖХ-МС/МС) в положительном режиме ионизации. Для аналита и внутреннего стандарта были подобраны следующие MRM-переходы: 313,30 → 173,00 m/z, 371,90 → 186,00 m/z соответственно.

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована согласно действующим требованиям нормативной документации ЕАЭС, FDA, EMA по следующим параметрам: селективность, специфичность, эффект переноса, эффект матрицы, степень извлечения, градуировочная кривая, нижний предел количественного определения, точность, прецизионность, стабильность. Проведена апробация методики в рамках аналитического этапа исследования.

Заключение. Разработана и валидирована быстрая, нетрудоемкая и чувствительная методика количественного определения тофацитиниба в плазме крови человека с подтвержденным аналитическим диапазоном 0,30–200,00 нг/мл. Апробация методики при проведении аналитического этапа изучения биоэквивалентности препарата тофацитиниба подтверждает возможность использования методики в подобных биоаналитических исследованиях.

1. Nasonov E. L., Avdeeva A. S., Lila A. M. Efficacy and safety of tofacitinib for immune-mediated inflammatory rheumatic diseases (Part I). Rheumatology Science and Practice. 2020;58(1):62–79. (In Russ.) DOI: 10.14412/1995-4484-2020-62-79.

2. GBD 2021 Rheumatoid Arthritis Collaborators. Global, regional, and national burden of rheumatoid arthritis, 1990–2020, and projections to 2050: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2021. The Lancet Rheumatology. 2023;5(10):e594–e610. DOI: 10.1016/S2665-9913(23)00211-4.

3. Finckh A., Gilbert B., Hodkinson B., Bae S.-C., Thomas R., Deane K. D., Alpizar-Rodriguez D., Lauper K. Global epidemiology of rheumatoid arthritis. Nature Reviews Rheumatology. 2022;18(10):591–602. DOI: 10.1038/s41584-022-00827-y.

4. Smolen J. S., Aletaha D., Barton A., Burmester G. R., Emery P., Firestein G. S., Kavanaugh A., McInnes I. B., Solomon D. H., Strand V., Yamamoto K. Rheumatoid arthritis. Nature Reviews Disease Primers. 2018;4:18001. DOI: 10.1038/nrdp.2018.1.

5. Nasonov E. L., Feist E. The prospects of interleukin-6 inhibition in rheumatoid arthritis: Olokizumab (novel monoclonal antibodies to IL-6). Rheumatology Science and Practice. 2022;60(5):505–518. (In Russ.) DOI: 10.47360/1995-4484-2022-505-518.

6. Korotaeva T. V., Loginova E. Yu. Results of studying the clinical efficacy and safety of tofacitinib in the treatment of psoriatic arthritis. Modern Rheumatology Journal. 2019;13(2):112–118. (In Russ.) DOI: 10.14412/1996-7012-2019-2-112-118.

7. Bharwad K. D., Shah P. A., Shrivastav P. S., Singhal P. Development and validation of a rapid and sensitive UPLC–MS/MS assay for the quantification of tofacitinib in human plasma. Biomedical Chromatography. 2019;33(4):e4458. DOI: 10.1002/bmc.4458.

8. Church S., Hyrich K. L., Ogungbenro K., Unwin R. D., Barton A., Bluett J. Development of a sensitive biochemical assay for the detection of tofacitinib adherence. Analytical Methods. 2023;15(14):1797–1801. DOI: 10.1039/D2AY01800D.

9. Dowty M. E., Lin J., Ryder T. F, Wang W., Walker G. S., Vaz A., Chan G. L., Krishnaswami S., Prakash C. The pharmacokinetics, metabolism, and clearance mechanisms of tofacitinib, a Janus kinase inhibitor, in humans. Drug Metabolism and Disposition. 2014;42(4):759–773. DOI: 10.1124/dmd.113.054940.

10. Krishnaswami S., Boy M., Chow V., Chan G. Safety, tolerability, and pharmacokinetics of single oral doses of tofacitinib, a Janus kinase inhibitor, in healthy volunteers. Clinical Pharmacology in Drug Development. 2015;4(2):83–88. DOI: 10.1002/cpdd.171.

11. Krishnaswami S., Wang T., Yuan Y., Alvey C. W., Checchio T., Peterson M., Shi H., Riese R. Single‐ and multiple‐dose pharmacokinetics of tofacitinib in healthy Chinese volunteers. Clinical Pharmacology in Drug Development. 2015;4(5):395–399. DOI: 10.1002/cpdd.202.

12. Menon S., Riese R., Wang R., Alvey C. W., Shi H., Petit W., Krishnaswami S. Evaluation of the effect of tofacitinib on the pharmacokinetics of oral contraceptive steroids in healthy female volunteers. Clinical Pharmacology in Drug Development. 2016;5(5):336–342. DOI: 10.1002/cpdd.270.

13. Abdelhameed A. S., Attwa M. W., Kadi A. A. An LC–MS/MS method for rapid and sensitive high‐throughput simultaneous determination of various protein kinase inhibitors in human plasma. Biomedical Chromatography. 2017;31(2):e3793. DOI: 10.1002/bmc.3793.

14. Kadi A. A., Abdelhameed A. S., Darwish H. W., Attwa M. W., Bakheit A. H. Liquid chromatographic-tandem mass spectrometric assay for simultaneous quantitation of tofacitinib, cabozantinib and afatinib in human plasma and urine. Tropical Journal of Pharmaceutical Research. 2016;15(12):2683–2692. DOI: 10.4314/tjpr.v15i12.21.

15. Tachet J., Versace F., Mercier T., Buclin T., Decosterd L. A., Choong E., Girardin F. R. Development and validation of a multiplex HPLC-MS/MS assay for the monitoring of JAK inhibitors in patient plasma. Journal of Chromatography B. 2023;1230:123917. DOI: 10.1016/j.jchromb.2023.123917.