Изучение распределения нового производного 4,5-дигидроизоксазол-5-карбоксамида на крысах

Введение. Новое фармакологически активное вещество 3-(2-бутил-5-хлоро-1Н-имидазол-4-ил)-N-[4-метокси-3-(трифторметил)фенил]-4,5-дигидро-1,2-оксазол-5-карбоксамид (R004) является новым ингибитором PAR-2-рецепторов для терапии ревматоидного артрита. Данное соединение находится на этапе доклинического исследования. Изучение распределения R004 и его метаболитов по органам и тканям ранее не проводилось.

Цель. Изучение распределения R004 и его метаболитов по органам и тканям крыс после однократного перорального введения субстанции.

Материалы и методы. Исследование проводилось на 50 крысах-самцах линии Wistar. Субстанция R004 вводилась перорально в терапевтической дозировке 10 мг/кг. Отбор образцов печени, почек, сердца, легких, селезенки, мозга, кожи и мышц проводился через 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 24 ч после введения лекарственного средства. Органы немедленно гомогенизировались с использованием ацетонитрила и замораживались. Дальнейшую пробоподготовку осуществляли путем добавления к гомогенатам ацетонитрильного раствора внутренних стандартов. Количественное определение R004 и его метаболитов 3-(2-бутил-5-хлоро-1Н-имидазол-4-ил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-5-карбоновой кислоты (М1) и 4-метокси-3-(трифторметил)анилина (M2) проводилось методом ВЭЖХ-МС/МС.

Результаты и обсуждение. Биоаналитическая методика количественного определения R004, M1 и M2 в органах и тканях была успешно валидирована в аналитических диапазонах 2–2000 нг/г для R004 и 1–1000 нг/г для М1 и М2. R004 распределяется по всем изучаемым биологическим объектам. Тканевая биодоступность R004 уменьшается в следующей последовательности: печень > кожа > почки > легкие > мышцы > сердце > селезенка > мозг. М1 и М2 в больших количествах обнаружены в печени и почках. В сердце, легкие и селезенку метаболиты проникали в значительно меньших концентрациях. В тканях кожи идентифицирован только М2. В мозге и мышцах М1 и М2 не обнаружены.

Заключение. Валидированная биоаналитическая методика была успешно использована при изучении распределения субстанции R004. Действующее вещество хорошо распределяется по всем изучаемым органам и имеет высокую тканевую биодоступность. Наибольшие концентрации метаболитов зафиксированы в печени и почках.

1. Korsakov M. K., Fedorov V. N., Smirnov N. A., Shetnev A. A., Leonova O. V., Volkhin N. N., Andreyev A. I. Screening of anti-inflammatory activity of 4.5-dihydroisoxazol-5-carboxamide (PAR-2 inhibitors) based on formaldehyde oedema model among white lab rats. Research Results in Pharmacology. 2023;9(4):105–111. DOI: 10.18413/rrpharmacology.9.10061.

2. Khokhlov A. L., Yaichkov I. I., Alexeev M. A., Korsakov M. K., Shetnev A. A., Ivanovskiy S. A., Volkhin N. N., Petukhov S. S., Vasilyeva E. A. Identification and synthesis of metabolites of the new 4.5-dihydroisoxazol-5-carboxamide derivate. Research Results in Pharmacology. 2024;10(2):83–95. DOI: 10.18413/rrpharmacology.10.482.

3. Яичков И. И., Корсаков М. К., Вольхин Н. Н., Петухов С. С., Тюшина А. Н., Зайкова В. Е., Лазарянц О. Э. Изучение фармакокинетики нового производного 4,5-дигидроизоксазол-5-карбоксамида на крысах. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2024;13(4):238–250. DOI: 10.33380/2305-2066-2024-13-4-1876.

4. Liang D., Wu Z., Liu Y., Li C., Li X., Yang B., Xie H., Sun H. HPLC-MS/MS-Mediated Analysis of the Pharmacokinetics, Bioavailability, and Tissue Distribution of Schisandrol B in Rats. International Journal of Analytical Chemistry. 2021;2021:8862291. DOI: 10.1155/2021/8862291.

5. Hu H., Xiao H., Bao H., Li M., Xue C., Li Y. T., Wang G., Chen S., Huang Y., Zheng L., Wang A., Li Y. J., Gong Z. P. Tissue Distribution Comparison of Six Active Ingredients from an Eucommiae Cortex Extract between Normal and Spontaneously Hypertensive Rats. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2020;2020:1–16. DOI: 10.1155/2020/2049059.

6. Körmöczi T., Szabó Í., Farkas E., Penke B., Janáky T., Ilisz I., Berkecz R. Heart-cutting two-dimensional liquid chromatography coupled to quadrupole-orbitrap high resolution mass spectrometry for determination of N,N-dimethyltryptamine in rat plasma and brain; Method development and application Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2020;191:113615. DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113615.

7. Kusuma Kumari G., Krishnamurthy P. T., Ravi Kiran Ammu V. V. V., Vishwanath K., Narenderan S. T., Babu B., Krishnaveni N. Development and validation of a sensitive LC-MS/MS method for pioglitazone: application towards pharmacokinetic and tissue distribution study in rats. RSC Advances. 2021;11:11437–11443. DOI: 10.1039/d1ra01126j.

8. Liu J., Pang Y., Li W., Sun J., He Y., Guo Y., Dong J. Impact of hepatic impairment and renal failure on the pharmacokinetics of linezolid and its metabolites: contribution of hepatic metabolism and renal excretion. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2025;69(5):e0189224. DOI: 10.1128/aac.01892-24.

9. Ramöller I. K., Abbate M. T. A., Vora L. K., Hutton A. R. J., Peng K., Volpe-Zanutto F., Tekko I. A., Moffatt K., Paredes A. J., McCarthy H. O., Donnelly R. F. HPLC-MS method for simultaneous quantification of the antiretroviral agents rilpivirine and cabotegravir in rat plasma and tissues. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2022;213:114698. DOI: 10.1016/j.jpba.2022.114698.

10. Rosebooma I. C., Thijssena B., Rosinga H., Alvesb F., Mondalc D., Teunissend M. B. M., Beijnena J. H., Dorloa T. P. C. Development and validation of an HPLC-MS/MS method for the quantification of the anti-leishmanial drug miltefosine in human skin tissue. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2022;207:114402. DOI: 10.1016/j.jpba.2021.114402.

11. Sheng Y.-H., Siemiątkowska A., Kosicka-Noworzyń K., Brunetti L., Kagan L. A validated LC-MS/MS method for simultaneous quantitation of piperacillin, cefazolin, and cefoxitin in rat plasma and twelve tissues. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 2024;248:116259. DOI: 10.1016/j.jpba.2024.116259.

12. Yin W., Al-Wabli R. I., Attwa M. W., Rahman A. F. M. M., Kadi A. A. Detection and characterization of simvastatin and its metabolites in rat tissues and biological fluids using MALDI high resolution mass spectrometry approach. Scientific Reports. 2022;12(1):4757. DOI: 10.1038/s41598-022-08804-x.