Разработка и валидация ВЭЖХ-МС/МС-методики количественного определения нового производного сиднонимина и его метаболитов в плазме крови кроликов

Введение. BBP2023 – новый лекарственный кандидат группы сиднониминов, обладающий церебральной вазодилатирующей активностью и прокогнитивными свойствами. Фармакологические эффекты BBP2023 обусловлены наличием активных метаболитов. Для проведения фармакокинетических исследований на доклиническом этапе необходимо разработать биоаналитическую методику определения BBP2023 и его метаболитов в плазме крови кроликов.

Цель. Разработка и валидация хромато-масс-спектрометрической методики количественного определения нового производного сиднонимина и его метаболитов в плазме крови кроликов.

Материалы и методы. Количественное определение BBP2023 в плазме крови кроликов проводили методом ВЭЖХ-МС/МС. В процессе пробоподготовки биоматериала применяли способ осаждения белков метанолом. Хроматографическое разделение проводили смесью деионизированной воды и ацетонитрила в градиентном режиме на колонке ZORBAX Eclipse XDB-C18, 4,6 × 50 мм, 5 мкм, с помощью хроматографа Agilent 1260 Infinity II. Детектирование осуществляли в режиме MRM с использованием масс-спектрометра AB Sciex QTRAP 3200 MD. В качестве внутреннего стандарта применяли N-(этоксикарбонил)-3-(4-метилпентан-2-ил)сиднонимин.

Результаты и обсуждение. Разработана методика пробоподготовки плазмы крови кроликов, подобраны оптимальные условия хроматографирования и детектирования исследуемого соединения и его метаболитов. Биоаналитическая методика валидирована по следующим показателям: селективности, матричному эффекту, степени извлечения, переносу пробы, линейности калибровочного диапазона, нижнему пределу количественного определения, внутри- и межсерийной точности и прецизионности, а также стабильности аналитов и внутреннего стандарта на этапах анализа.

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения нового производного сиднонимина BBP2023 и его метаболитов в плазме крови кроликов с применением ВЭЖХ-МС/МС. Подтвержденные аналитические диапазоны для BBP2023, BBP2023 А и BBP2023 С составили 5,0–500,0 нг/мл (5,0–1000,0 нг/мл для геранамина). Методика была использована при проведении аналитической части доклинического фармакокинетического исследования BBP2023 на кроликах.

1. Zivadinov R., Chung C.-P. Potential involvement of the extracranial venous system in central nervous system disorders and aging. BMC Medicine. 2013;11:260. DOI: 10.1186/1741-7015-11-260.

2. Kolmos M., Christoffersen L., Kruuse C. Recurrent ischemic stroke a systematic review and meta-analysis. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 2021;30(8):105935. DOI: 10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2021.105935.

3. Ding R., Zhang H. Efficacy of very early mobilization in patients with acute stroke: a systematic review and meta-analysis. Annals of Palliative Medicine. 2021;10(11):1177611784. DOI: 10.21037/apm-21-2997.

4. Shahid J., Kashif A., Shahid M. K. A comprehensive review of physical therapy interventions for stroke rehabilitation: impairment-based approaches and functional goals. Brain Sciences. 2023;13(5):717. DOI: 10.3390/brainsci13050717.

5. Yuan M., Xiao Z.-L., Zhou H.-Y., Rao W., Huang G., Nie H.-B., Cao W.-F., Xu R.-S. Bipolar disorder and the risk for stroke incidence and mortality: a meta-analysis. Neurological Sciences. 2022;43(1):467–476. DOI: 10.1007/s10072-021-05348-2.

6. Rajeev V., Chai Y. L., Poh L., Selvaraji S., Fann D. Y., Jo D.-G., De Silva T. M., Drummond G. R., Sobey C. G., Arumugam T. V., Chen C. P., Lai M. K. P. Chronic cerebral hypoperfusion: a critical feature in unravelling the etiology of vascular cognitive impairment. Acta Neuropathologica Communications. 2023;11(1):93. DOI: 10.1186/s40478-023-01590-1.

7. Кулеш А. А., Емелин А. Ю., Боголепова А. Н., Доронина О. Б., Захаров В. В., Колоколов О. В., Котов С. В., Корсунская Л. Л., Кутлубаев М. А., Ласков В. Б., Левин О. С., Парфенов В. А. Клинические проявления и вопросы диагностики хронического цереброваскулярного заболевания (хронической ишемии головного мозга) на ранней (додементной) стадии. Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика. 2021;13(1):4–12. DOI: 10.14412/2074-2711-2021-1-4-12.

