Разработка и валидация методики количественного определения валганцикловира и его метаболита ганцикловира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ

Введение. Вирусные инфекции являются серьезной проблемой, возникающей в процессе применения иммунодепрессантов в ходе подготовки к трансплантации органов и в послеоперационном периоде. Цитомегаловирусная (ЦМВ) инфекция – одна из основных причин заболеваний у людей с ослабленным иммунитетом. Она оказывает непосредственное влияние на отторжение трансплантатов. Кроме того, ЦМВ часто является причиной других иммунных осложнений. Для лечения и профилактики данного инфекционного заболевания используют противовирусные лекарственные препараты. Валганцикловир является пролекарством, активным метаболитом которого является ганцикловир. Валганцикловир является препаратом выбора при лечении ЦМВ-инфекций. В настоящее время нет опубликованных методик о совместном определении валганцикловира и ганцикловира в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием. В данной работе приведена разработка и валидация методики совместного определения валганцикловира и ганцикловира в плазме крови после пробоподготовки способом осаждения белков.

Цель. Целью исследования является разработка методики количественного определения валганцикловира и его активного метаболита ганцикловира в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектором (ВЭЖХ-УФ) для проведения фармакокинетических исследований.

Материалы и методы. Количественное определение валганцикловира и его метаболита ганцикловира в плазме крови проводили методом ВЭЖХ-УФ. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения белков.

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим валидационным параметрам: селективность, калибровочная кривая (линейность), точность, прецизионность, предел количественного определения, перенос пробы, стабильность.

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения валганцикловира и его активного метаболита ганцикловира в плазме крови человека методом ВЭЖХ-УФ. Подтвержденные аналитические диапазоны методики составили 5,0–1000,0 нг/мл для валганцикловира и 100,0–10000,0 нг/мл для ганцикловира в плазме крови. Полученные аналитические диапазоны позволяют применять разработанную методику для проведения аналитической части исследований фармакокинетики препаратов, содержащих валганцикловир.

1. Teshima D., Otsubo K., Yoshida T., Itoh Y., Oishi R. A simple and simultaneous determination of acyclovir and ganciclovir in human plasma by high‐performance liquid chromatography. Biomedical Chromatography. 2003; 17(8): 500–503. DOI: 10.1002/bmc.258.

2. Czock D., Scholle C., Rasche F. M., Schaarschmidt D., Keller F. Pharmacokinetics of valganciclovir and ganciclovir in renal impairment. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 2002; 72(2): 142– 150. DOI: 10.1067/mcp.2002.126306.

3. Perrottet N., Beguin A., Meylan P., Pascual M., Manuel O., Buclin T., Biollaz J., Decosterd L. A. Determination of aciclovir and ganciclovir in human plasma by liquid chromatography–spectrofluorimetric detection and stability studies in blood samples. Journal of Chromatography B. 2007; 852(1-2): 420–429. DOI: 10.1016/j.jchromb.2007.01.045.

4. Karpov I. A., Solovey N. V. Valganciclovir as a highly effective drug for the prevention and treatment of herpetic infections. Medical news. 2018; 3: 282 (in Russ.).

5. Padullés A., Colom H., Armendariz Y., Cerezo G., Caldes A., Pou L., Torras J., Grinyó J. M., Lloberas N. Determination of ganciclovir in human plasma by ultra performance liquid chromatography–UV detection. Clinical biochemistry. 2012; 45(4-5): 309–314. DOI: 10.1016/j.clinbiochem.2011.12.014.

6. Singh O., Saxena S., Mishra S., Khuroo A., Monif T. Determination of valganciclovir and ganciclovir in human plasma by liquid chromatography tandem mass spectrometric detection. Clinical biochemistry. 2011; 44(10-11): 907–915. DOI: 10.1016/j.clinbiochem.2011.04.003.

7. Chu F., Kiang C. H., Sung M. L., Huang B., Reeve R. L., Tarnowski T. A rapid, sensitive HPLC method for the determination of ganciclovir in human plasma and serum. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. 1999; 21(3): 657–667. DOI: 10.1016/S0731-7085(99)00161-2.

8. Dao Y. J., Jiao Z., Zhong M. K. Simultaneous determination of aciclovir, ganciclovir, and penciclovir in human plasma by highperformance liquid chromatography with fluorescence detection. Journal of Chromatography B. 2008; 867(2): 270–276. DOI: 10.1016/j.jchromb.2008.04.022.

9. Dogan-Topal B., Ozkan S. A., Uslu B. Simultaneous determination of abacavir, efavirenz and valganciclovir in human serum samples by isocratic HPLC-DAD detection. Chromatographia. 2007; 66(1): 25-30.

10. Xu H. R., Li X. N., Chen W. L., Liu G. Y., Chu N. N., Yu C. A sensitive assay for simultaneous determination of plasma concentrations of valganciclovir and its active metabolite ganciclovir by LC/MS/MS. Journal of Chromatography B. 2007; 848(2): 329–334. DOI: 10.1016/j.jchromb.2006.10.053.

11. Mironov A. N. Guidelines for the examination of medicines. T. II. M.: Grif and K. 2013: 280 (in Russ.).

12. Food and Drug Administration. Available at: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry.

13. European Medicines Agency. Available at: https://www.ema.europa.eu/en/bioanalytical-method-validation.