Разработка и валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в траве вербейника обыкновенного (Lysimachia vulgaris L.)

Введение. Исследование качественного и количественного состава растений и выявление перспективных лекарственных видов – одна из важнейших задач современной фармакогнозии. Вербейник обыкновенный (Lysimachia vulgaris L.) сем. первоцветных (Primulaceae Batsch ex Borkh.) – многолетнее травянистое растение, для надземной части которого основной группой действующих веществ являются фенольные соединения. L. vulgaris распространен в России практически повсеместно, известно о его применении в традиционной медицине, а также о видах биологической активности, рассмотренных в экспериментах in vitro и in vivo, но поиск научной литературы в отечественном сегменте не выявил достаточной информации о количественном содержании биологически активных веществ (далее – БАВ).

Цель. Разработка и валидация методики оценки количественного содержания суммы флавоноидов в траве вербейника обыкновенного (L. vulgaris) в пересчете на рутин методом спектрофотометрии.

Материалы и методы. В качестве объекта использовали спиртовые извлечения из надземной части L. vulgaris, заготовленного в период цветения в Ленинградской области. Количественное определение проводили методом спектрофотометрии. Предложенную методику валидировали в соответствии с ОФС.1.1.0012 «Валидация аналитических методик» Государственной фармакопеи РФ XV издания по показателям «специфичность», «линейность», «аналитическая область», «повторяемость», «прецизионность» и «правильность».

Результаты и обсуждение. Для методики количественного определения флавоноидов в траве L. vulgaris методом спектрофотометрии в качестве стандартного образца был предложен рутин. Было установлено, что оптимальное извлечение флавоноидов из травы L. vulgaris достигается путем использования однократной экстракции спиртом этиловым 70%-м в течение 30 мин при соотношении «сырье : экстрагент» 1 : 100 и измельченности сырья 2–1 мм. В качестве комплексообразователя был предложен раствор алюминия хлорида 1%-й спиртовой, были подобраны условия комплексообразования (аликвота раствора алюминия хлорида 1%-го – 2 мл, время комплексообразования – 30 мин). Методика отвечает требованиям валидационных характеристик. По разработанной методике было установлено, что сумма флавоноидов в траве L. vulgaris, заготовленного в Ленинградской области, составляет 2,97 ± 0,05 % в пересчете на рутин.

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения суммы флавоноидов в траве вербейника обыкновенного (L. vulgaris) методом спектрофотометрии в пересчете на рутин.

1. Podolak I., Strzałka M. Qualitative and quantitative LC profile of embelin and rapanone in selected Lysimachia species. Chromatographia. 2008;67(5–6):471–475. DOI: 10.1365/s10337-007-0511-4.

2. Podolak I., Elas M., Cieszka K. In vitro antifungal and cytotoxic activity of triterpene saponosides and quinoid pigments from Lysimachia vulgaris L. Phytotherapy Research. 1998;12:70–73.

3. Yildirim A. B., Guner B., Karakas F. P., Turker A. U. Evaluation of antibacterial, antitumor, antioxidant activities and phenolic constituents of field-grown and in vitro-grown Lysimachia vulgaris L. African Journal of Traditional, Complementary, and Alternative Medicines. 2017;14(2):177–187. DOI: 10.21010/ajtcam.v14i2.19.

4. Toth A., Riethmüller E., Alberti A., Végh K., Kery A. Comparative phytochemical screening of phenoloids in Lysimachia species. European Chemical Bulletin. 2012;1(1–2):27–30.

5. Toth A., Toth G., Kery A. Polyphenol composition and antioxidant capacity of three Lysimachia species. Natural Product Communications. 2014;9:1473–1478. DOI: 10.1177/1934578X1400901017.

6. Toth A., Riethmuller E., Vegh K., Alberti A., Beni S., Kery A. Contribution of individual flavonoids in Lysimachia species to the antioxidant capacity based on HPLC-DPPH assay. Natural Product Research. 2018;32(17):2058–2061. DOI: 10.1080/14786419.2017.1359176.

7. Yang-Ju S., Jung D. S., Shin J. M., Kim M., Yoo G., Nho C. W. Yellow loosestrife (Lysimachia vulgaris var. davurica) ameliorates liver fibrosis in db/db mice with methionine- and choline-deficient diet-induced nonalcoholic steatohepatitis. BMC Complementary Medicine and Therapies. 2021;21(1):44. DOI: 10.1186/s12906-021-03212-6.