8. Rajeev V., Fann D. Y., Dinh Q. N., Kim H. A., De Silva T. M., Lai M. K. P., Chen C. L.-H., Drummond G. R., Sobey C. G., Arumugam T. V. Pathophysiology of blood brain barrier dysfunction during chronic cerebral hypoperfusion in vascular cognitive impairment. Theranostics. 2022;12(4):1639–1658. DOI: 10.7150/thno.68304.

9. Cross J. G., May B. R., Mai P. Q. M., Anderson E., Welsh C., Chandran S., Chorath K. T., Herr S., Gonzalez D. A systematic review and evaluation of post-stroke depression clinical practice guidelines. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 2023;32(9):107292. DOI: 10.1016/j.jstrokecerebrovasdis.2023.107292.

10. Castello J. P., Pasi M., Kubiszewski P., Abramson J. R., Charidimou A., Kourkoulis C., DiPucchio Z., Schwab K., Anderson C. D., Gurol M. E., Greenberg S. M., Rosand J., Viswanathan A., Biffi A. Cerebral small vessel disease and depression among intracerebral hemorrhage survivors. Stroke. 2022;53(2):523–531. DOI: 10.1161/STROKEAHA.121.035488.

11. Ištoňová M., Dorko E., Knap V., Stehlíková B., Murgová A., Ondová P., Rimárová K. Assessment of depressive disorders and states of anxiety in patients following cerebrovascular accidents in connection with health care provision. Central European Journal of Public Health. 2024;32(Suppl):S18–S24. DOI: 10.21101/cejph.a7888.

12. Ghosh P. A., Chaudhury S., Rohatgi S. Assessment of Depression, Anxiety, Stress, Quality of Life, and Fatigue in Patients After a Cerebrovascular Accident. Cureus. 2024;16(10):e72051. DOI: 10.7759/cureus.72051.

13. McAleese N., Guzman A., O’Rourke S. J., Gillespie D. C. Post-stroke emotionalism: a qualitative investigation. Disability and Rehabilitation. 2021;43(2):192–200. DOI: 10.1080/09638288.2019.1620876.

14. Wu J., Yin W., Huang Z., Zhang Y., Jia J., Cheng H., Kang F., Huang K., Sun T., Tian J., Xu X., Zhang Y. Design, synthesis, and biological evaluation of organic nitrite (NO2donors as potential anticerebral ischemia agents. Journal of Medicinal Chemistry. 2021;64(15):10919–10933. DOI: 10.1021/acs.jmedchem.1c00282.

15. Archavlis E., Nievas M. C. Y. Cerebral vasospasm: a review of current developments in drug therapy and research. Journal of Pharmaceutical Technology and Drug Research 2013;2(1):18. DOI: 10.7243/2050-120X-2-18.

16. Idocin A. F., Specklin S., Taran F. Sydnonimines: synthesis, properties and applications in chemical biology. Chemical Communications. 2025;61(31):5704–5718. DOI: 10.1039/d5cc00535c.

17. Попов Н. С., Баранов M. C., Балабаньян В. Ю. Целенаправленное изучение фармакокинетики соединений-лидеров из группы сиднониминов как основа для создания вазодилататоров с преимущественно центральным действием. Трансляционная медицина. 2024;11(S2):112.

18. Docherty J. R., Alsufyani H. A. Pharmacology of drugs used as stimulants. The Journal of Clinical Pharmacology 2021;61:S53–S69. DOI: 10.1002/jcph.1918.

19. Popov N. S., Gavrilenko D. A., Pavlov R. D., Baranov M. S., Kaurova D. E., Myasnyanko I. N., Ivanov D. S., Balabanyan V. Y. Study of the biotransformation of a new sydnonimine derivative with predominant cerebral vasodilatory activity. Research Results in Pharmacology 2025;11(4):258–271. DOI: 10.18413/rrpharmacology.11.1042.

20. Попов Н. С., Терехов В. М., Баранов М. С., Балабаньян В. Ю., Каурова Д. Е., Мяснянко И. Н. и др. Оценка роли печеночного метаболизма в биотрансформации сиднониминов in vivo. Вестник РГМУ. 2025;(3):50–57. DOI: 10.24075/vrgmu.2025.026.

21. Попов Н. С., Гавриленко Д. А., Баранов М. С., Каурова Д. Е., Мяснянко И. Н., Балабаньян В. Ю. Исследование фармакокинетики нового производного сиднонимина у кроликов при различных путях введения. Фармакокинетика и Фармакодинамика. 2025;(4):69–76. DOI: 10.37489/2587-7836-2025-4-69-76.