Валидационные испытания питательной среды Сабуро при определении противогрибковой активности впервые синтезированных соединений методом двукратных серийных разведений

Введение. В связи высокой распространенностью и социальной значимостью грибковых инфекций поиск новых антифунгальных препаратов является актуальным направлением развития современной фармакологии. Одним из важных компонентов доклинических микробиологических исследований, влияющих на конечный результат, являются питательные среды, используемые в процессе научного эксперимента.

Цель. Валидировать использование жидкой среды Сабуро как альтернативы среды RPMI 1640 с глутамином для оптимизации экспериментальных условий определения ПГА новых соединений микрометодом серийных разведений.

Материалы и методы. Для изучения противогрибковой активности (ПГА) новых молекул использовали микрометод двукратных серийных разведений. Изучали ПГА в отношении типового тест-штамма Candida albicans NCTC 885-653. Оценку валидационных параметров осуществляли согласно принципам, изложенным в ОФС.1.1.0021.18 «Валидация микробиологических методик». Для апробации валидированной методики использовали новое соединение из группы производных амидов 4-(гет)арил-2,4-диоксобутановых кислот.

Результаты и обсуждение. Получены результаты, соответствующие критериям приемлемости в отношении изученных валидационных параметров – правильность, прецизионность, линейность, устойчивость, предел количественного обнаружения. Показана возможность использования среды Сабуро для определения противогрибковой активности на примере нового соединения группы производных амидов 4-(гет)арил-2,4-диоксобутановых кислот.

Заключение. В связи с доказанными лучшими ростовыми свойствами испытуемой альтернативной жидкой среды Сабуро в отношении исследуемой культуры Candida albicans и сходимости результатов определения антифунгальной активности при использовании альтернативной и референтной сред, можно рекомендовать жидкую среду Сабуро для использования при определении ПГА впервые синтезированных соединений с использованием микрометода серийных разведений.

1. Denning D. W., Kneale M., Sobel J. D., Rautemaa-Richardson R. Global burden of recurrent vulvovaginal candidiasis: a systematic review. The Lancet infectious diseases. 2018;18(11):339–347. DOI: 10.1016/S1473-3099(18)30103-8.

2. Fatahinia M., Halvaeezadeh M., Rezaei-Matehkolaei A. Comparison of enzymatic activities in different Candida species isolated from women with vulvovaginitis. Journal de Mycologie Médicale. 2017;27(2):188–194. DOI: 10.1016/j.mycmed.2017.01.009.

3. Quindós G. Epidemiology of invasive mycoses: A landscape in continuous change. Revista Iberoamericana de Micologia. 2018;35(4):171–178. DOI: 10.1016/j.riam.2018.07.002.

4. Quindós G., Gil-Alonso S., Marcos-Arias C., Sevillano E., Mateo E., Jauregizar N., Eraso E. Therapeutic tools for oral candidiasis: Current and new antifungal drugs. Medicina oral, patologia oral y cirugia bucal. 2019;24(2):172–180. DOI: 10.4317/medoral.22978.

5. Riera F. O., Caeiro J. P., Angiolini S. C., Vigezzi C., Rodriguez E., Icely P. A., Sotomayor C. E. Invasive Candidiasis: Update and Current Challenges in the Management of This Mycosis in South America. Antibiotics. 2022;11(7):877. DOI: 10.3390/antibiotics11070877.

6. Vila T., Sultan A. S., Montelongo-Jauregui D., Jabra-Rizk M. A. Oral candidiasis: a disease of opportunity. Journal of Fungi. 2020;6(1):15. DOI: 10.3390/jof6010015.

7. Гейн В. Л., Бобровская О. В., Русских А. А., Новикова В. В., Гейн О. Н., Карпенко Ю. Н., Чащина С. В., Дмитриев М. В., Янкин А. Н. Синтез и биологическая активность 5-арил-N-{4-[(1,3-тиазол-2-ил)cульфамоил]фенил}-1-фенилпиразол-3-карбоксамидов и их солей. Журнал общей химии. 2019;89(4):542–551. DOI:10.1134/S0044460X19040073.

8. Дмитриев М. В., Иванов Д. В., Игидов Н. М., Махмудов Р. Р., Новикова В. В., Чернов И. Н. Синтез и биологическая активность моно-и дибромпроизводных 2-амино-5-(2-арил-2-оксоэтилиден)-4-оксо-1н-4,5-дигидрофуран-3-карбоновых кислот. Журнал общей химии. 2018;88(7):1105–1109. DOI: 10.1134/S0044460X18070089.

9. Новикова В. В., Бобровская О. В., Гейн В. Л., Селиверстов Г. В., Люст Е. Н., Махмудов Р. Р. Оценка противогрибковой и антибактериальной активности серебряных солей 5,6-диарил-4-[4-(ацетиламино-сульфонил)фенил]-3,5-дигидропирроло[3,4-c]пиразол-3-онов. Экспериментальная и клиническая фармакология. 2021;84(9):34–38. DOI: 10.30906/0869-2092-2021-84-9-34-38.

10. Bonifacio B. V., Machado Vila T. V., Masiero I. F., da Silva P. B., da Silva I. C., de Oliveira Lop T. M. Antifungal activity of a hydroethanolic extract from Astronium urundeuva leaves against Candida albicans and Candida glabrata. Frontiers in microbiology. 2019;10:2642. DOI: 10.3389/fmicb.2019.02642.

11. Gamal A., Chu S., McCormick T. S., Borroto-Esoda K., Angulo D., Ghannoum M. A. Ibrexafungerp, a novel oral triterpenoid antifungal in development: overview of antifungal activity against Candida glabrata. Frontiers in Cellular and Infection Microbiology. 2021;11:642358. DOI: 10.3389/fcimb.2021.642358.

12. Wall G., Lopez-Ribot J. L. Screening repurposing libraries for identification of drugs with novel antifungal activity. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 2020;64(9). DOI: 10.1128/AAC.00924-20.

13. Шепелин А. П. Современное состояние и тенденции в разработке, производстве и применении питательных сред. Бактериология. 2016;1(1):42–47. DOI: 10.20953/2500-1027-2016-1-42-47.

14. Bonnet M., Lagie J. C., Raoult D., Khelaifia S. Bacterial culture through selective and non-selective conditions: the evolution of culture media in clinical microbiology. New microbes and new infections. 2020;34:100622. DOI: 10.1016/j.nmni.2019.100622.

15. Savinov V. A., Ovchinnikov R. S., Kapustin A. V., Laishevtcev A. I., Gulykin A. M. Development of a differential diagnostic nutrient medium for the express diagnosis of animal dermatophytosis. IOP Publishing. 2019;315(2):022071. DOI: 10.1088/1755-1315/315/2/022071.

16. Baranova A. A., Georgieva M. L., Bilanenko E. N., Andreev Ya. A., Rogozhin E. A., Sadykova V. S. Antimicrobial potential of alkalophilic micromycetes Emericellopsis alkaline. Applied biochemistry and microbiology. 2017;53(6):703–710.

17. Миронов А. Н., ред. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных. Часть первая. М.: Гриф и К; 2012. 944 с.

18. Гунар О. В., Сахно Н. Г., Абрамович Р. А. Основы валидации микробиологических методик фармацевтического анализа: учебное пособие. М.: РУДН; 2017. 221 с.