8. Kim S. Y., Lee J. Y., Jhin C., Shin J. M., Kim M., Ahn H. R., Yoo G., Son Y. J., Jung S. H., Nho C. W. Reduction of Hepatic Lipogenesis by Loliolide and Pinoresinol from Lysimachia vulgaris via Degrading Liver X Receptors. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 2019;67(45):12419–12427. DOI: 10.1021/acs.jafc.9b01488.

9. Kim H.-Y., Kim C.-E., Oh D.-R., Kim Y., Choi C.-Y., Kim J. Development and Validation of a High-Performance Liquid Chromatography Method to Quantify Marker Compounds in Lysimachia vulgaris var. davurica and Its Effects in Diarrhea-Predominant Irritable Bowel Syndrome. Molecules. 2024;29(7):1489. DOI: 10.3390/molecules29071489.

10. Nurcholis W., Sya'bani Putri D. N., Husnawati H., Aisyah S. I., Priosoeryanto B. P. Total flavonoid content and antioxidant activity of ethanol and ethyl acetate extracts from accessions of Amomum compactum fruits. Annals of Agricultural Sciences. 2021;66(1):58-62. DOI: 10.1016/j.aoas.2021.04.001.

11. Zeb A., Rahman F. Phenolic profile, total bioactive contents, and antioxidant activity of pear fruits. Food Chemistry Advances. 2024;5:100780. DOI: 10.1016/j.focha.2024.100780.

12. Maache S., Elghouizi A., Zbadi L., Soulo N., Nouioura G., Lyoussi B., Elarabi I. Characterization, antioxidant, and antimicrobial activity of two sage species’ organic and aqueous extracts from Morocco’s Middle Atlas. Kuwait Journal of Science. 2025;52(2):100382. DOI: 10.1016/j.kjs.2025.100382.

13. Imtiaz F., Ahmed D., Mohammed O. A., Younas U., Iqbal M. Optimized recovery of phenolic and flavonoid compounds from medicinal plant extracts for enhanced antioxidant activity: A mixture design approach. Results in Chemistry. 2025;13:101960. DOI: 10.1016/j.rechem.2024.101960.

14. de Almeida Soares L., Germano A. T., Vitali L., Mazzuti S., Lins de Aquino Santana L. C. Solid-state fermentation as a pre-treatment method for the extraction of bioactive compounds from pomegranate (Punica granatum L.) and jatobá peel (Hymenaea courbaril L.). Food Bioscience. 2025;63:105716. DOI: 10.1016/j.fbio.2024.105716.

15. Цейликман Н. Э., Лукин А. А. Влияние окислительного стресса на организм человека. Международный научно-исследовательский журнал. 2022;3(117):206–211. DOI: 10.23670/IRJ.2022.117.3.037.

16. Аникин Д. А., Соловьева И. А., Демко И. В., Собко Е. А., Крапошина А. Ю., Гордеева Н. В. Свободнорадикальное окисление как патогенетическое звено метаболического синдрома. Ожирение и метаболизм. 2022;19(3):306–316. DOI: 10.14341/omet12804.

17. Олефир Ю. В., Романов Б. К., Кукес В. Г., Сычев Д. А., Прокофьев А. Б., Парфенова О. К., Сидоров Н. Г., Александрова Т. В. Роль окислительного стресса в патогенезе социально значимых заболеваний человека и пути его медикаментозной коррекции. Медицинский вестник Северного Кавказа. 2021;16(4):450–455. DOI: 10.14300/mnnc.2021.16109.

18. Соколова А. Ю., Полуянов А. М., Бардаков А. И., Сологова С. С., Бобкова Н. В. Выделение, идентификация и количественное определение флавоноидов из цветков клекачки перистой. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2024;13(2):155–163. DOI: 10.33380/2305-2066-2024-13-2-1796.

19. Бояршинов В. Д., Зорина Е. В. Разработка параметров стандартизации травы культивируемого вида манжетка мягкая (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.). Разработка и регистрация лекарственных средств. 2022;11(4–1):85–90. DOI: 10.33380/2305-2066-2022-11-4(1)-85-90.

