Разработка и валидация методики количественного определения тадалафила в плазме крови человека

Введение. Тадалафил – лекарственный препарат, используемый для лечения эректильной дисфункции. Для количественного определения тадалафила в плазме крови человека при проведении аналитической части фармакокинетических исследований применяются методы высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым и тандемным масс-спектрометрическим детектированием. В большинстве рассмотренных методик в качестве пробоподготовки применяется способ жидкость-жидкостной экстракции и в редких случаях применяют способ твердофазной экстракции. Данные способы являются в достаточной степени трудоёмкими и экономически затратными. Поэтому в настоящем исследовании в качестве пробоподготовки рассмотрен способ осаждения белков, являющийся более простым в исполнении, что актуально при анализе большого количества проб при проведении исследований биоэквивалентности.

Цель. Целью исследования является разработка методики количественного определения тадалафила в плазме крови человека методом ВЭЖХ с одноквадрупольным масс-спектрометрическим детектированием для проведения аналитической части фармакокинетических исследований.

Материалы и методы. Количественное определение тадалафила в плазме крови проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с одноквадрупольным масс-спектрометрическим детектированием. В качестве пробоподготовки был использован способ осаждения белков ацетонитрилом.

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим валидационным параметрам: селективность, эффект матрицы, калибровочная кривая (линейность), точность, прецизионность, предел количественного определения, перенос пробы, стабильность.

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения тадалафила в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС. Подтвержденный аналитический диапазон методики составил 5,00–1000,00 нг/мл тадалафила в плазме крови. Полученный аналитический диапазон позволяет применять разработанную методику для проведения аналитической части исследований фармакокинетики и биоэквивалентности воспроизводимых лекарственных средств, содержащих тадалафил.

1. Регистр лекарственных средств. Available at: http://www.rlsnet.ru/mnn_index

2. DrugBank. Available at: https://www.drugbank.ca/drugs/DB00820.

3. Shakya A. K., Abu-Awwad A. N., Arafat T. A., Melhim M. Validated liquid chromatographic–ultraviolet method for the quantitation of tadalafil in human plasma using liquid–liquid extraction. Journal of Chromatography B. 2007; 852(1-2): 403–408. Doi.org/10.1016/j.jchromb.2007.01.049.

4. Ramakrishna N. V. S., Vishwottam K. N., Puran, S., Koteshwara M., Manoj S., Santosh, M., Sumatha B. Quantitation of tadalafil in human plasma by liquid chromatography–tandem mass spectrometry with electrospray ionization. Journal of Chromatography B. 2004; 809(2): 243–249. Doi.org/10.1016/j.jchromb.2004.06.026.

5. Cheng C. L., Chou C. H. Determination of tadalafil in small volumes of plasma by high-performance liquid chromatography with UV detection. Journal of Chromatography B. 2005; 822(1-2): 278–284. Doi.org/10.1016/j.jchromb.2005.06.017.

6. Ma B., Shang X., Zhang Q., Li J., Liu Y., Cao X., Xu Q. Rapid analysis of tadalafil in human blood plasma and seminal plasma by liquid chromatography/tandem mass spectrometry. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. 2013; 77: 149–157. Doi.org/10.1016/j.jpba.2013.01.019.

7. Yokoyama Y., Tomatsuri M., Hayashi H., Hirai K., Ono Y., Yamada Y., Itoh K. Simultaneous microdetermination of bosentan, ambrisentan, sildenafil, and tadalafil in plasma using liquid chromatography/ tandem mass spectrometry for pediatric patients with pulmonary arterial hypertension. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. 2014; 89: 227–232. Doi.org/10.1016/j.jpba.2013.11.007

8. Rust K. Y., Wilkens H., Kaiser R., Bregel D., Wilske J., Kraemer T. Detection and Validated Quantification of the Phosphodiesterase Type 5 Inhibitors Sildenafil, Vardenafil, Tadalafil, and 2 of Their Metabolites in Human Blood Plasma by LC-MS/MS – Application to Forensic and Therapeutic Drug Monitoring Cases. Therapeutic drug monitoring. 2012; 34 (6): 729–735. Doi.org/10.1097/FTD.0b013e31827318b8.

9. Миронов А. Н. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Т. II. М.: Гриф и К. 2013; 280 с.

10. Food and Drug Administration. Available at: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry

11. European Medicines Agency. Available at: https://www.ema.europa.eu/en/bioanalytical-method-validation