Разработка и валидация аналитической методики количественного определения 2-[2-[(5RS)-5-(гидроксиметил)-3-метил-1,3-оксазолидин-2-илиден]-2-цианоэтилиден]-1H-индол-3(2H)-она в лекарственном препарате методом ВЭЖХ-ДМД

Введение. Производное индолинона – 2-[2-[(5RS)-5-(гидроксиметил)-3-метил-1,3-оксазолидин-2-илиден]-2-цианоэтилиден]-1Н-индол-3(2Н)-он (далее – GRS) – новый стимулятор растворимой гуанилатциклазы, является действующим веществом в новом антитромботическом лекарственном препарате, капсулы, 20 мг. В фармацевтической разработке и промышленном выпуске лекарственных препаратов многоступенчатый контроль качества выступает детерминирующим фактором их эффективности и безопасности. В связи с этим разработка и валидация экспрессных и прецизионных аналитических методик является актуальной научно-практической задачей.

Цель. Разработка и валидация методики количественного определения действующего вещества (GRS) в лекарственном препарате, капсулы, 20 мг, с применением метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с диодно-матричным детектором.

Материалы и методы. В качестве объектов исследования использовали: лекарственный препарате на основе GRS, капсулы, 20 мг, используемые при его производстве вспомогательные вещества и АФС GRS, субстанция-порошок. Условия хроматографирования: хроматографическая колонка Kromasil C18, 250 × 4,6 мм, 5 мкм; температура термостата – 40 °С; длина волны детекции – 372 нм; подвижная фаза А – ацетатный буфер с pH 4,0, подвижная фаза Б – метанол. Градиентный режим элюирования в течение 17 мин.

Результаты и обсуждение. Разработанная методика валидирована по показателям «специфичность», «линейность в аналитическом диапазоне», «правильность», «прецизионность» и «робастность».

Заключение. Разработанная методика количественного определения действующего вещества GRS в лекарственном препарате, капсулы, 20 мг, методом ВЭЖХ обладает приемлемыми значениями валидационных характеристик, а также экспрессностью, простотой пробоподготовки, что позволяет использовать ее в рутинном анализе для контроля качества при производстве.

1. Roth G. A., Mensah G. A., Johnson C. O., Addolorato G., Ammirati E., Baddour L. M., Barengo N. C., Beaton A. Z., Benjamin E. J., Benziger C. P., Bonny A., Brauer M., Brodmann M., Cahill T.J., Carapetis J., Catapano A. L., Chugh S. S., Cooper L. T., Coresh J., Criqui M., DeCleene N., Eagle K. A., Emmons-Bell S., Feigin V. L., Fernandez-Sola J., Fowkes G., Gakidou E., Grundy S. M., He F. J., Howard G., Hu F., Inker L., Karthikeyan G., Kassebaum N., Koroshetz W., Lavie C., Lloyd-Jones D., Lu H. S., Mirijello A., Temesgen A. M., Mokdad A., Moran A. E., Muntner P., Narula J., Neal B., Ntsekhe M., Moraes de Oliveira G., Otto C., Owolabi M., Pratt M., Rajagopalan S., Reitsma M., Ribeiro A. L. P., Rigotti N., Rodgers A., Sable C., Shakil S., Sliwa-Hahnle K., Stark B., Sundström J., Timpel P., Tleyjeh I. M., Valgimigli M., Vos T., Whelton P. K., Yacoub M., Zuhlke L., Murray C., Fuster V. Global burden of cardiovascular diseases and risk factors, 1990–2019: update from the GBD study. Journal of the American College of Cardiology. 2020;76(25):2982–3021. https://doi.org/10.1016/j.jacc.2020.11.010

2. Timmis A., Aboyans V., Vardas P., Townsend N., Torbica A., Kavousi M., Boriani G., Huculeci R., Kazakiewicz D., Scherr D., Karagiannidis E., Cvijic M., Kapłon-Cieślicka A., Ignatiuk B., Raatikainen P., De Smedt D., Wood A., Dudek D., Van Belle E., Weidinger F., ESC National Cardiac Societies. European Society of Cardiology: the 2023 atlas of cardiovascular disease statistics. European Heart Journal. 2024;45(38):4019–4062. https://doi.org/10.1093/eurheartj/ehae466

