Изучение фармакокинетики нового производного 4,5-дигидроизоксазол-5-карбоксамида на крысах

Введение. 3-(2-бутил-5-хлоро-1Н-имидазол-4-ил)-N-[4-метокси-3-(трифторметил)фенил]-4,5-дигидро-1,2-оксазол-5-карбоксамид (R004) является новой перспективной молекулой для терапии ревматоидного артрита. Данное соединение находится на стадии доклинического исследования, в ходе которого вместе с эффективностью и безопасностью необходимо изучить его фармакокинетику. При этом необходимо установить основные фармакокинетические параметры лекарственного средства и его метаболитов в плазме крови при однократном введении.

Цель. Оценка линейности фармакокинетики и относительной биодоступности 3-(2-бутил-5-хлоро-1Н-имидазол-4-ил)-N-[4-метокси-3-(трифторметил)фенил]-4,5-дигидро-1,2-оксазол-5-карбоксамида после однократного введения субстанции крысам.

Материалы и методы. Субстанцию R004 вводили крысам однократно перорально в дозировках 10 мг/кг, 20 мг/кг и 40 мг/кг и внутрибрюшинно в дозировке 10 мг/кг. Исследование проводилось на 24 крысах линии Wistar: по 6 крыс на каждую из дозировок. Образцы крови отбирались до введения и через 30 мин, 1 ч, 1 ч 30 мин, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч, 12 ч, 24 ч после введения лекарственного средства. Полученная плазма стабилизировалась 250 мМ раствором ацетата аммония для предотвращения гидролиза R004. Подготовку проб плазмы осуществляли путем осаждения белков ацетонитрильным раствором внутренних стандартов. Измерение концентрации R004 и его метаболитов 3-(2-бутил-5-хлоро-1Н-имидазол-4-ил)-4,5-дигидро-1,2-оксазол-5-карбоновой кислоты (М1) и 4-метокси-3-(трифторметил)анилина (M2) проводили с помощью ВЭЖХ-МС/МС. При оценке фармакокинетических параметров применялся некомпартментный подход.

Результаты и обсуждение. Разработанная биоаналитическая методика прошла полную валидацию согласно требованиям руководств ЕАЭС по проведению исследований биоэквивалентности и ICH M10. Аналитический диапазон определения в плазме R004 составил 2–2000 нг/мл, М1 и М2 – 1–1000 нг/мл. Зависимость параметров C_max и AUC_0–t изучаемого соединения и его метаболитов от введенной дозы носила линейный характер. Так, величина коэффициента корреляции C_max R004 составил 0,9995, а параметра AUC_0–t – 0,9932. Установлено наличие энтерогепатической рециркуляции R004. Величина относительной биодоступности R004 составила 21,26 %.

Заключение. Разработанная методика успешно применена для фармакокинетического исследования. R004 и его метаболиты обладают линейной фармакокинетикой при пероральном введении субстанции.

1. Scherer H. U., Häupl T., Burmester G. R. The etiology of rheumatoid arthritis. Journal of Autoimmunity. 2020;110:102400. DOI: 10.1016/j.jaut.2019.102400.

2. Romanycheva A. A., Korsakov M. K., Fedorov V. N., Shetnev A. A., Arshinov A. V. Prospects for innovative drugs for the treatment of rheumatoid arthritis. Problems of biological, medical and pharmaceutical chemistry. 2023;(12):55–63. (In Russ.) DOI: 10.29296/25877313-2023-12-07.

3. Kalogera S., He Y., Bay-Jensen A.-C., Gantzel T., Sun S., Manon-Jensen T., Karsdal M. A., Thudium C. S. The activation fragment of PAR2 is elevated in serum from patients with rheumatoid arthritis and reduced in response to anti-IL6R treatment. Scientific Reports. 2021;11(1):24285. DOI: 10.1038/s41598-021-03346-0.

4. Korsakov M. K., Fedorov V. N., Smirnov N. A., Shetnev A. A., Leonova O. V., Volkhin N. N., Andreyev A. I. Screening of anti-inflammatory activity of 4.5-dihydroisoxazol-5-carboxamide (PAR-2 inhibitors) based on formaldehyde oedema model among white lab rats. Research Results in Pharmacology. 2023;9(4):105–111. DOI: 10.18413/rrpharmacology.9.10061.

5. Khokhlov A. L., Yaichkov I. I., Alexeev M. A., Korsakov M. K., Shetnev A. A., Ivanovsky S. A., Volkhin N. N., Petukhov S. S., Vasilyeva E. A. Identification and synthesis of metabolites of the new 4.5-dihydroisoxazol-5-carboxamide derivate. Research Results in Pharmacology. 2024;10(2):83–95. DOI: 10.18413/rrpharmacology.10.482.

6. Mironov A. N., editor. Guidelines for conducting preclinical studies of drugs. Part one. Moscow: Grif i K; 2012. 944 p. (In Russ.)

7. Hu W., Zhong Z.-Y., Gao Y.-T., Ren X.-F., Liu H.-Y., Tang X.-J. Establishment of LC-MS/MS Method for Determination of GMDTC in Rat Plasma and Its Application in Preclinical Pharmacokinetics. Molecules. 2023;28(3):1191. DOI: 10.3390/molecules28031191.

8. Sun P., Xiao H., Qiu J., Cao Y., Kong J., Zhang S., Cao X. Plasma Protein Binding Rate and Pharmacokinetics of Lekethromycin in Rats. Antibiotics. 2022;11(9):1241. DOI: 10.3390/antibiotics11091241.

9. Yang Z., Sun Q., Wang S., Tang B., Yuan C., Wu Y., Dai J., Yang C., Wang L., Zhou Q., Wang J., Weng Q. Pharmacokinetics, tissue distribution, and plasma protein binding rate of curcumol in rats using liquid chromatography tandem mass spectrometry. Frontiers in Pharmacology. 2022;13:1036732. DOI: 10.3389/fphar.2022.1036732.

10. Xiong J., Xu Y., He S., Zhang Y., Wang Z., Wang S., Jiang H. Pharmacokinetics and bioavailability of tildipirosin in rabbits following single-dose intravenous and intramuscular administration. Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics. 2020;43(5):448–453. DOI: 10.1111/jvp.12882.

11. Wilson S. E., Carpenter J. W., Gardhouse S., KuKanich B. Pharmacokinetics of mavacoxib in New Zealand White rabbits (Oryctolagus cuniculus). American Journal of Veterinary Research. 2023;84(5). DOI: 10.2460/ajvr.22.11.0196.