Исследования по разработке и валидации методики количественного определения флавоноидов в щавеля кислого траве, заготовленной на территории Алтайского края

Введение. Щавель кислый (Rumex acetosa L.) – двулетнее травянистое растение из семейства Гречишные (Polygonaceae L.). Ранее изучен состав фенольных соединений спиртового извлечения и эфирной, этилацетатной, бутанольной фракций щавеля кислого травы и обнаружены флавоноиды группы флавонола. Из литературы известно, что одной из групп биологически активных соединений, обладающих противовоспалительным действием, являются флавоноиды. Следовательно, актуальной задачей является оценка количественного содержания флавоноидов в щавеля кислого траве.

Цель. Разработка и валидация методики количественного определения флавоноидов в щавеля кислого траве.

Материалы и методы. Комплекс флавоноидов травы щавеля кислого включает рутин, поэтому в качестве стандарта для расчетов суммы флавоноидов использовали стандартный образец (СО) рутина. Готовили спиртовое извлечение щавеля кислого травы и раствор СО рутина. Проводили реакцию комплексообразования с алюминия хлоридом. Полученные растворы исследовали методом дифференциальной спектрофотомерии. Сравнивали спектральные характеристики исследуемого и стандартного образцов. Изучали влияние условий экстракции на выход флавоноидов из сырья: экстрагент, размер частиц сырья, соотношение «сырье – экстрагент», температура, кратность и продолжительность экстракции. В качестве экстрагента использовали воду очищенную и спирт этиловый различной концентрации (20%, 40%, 70%, 90%). Подбирали оптимальные условия для проведения реакции комплексообразования (время реакции комплексообразования, соотношение «аликвота – алюминия хлорида раствор спиртовой»). Проводили валидацию методики согласно ОФС.1.1.0012.15 ГФ XIII издания и общепринятым методикам по показателям: специфичность, аналитическая область, линейность, правильность, прецизионность.

Результаты и обсуждение. Определены оптимальные параметры экстракции флавоноидов из сырья (трехкратная экстракция спиртом этиловым 70% на водяной бане, соотношение «сырье – экстрагент» – 1:30 в течение 30 минут, размер частиц сырья – 2,0 мм). Подобраны условия проведения реакции комплексообразования (соотношение «аликвота: алюминия хлорида раствор спиртовой» – 1:2,5, комплексообразователь – раствор алюминия хлорида 5% спиртовой, появление устойчивой окраски раствора через 40 минут). При проведении валидации разработанной методики установлено, что валидационные характеристики находятся в пределах критериев приемлемости. При анализе сырья, заготовленного на территории Алтайского края в разные годы, установлено, что содержание флавоноидов в щавеля кислого траве колеблется от 0,596 до 0,632%.

Заключение. Определены оптимальные параметры экстракции флавоноидов из сырья, подобраны условия проведения реакции комплексообразования, проведена валидация методики. Установлено количественное содержание флавоноидов в пересчете на рутин в щавеля кислого траве, заготовленном на территории Алтайского края в разные годы.

1. Азарова О. В., Галактионова Л. П. Флавоноиды: механизм противовоспалительного действия. Химия растительного сырья. 2012; 4: 61–78.

2. Государственная фармакопея Российской Федерации XIII издание. М., 2015; 1: 1470. Available at: http://193.232.7.120/feml/clinical_ref/pharmacopoeia_1/HTML/

3. Евдокимова О. В. Валидация методики количественного определения суммы флавоноидов в столбиках с рыльцами кукурузы. Фармация. 2008; 7: 14–17.

4. Зверев Я. Ф. Флавоноиды глазами фармаколога. Антиоксидантная и противовоспалительная активность. Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. 2017; 15(4): 5–13. https://doi.org/10.17816/RCF1545-13

5. Куркина А. В. Флавоноиды фармакопейных растений. Самара: ООО «Офорт». 2012; 290 с.

6. Сорокина А. А., Марахова А. И., Станишевский Я. М, Ковалева Т. Ю. Фотометрические методы в анализе лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе: монография. М.: РУДН. 2015: 155.

7. Федосеева Л. М., Кутателадзе, Г. Р. Изучение некоторых фенольных соединений надземной части щавеля кислого, произрастающего на территории Алтайского края. Химия растительного сырья. 2017; 4: 91–96. https://doi.org/10.14258/jcprm.2017041861.

8. Эрмер Й., Миллер Д. Валидация методик в фармацевтическом анализе. Примеры наилучшей практики. М.: Группа компаний «Виалек», 2013: 512.

9. Bicker J., Petereit F., Hensel A. Proanthocyanidins and a phloroglucinol derivative from Rumex acetosaL. Fitoterapia. 2009; 80 (8): 483–495. https://doi.org/10.1016/j.fitote.2009.08.015.

10. Castle T. Lexicon Pharmaceuticum or a pharmaceutical dictionary, comprehending the pharmacopoeias of London, Edinburgh, and Dublin, with a variety of other useful information relative to medicine and pharmacy. Charleston: Nabu Press. 2011: 4.

11. Duke J. A. Handbook of Medicinal Herbs. Boca Raton: CRC Press, 2002: 683–684.

12. Kato T., Morita Y. C-glycosylflavones with acetyl substitution from Rumex acetosaL. Chem. Pharm. Bull. 1990; 38(8): 2277–2280. https://doi.org/10.1248/cpb.38.2277.

13. Oliff H. S. Scientific and clinical monograph for Sinupret. American botanical council: 14. Available at: http://abc.herbalgram.org/site/DocServer/Sinupret_fullmono.pdf

14. Thompson A. T. A conspectus of the Pharmacopoeias of the London, Edinburgh, and Dublin Colleges of Physicians being a practical compendium of Materia medica and pharmacy. London: Forgotten Books. 2017: 2–3.

15. Vasas A., Orban-Gyapai O., Hohmann J. The Genus Rumex: Review of traditional uses, phytochemistry and pharmacology. Journal of Ethnopharmacology. 2015; 175: 198–228. https://doi.org/10.1016/j.jep.2015.09.001.