Разработка методики хроматографического анализа вспомогательных веществ в липосомальной лекарственной форме фотосенсибилизатора тетра-3-фенилтио-фталоцианина гидроксиалюминия

Введение. В лаборатории разработки лекарственных форм ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России разработана липосомальная лекарственная форма ФС тетра-3-фенилтио-фталоцианина гидроксиалюминия (ТФГА), для которой необходимо было разработать простую, точную и легко воспроизводимую методику количественного определения основного действующего вещества и вспомогательных веществ в составе лекарственного средства. В качестве такой методики была выбрана высокоэффективная тонкослойная хроматография (ВЭТСХ).

Цель. Разработка хроматографических методик количественного определения вспомогательных веществ в липосомальной лекарственной форме ФС ТФГА и для определения подлинности.

Материалы и методы. Определение веществ проводили методом ВЭТСХ с последующей хроматоденситометрией. Для проведения анализа использовали субстанцию ТФГА (ФГУП «ГНЦ «НИОПИК», Россия), плацебо лиофилизированной липосомальной формы без ТФГА в составе (ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н. Н. Блохина» Минздрава России), яичный фосфатидилхолин (96 %, CAS № 97281-44-2, ЕPC, Lipoid GmbH, Германия), холестерин (≥99 %, CAS № C8667, Sigma-Aldrich, Япония), сахарозу (ч.д.а., ООО ТД «ХИММЕД», Россия) и различные органические растворители.

Результаты и обсуждение. После проведения серий собственных экспериментов была выбрана подвижная фаза для проведения ВЭТСХ-анализа: изопропанол : 25%-й водный аммиак (80 : 20 об/об), при этом время разделения составило 20–25 мин (l = 75 мм), t = 20 °С. Для визуализации пятен сахарозы, фосфатидилхолина и холестерина выбрали 5%-й раствор фосфорномолибденовой кислоты. Устойчивость стандартных образцов была подтверждена на серии предвалидационных исследований. Проведена валидация методики.

Заключение. Для количественного определения сахарозы, фосфатидилхолина и холестерина в новой липосомальной лекарственной форме выбран метод ВЭТСХ с хроматоденситометрией, который позволяет идентифицировать сразу все три компонента в составе лекарственной формы. Проведена валидация методики.

1. Переводчикова Н. И., Горбунова В. А. Руководство по химиотерапии опухолевых заболеваний. М.: Практическая медицина; 2018. 688 c.

2. Meerovich G. A., Romanishkin I. D., Loschenov V. B., Akhlyustina E. V., Tiganova I. G., Tolordava E. R., Philipova N. I., Zhizhimova Y. S., Romanova Y. M., Gintsburg A. L., Lukyanets E. A., Makarova E. A., Yuzhakova O. A. Novel polycationic photosensitizers for antibacterial photodynamic therapy. Advances in Experimental Medicine and Biology. 2019;1282:1–19. DOI: 10.1007/5584_2019_431.

3. Meerovich I., Dash A. K., Nichols M. G. Low-intensity light-induced drug release from a dual delivery system comprising of a drug loaded liposome and a photosensitive conjugate. Journal of Drug Targeting. 2020;28(6):655–667. DOI: 10.1080/1061186X.2019.1710838.

4. Ozog D. M., Rkein A. M., Fabi S. G., Gold M. H., Goldman M. P., Lowe N. J., Martin G. M., Munavalli G. S. Photodynamic Therapy: A Clinical Consensus Guide. Dermatologic Surgery. 2016;42(7):804–827. DOI: 10.1097/DSS.0000000000000800.

5. Sanarova E., Meerovich I., Lantsova A., Kotova E., Shprakh Z., Polozkova A., Orlova O., Borisova L., Smirnova Z., Oborotova N., Baryshnikov A., Meerovich G., Lukyanets E. Thiosens liposomal dosage form technology development and photodynamic efficiency assessment. Journal of Drug Delivery Science and Technology. 2014;24(4):315–319. DOI: 10.1016/S1773-2247(14)50068-8.

6. Lantsova A. V., Olefir Yu. V., Bunyatyan N. D., Sanarova E. V., Orlova O. L., Dmitrieva M. V., Polozkova A. P., Oborotova N. A., Ogai M. A., Khadzhieva Z. D., Nikolaeva L. L., Kompantsev D. V., Shevchenko A. M., Prokof’ev A. B. Validation of a Method for Assay of Excipients in Liposomal Medicinal Formulations of the Photosensitizer Lipophthalocyan. Pharmaceutical Chemistry Journal. 2020;53(10):986–990. DOI: 10.1007/s11094-020-02110-4.

7. Тринеева О. В. Разработка теоретических подходов к определению основных групп биологически активных веществ лекарственного растительного сырья методом ТСХ. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021;10(2):69–79. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-2-69-79.

8. Красиков В. Д. Основы планарной хроматографии. СПб.: Химиздат; 2005. 232 с.

9. Renger B., Vegh Z., Ferenczi-Fodor K. Validation of thin layer and high performance thin layerchromatographic methods. J. Chromatogr. A. 2011;1218:2712–2721. DOI: 10.1016/j.chroma.2011.01.059.

10. Spangenberg B., Poole C. F., Weins C. Quantitative Thin-Layer Chromatography: A Practical Survey. Chromatographia. 2011;73:823.

11. Ebel S., Alert D., Schaefe U. Calibration in TLC/HPTLC using the Michaelis-Menten function. Chromatographia. 1984;18(1)23–27. DOI: 10.1007/BF02279459.