3. Быков В. В., Быкова А. В., Станкевич С. А., Алиев О. И., Сидехменова А. В., Дунаева О. И., Хазанов В. А., Венгеровский А. И., Удут В. В. Фармакологические эффекты нового стимулятора растворимой гуанилатциклазы при экспериментальной легочной артериальной гипертензии. Бюллетень сибирской медицины. 2023;22(1):14–22. https://doi.org/10.20538/1682-0363-2023-1-14-22

4. Быков В. В., Смольякова В. И., Чернышева Г. А., Алиев О. И., Анищенко А. М., Сидехменова А. В., Дунаева О. И., Станкевич С. А., Хазанов В. А. Влияние нового антитромботического средства GRS – стимулятора растворимой гуанилатциклазы на эндотелиальную дисфункцию у крыс после инфаркта миокарда. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2021;172(12):707–710. https://doi.org/10.47056/0365-9615-2021-172-12-707-710

5. Мартынов А. И., Барбараш О. Л., Кобалава Ж. Д., Малявин А. Г., Бощенко А. А., Венгеровский А. И., Затейщиков Д. А., Чесникова А. И., Якушин С. С., Кашталап В. В., Хазанов В. А., Быков В. В., Ларченко В. В. Резолюция совета экспертов «Перспективные возможности применения препарата GRS в терапевтической практике». Терапия. 2024;10(5):144–149. https://doi.org/10.18565/therapy.2024.5.144-149

6. Temova Rakuša Ž., Grobin A., Roškar R. A comprehensive approach for the simultaneous analysis of all main water-soluble vitamins in multivitamin preparations by a stability-indicating HPLC-DAD method. Food Chemistry. 2021;337:127768. https://doi.org/10.1016/j.foodchem.2020.127768

7. Debnath S., Das M., Mondal S., Sarkar B. K., Babu G. Advances in chromatography: contemporary techniques and applications. Essential Chem. 2025;2(1):1–27. https://doi.org/10.1080/28378083.2025.2466624

8. Петраков А. И., Кривощеков С. В., Гурьев А. М., Белоусов М. В. Получение и аттестация первичного стандартного образца 6,8-диметил-2-пиперидинометил-2,3-дигидротиазоло[2,3-F]ксантина. Регуляторные исследования и экспертиза лекарственных средств. 2025;15(6):655–663. https://doi.org/10.30895/1991-2919-2025-15-6-655-663

9. Граник В. Г., Рябова С. Ю., Паршин В. А., Михайлова Л. А., Григорьев Н. Б. Новое антитромботическое и антиатеросклеротическое средство и способ его получения (варианты). Патент РФ на изобретение № RU 2483066C1. 27.05.2013. Доступно по: https://patents.google.com/patent/RU2483066C1/ru Ссылка активна на 23.07.2026

10. Эпштейн Н. А. О стрессовых экспериментах при разработке / усовершенствовании аналитических методик и технологий лекарственных субстанций и препаратов. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016;(3):118–132.

11. Liu X., Bordunov A. V., Pohl C. A. Preparation and evaluation of a hydrolytically stable amide-embedded stationary phase. Journal of Chromatography A. 2006;1119(1–2):128–134. https://doi.org/10.1016/j.chroma.2005.11.086

12. Барам Г. И., Грачев С. А. Использование перхлората лития при выделении и анализе олиго- и полинуклеотидов. Биоорганическая химия. 1985;11(10):1420–1422.

13. Азарова И. Н., Барам Г. И. Применение перхлората лития в обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии аминосоединений. Сорбционные и хроматографические процессы. 2014;14(1):65–74.

14. Эпштейн Н. А. Валидация хроматографических методик: контроль чистоты пиков и специфичности методик с использованием диодно-матричных детекторов (обзор). Разработка и регистрация лекарственных средств. 2020;9(3):129–136. https://doi.org/10.33380/2305-2066-2020-9-3-129-136

15. Эпштейн Н. А., Севастьянова В. Л., Королева А. И. Исследование робастности при валидации методик ВЭЖХ и УЭЖХ: современный подход, включающий анализ рисков. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2018;(1):96–109.