Разработка и валидация ВЭЖХ-методики количественного определения кумарина в бобах тонка

Введение. Бобы тонка (семена Dipteryx odorata, семейство Fabaceae) – ценный источник кумарина, применяемого в пищевой, парфюмерной и косметической промышленности благодаря насыщенному аромату. Несмотря на фармакологическую ценность (антикоагулянтная, антиоксидантная активность), кумарин обладает доказанной гепато- и гематотоксичностью, что ограничивает его использование в ряде стран. Несмотря на контроль синтетического кумарина в ароматизаторах, природный аналог из бобов тонка не имеет четких нормативов, хотя обладает идентичной активностью. Рост спроса на натуральные продукты повысил популярность бобов тонка, однако недостаток научных данных об их безопасности и методах анализа затрудняет контроль качества. Разработка валидированных методик анализа с использованием метода ВЭЖХ – актуальная задача для обеспечения безопасности его применения в промышленности.

Цель. Разработка ВЭЖХ-методики количественного определения кумарина в бобах тонка и ее валидация с дальнейшей апробацией на нескольких партиях исследуемого объекта.

Материалы и методы. В качестве объектов исследования были использованы пять партий бобов тонка различных стран-производителей. Условия хроматографирования: колонка Luna C18(100) Å LC Column, 250 × 4,6 мм, 5 мкм, температура термостата – 40 °С, длина волны детекции – 275 нм, ПФ А – ацетонитрил, ПФ Б – вода. Режим элюирования: изократика (ПФ Б – 50 %) в течение 12 мин.

Результаты и обсуждение. Разработанная методика валидна по показателям пригодности хроматографической системы, специфичности, линейности (диапазон 0,001–0,1 мг/мл) и прецизионности. Ее преимущества – экспрессность и экономичность, что упрощает контроль качества сырья. Количественное содержание кумарина в исследуемых объектах варьируется в диапазоне от 1,25 ± 0,07 % до 4,29 ± 0,12 %, что коррелирует с данными зарубежных исследователей.

Заключение. Разработана и валидирована ВЭЖХ-методика для количественного определения кумарина в бобах тонка. Разработанная методика может быть использована для стандартизации и рутинного анализа этого перспективного сырья в различных отраслях промышленности, обеспечивая необходимый уровень безопасности при его применении.

1. Cuchet A., Jame P., Anchisi A., Schiets F., Carénini E., Casabianca H. Authentication of Tonka beans extracts (Dipteryx odorata) using LC-UV/MS, GC-MS and multi element (¹³C, ²H and ¹⁸O) bulk specific isotope analysis. Industrial Crops and Products. 2024;209:118038. DOI: 10.1016/j.indcrop.2024.118038.

2. Heghes S. C., Vostinaru O., Mogosan C., Iuga C. A., Filip L. Safety profile of nutraceuticals rich in coumarins: An update. Frontiers in Pharmacology. 2022;13:803338. DOI: 10.3389/fphar.2022.803338.

3. Toma A. C., Stegmüller S., Richling E. Coumarin contents of tonka (Dipteryx odorata) products. European Food Research and Technology. 2025;251(4):513–517. DOI: 10.1007/s00217-024-04570-2.

4. Doctor N., Parker G., Vang K., Smith M., Kayan B., Yang Y. Stability and Extraction of Vanillin and Coumarin under Subcritical Water Conditions. Molecules. 2020;25(5):1061. DOI: 10.3390/molecules25051061.

5. Gao L., Wang F., Chen Y., Li F., Han B., Liu D. The antithrombotic activity of natural and synthetic coumarins. Fitoterapia. 2021;154:104947. DOI: 10.1016/j.fitote.2021.104947.

6. Thakur A., Singla R., Jaitak V. Coumarins as anticancer agents: A review on synthetic strategies, mechanism of action and SAR studies. European Journal of Medicinal Chemistry. 2015;101:476–495. DOI: 10.1016/j.ejmech.2015.07.010.

7. Todorov L., Saso L., Kostova I. Antioxidant activity of coumarins and their metal complexes. Pharmaceuticals. 2023;16(5):651. DOI: 10.3390/ph16050651.

8. Guo P. J., Zhao Y. N., Li J., Liu S. H., Wang Y. L., Wang C. Y. Toxicological research and safety consideration of coumarins. Zhongguo Zhong yao za zhi = China Journal of Chinese Materia Medica. 2020;45(3):518–522. DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20191014.401.

9. Sharifi-Rad J., Cruz-Martins N., López-Jornet P., Pons-Fuster López E., Harun N., Yeskaliyeva B., Beyatli A., Sytar O., Shaheen S., Sharopov F., Taheri Y., Docea A. O., Calina D., Cho W. C. Natural coumarins: exploring the pharmacological complexity and underlying molecular mechanisms. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021;2021:6492346. DOI: 10.1155/2021/6492346.

10. Zughaib M. Do cinnamon supplements cause acute hepatitis? American Journal of Case Reports. 2015;16:250–254. DOI: 10.12659/AJCR.892804.

11. Aspatwar A., Berrino E., Bua S., Carta F., Capasso C., Parkkila S., Supuran C. T. Toxicity evaluation of sulfamides and coumarins that efficiently inhibit human carbonic anhydrases. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry. 2020;35(1):1765–1772. DOI: 10.1080/14756366.2020.1822829.

12. Хацаюк А. С., Павлова О. Е., Эхова М. Э. Роль и значение высокоэффективной жидкостной хроматографии в практике высокотехнологичных лабораторных исследований. Здоровье. Медицинская экология. Наука. 2016;3(66):215–219. DOI: 10.18411/hmes.d-2016-146.

13. Шуракова В. С., Сурбеева Е. С. Разработка способа пробоподготовки растительного сырья, содержащего кумарины, для хроматографического анализа. В сб.: XIV Всероссийская научная конференция c международным участием Молодежного научного общества СПХФУ «Молодая фармация – потенциал будущего». 28 марта – 02 апреля 2024. Санкт-Петербург. СПб.: Изд-во СПХФУ; 2024. С. 675–678.

14. Эпштейн Н. А. Валидация аналитических методик: графические и расчетные критерии для оценки линейности методик на практике. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2019;8(2):122–130. DOI: 10.33380/2305-2066-2019-8-2-122-130.

15. Lima J. C., Traczynski M., Giufrida W. M., Feihrmann A. C., Freitas L. S., Cardozo-Filho L. Modifier-Enhanced Supercritical CO2 Extraction with GRAS Solvents of Coumarin from Cumaru Seeds (Dipteryx odorata). Chemical Engineering Transactions. 2017;57:301–308. DOI: 10.3303/CET1757301.