Разработка и валидация методики определения антител к трастузумабу в сыворотке крови человека методом иммуноферментного анализа

Введение. Одним из широко используемых специфических препаратов моноклональных антител c anti-HER₂ (human epidermal growth factor receptor 2) активностью является трастузумаб – это высокоэффективное средство для «удаления» гиперэкспрессированных единиц рецептора HER₂ с поверхности клеток и снижения его онкогенности. Как и для других биологических лекарственных препаратов, для трастузумаба одной из возможных нежелательных реакций со стороны иммунной системы является иммуногенность – выработка противолекарственных антител к препарату.

Цель. Разработка и валидация методики полуколичественного определения антител к трастузумабу в сыворотке крови человека.

Материалы и методы. Полуколичественное определение антител проводилось методом иммуноферментного анализа в сочетании с техникой ACE, с использованием спектрофотометрического детектирования в видимом диапазоне спектра.

Результаты и обсуждения. Разработанная методика была валидирована по показателям: предел исключения, селективность, чувствительность, «хук»-эффект, толерантность к присутствию лекарственного препарата, прецизионность и стабильность (краткосрочная и долгосрочная). Для снижения интерференции компонентов биологической матрицы в анализе на этапе разработки было определено значение минимального необходимого разбавления (1 : 10). Рассчитанные значения предела исключения для этапа скрининга (фактор нормализации) и подтверждающего анализа составили 0,004 и 34,59 %, соответственно. Чувствительность разработанной методики составила 99,5 нг/мл антител к трастузумабу.

Заключение. Полученные при валидации методики результаты позволяют применять методику полуколичественного определения антител к трастузумабу в сыворотке крови человека для проведения аналитической части исследований безопасности препаратов трастузумаба.

1. Kaprin A. D., Starinskij V. V., Shahzadova A. O. Malignant neoplasms in Russia in 2020 (morbidity and mortality). Moscow: MNIOI im. P. A. Gercena − filial FGBU «NMIC radiologii» Minzdrava Rossii; 2021. 252 p.

2. Kreutzfeldt J., Rozeboom B., Dey N., De P. The trastuzumab era: current and upcoming targeted HER₂₊ breast cancer therapies. Am J Cancer Res. 2020;10(4):1045–1067.

3. Akbari V., Chou C., Abedi D. New insights into affinity proteins for HER2-targeted therapy: Beyond trastuzumab. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) – Reviews on Cancer. 2020;1874(2):188448. DOI: 10.1016/j.bbcan.2020.188448.

4. Gonzalez-Conchas G. A., Rodriguez-Romo L., Hernandez-Barajas D., Gonzalez-Guerrero J. F., Rodriguez-Fernandez I. A., Verdines-Perez A., Templeton A. J., Ocana A., Seruga B., Tannock I. F., Amir E., Vera-Badillo F. E. Epidermal growth factor receptor overexpression and outcomes in early breast cancer: A systematic review and a meta-analysis. Cancer treatment reviews. 2018;62:1–8. DOI: 10.1016/j.ctrv.2017.10.008.

5. Oberg H. H., Janitschke L., Sulaj V., Weimer J., Gonnermann D., Hedemann N., Wesch D. Bispecific antibodies enhance tumor-infiltrating T cell cytotoxicity against autologous HER-2-expressing high-grade ovarian tumors. Journal of leukocyte biology. 2020;107(6):1081–1095. DOI: 10.1002/JLB.5MA1119-265R.

6. Gaibar M., Beltrán L., Romero-Lorca A., Fernández-Santander A., Novillo A. Somatic mutations in HER2 and implications for current treatment paradigms in HER2-positive breast cancer. Journal of Oncology. 2020;2020:1–13. DOI: 10.1155/2020/6375956.

7. Tang Z., Jun Ya., Lv Ya., Li Yu., Zhang Z., Tao M., Chen X., He J., Zhang L., Wang Q.-L. Aptamer conjugated and doxorubicin-loaded grapefruit-derived nanovectors for targeted therapy against HER2+ breast cancer. Journal of Drug Targeting. 2020;28(2):186–194. DOI: 10.1080/1061186X.2019.1624970.

8. Barbier L., Declerck P., Simoen S., Neven P., Vulto A. G., Huys I. The arrival of biosimilar monoclonal antibodies in oncology: clinical studies for trastuzumab biosimilars. Br J Cancer. 2019;(121):199–210. DOI: 10.1038/s41416-019-0480-z.

9. Sauna Z. E., Lagassé D., Pedras-Vasconcelos J., Golding B., Rosenberg A. S. Evaluating and mitigating the immunogenicity of therapeutic proteins. Trends in biotechnology. 2018;36(10):1068–1084. DOI: 10.1016/j.tibtech.2018.05.008.