20. Кутателадзе Г. Р., Федосеева Л. М. Исследования по разработке и валидации методики количественного определения флавоноидов в щавеля кислого траве, заготовленной на территории алтайского края. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2019;8(2):80–86. DOI: 10.33380/2305-2066-2019-8-2-80-86.

21. Nicolescu A., Bunea C. I., Mocan A. Total flavonoid content revised: An overview of past, present, and future determinations in phytochemical analysis. Analytical Biochemistry. 2025;700:115794. DOI: 10.1016/j.ab.2025.115794.

22. Xujiang Y., Cuimin H., Xianmei X., Zhike L., Yanfen C. Optimisation study on the flavonoid extraction process from Abrus precatorius leaves and the comparison of total flavonoid content by HPLC and UV. Journal of Holistic Integrative Pharmacy. 2023;4(2):119–126. DOI: 10.1016/j.jhip.2023.09.003.

23. Amjad M. S., Talaat A. A., Md Mizanur R., Yousef M. H. Determination of total flavonoid content by aluminum chloride assay: A critical evaluation. LWT. 2021;150:111932. DOI: 10.1016/j.lwt.2021.111932.

24. Bin Mokaizh A. A., Hamid Nour A., Ali G. A. M., Ishmael Ukaegbu C., Faraj Hawege E. Eco-friendly and efficient extraction of phenolic compounds from Commiphora gileadensis bark using microwave-assisted extraction. Journal of Industrial and Engineering Chemistry. 2025;142:321–328. DOI: 10.1016/j.jiec.2024.07.038.

25. Liu Y., Wang R., Hu X., Yu C., Wang Z., Zhang L., Liu S., Li C. Optimization of ultrasonic extraction of bioactive components from Alpiniae oxyphyllae Fructus using response surface methodology. Journal of Applied Research on Medicinal and Aromatic Plants. 2024;41:100557. DOI: 10.1016/j.jarmap.2024.100557.

26. Zulkifli M. Z. A., Benjamin M. A. Z., Mohd Rosdan M. D. E., Saini A., Rusdi N. A., Awang M. A. Optimisation of yield, flavonoids, and antioxidant activity via ultrasound-assisted extraction of bamboo leaves from Dinochloa sublaevigata S. Dransf. (Wadan) in Sabah, Malaysia. Advances in Bamboo Science. 2025;10:100128. DOI: 10.1016/j.bamboo.2025.100128.

27. Rocha G. J. R., Aguiar A. C., Abud C. O. G., Pertuzatti P. B., Sampaio K. A., Paula J. T. Pressurized liquid extraction as a green technique for bioactive compounds recovery from Momordica charantia leaves. Applied Food Research. 2025;5(1):100795. DOI: 10.1016/j.afres.2025.100795.

28. Al Hawat L., Alallan L. Estimation of antioxidant and hypolipidemic activities of extracts of Citrus x aurantium leaves in vitro. Phytomedicine Plus. 2025;5(1):100723. DOI: 10.1016/j.phyplu.2024.100723.

29. Ковалёва Н. А., Тринеева О. В., Чувикова И. В., Сливкин А. И. Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в листьях облепихи крушиновидной методом спектрофотометрии. Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2023;13(2):216–226. DOI: 10.30895/1991-2919-2023-531.

30. Petrosyan H. R., Nigaryan A. A., Hovhannisyan H. A., Soloyan A. M., Vardapetyan V. V., Martiryan A. I. Evaluation of antioxidant activity and heavy metals content in licorice (Glycyrrhiza glabra L.) growing wild in Armenia. Heliyon. 2023;9(11):e22442. DOI: 10.1016/j.heliyon.2023.e22442.

31. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. M.: Министерство Здравоохранения Российской Федерации; 2018. T. 4.

32. Государственная фармакопея Российской Федерации XV изд. M.: Министерство Здравоохранения Российской Федерации; 2023. T. 2.

33. Крюкова С. А. Изучение содержания флавоноидов в листьях вербейника обыкновенного, произрастающего на территории Астраханской области. Инновационные научные исследования. 2021;6–3(8):7–12. DOI: 10.5281/zenodo.5529051.

34. Benedec D., Hanganu D., Olah. N. K., Mocan A., Vlase L., Raita O., Toma C. C. Comparative Polyphenolic Content and Antioxidant Activities of Two Romanian Lysimachia Species. Revista de Chimie. 2016;67(2):227–231.