Разработка и валидация методики количественного определения сальбутамола, бромгексина, амброксола и гвайфенезина в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС

Введение. Комбинированные лекарственные препараты, содержащие в составе сальбутамол, бромгексин, амброксол и гвайфенезин, оказывают одновременно муколитическое, отхаркивающее и бронхолитическое действие. Разработка методики совместного определения действующих веществ в биологической жидкости является необходимой процедурой для выполнения аналитической части фармакокинетических исследований и исследований биоэквивалентности многокомпонентных лекарственных средств. В настоящее время литературных данных о совместном определении, бромгексина, амброксола и гвайфенезина нет, но существует ряд опубликованных работ по отдельному определению анализируемого вещества в биологической жидкости. В данном исследовании приведена разработка и валидация методики совместного определения сальбутамола, бромгексина, амброксола и гвайфенезина в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием. В качестве пробоподготовки был выбран способ твердофазной экстракции. В качестве внутренних стандартов использовались дейтерированные производные анализируемых веществ.

Цель. Целью исследования является разработка методики количественного определения сальбутамола, бромгексина, амброксола и гвайфенезина в плазме крови человека методом ВЭЖХ с тандемным масс-спектрометрическим детектированием для проведения аналитической части фармакокинетических исследований.

Материалы и методы. Количественное определение сальбутамола, бромгексина, амброксола и гвайфенезина в плазме крови человека методом ВЭЖХ с тандемным масс-спектрометрическим детектированием. В качестве пробоподготовки был использован способ твердофазной экстракции.

Результаты и обсуждение. Разработанная методика была валидирована по следующим валидационным параметрам: селективность, эффект матрицы, линейность, точность, прецизионность, предел количественного определения, перенос пробы, стабильность образцов.

Заключение. Разработана и валидирована методика количественного определения сальбутамола, бромгексина, амброксола и гвайфенезина в плазме крови человека методом ВЭЖХ-МС/МС. Подтвержденный аналитический диапазон методики составил 0,1–20  нг/мл в плазме крови для сальбутамола, 0,25–25 нг/мл в плазме крови для бромгексина, 0,075–3 нг/мл в плазме крови для амброксола и 10–2000 нг/мл в плазме крови для гвайфенезина. Полученный аналитический диапазон позволяет применять разработанную методику для проведения аналитической части исследований фармакокинетики препаратов, содержащих сальбутамол, бромгексин, амброксол, гвайфенезин. 

1. DrugBank. Available at: https://www.drugbank.ca/drugs/DB09019; https://www.drugbank.ca/drugs/DB01001; https://www.drugbank.ca/drugs/DB00874; https://www.drugbank.ca/drugs/DB06742.

2. Регистр лекарственных средств. Available at: https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_1338.htm; https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_276.htm; https://www.rlsnet.ru/tn_index_id_175.htm; https://www.rlsnet.ru/mnn_index_id_2287.htm.

3. Schmeer, K., Sauter, T., Schmid J. Rapid pharmacokinetic screening of salbutamol in plasma samples by column-switching high-performance liquid chromatography – electrospray mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1997; 777(1): 67–72. Doi.org/10.1016/S0021-9673(97)00432-9.

4. Joyce K. B., Jones A. E., Scott R. J., Biddlecombe R. A., Pleasance S. Determination of the enantiomers of salbutamol and its 4‐O‐sulphate metabolites in biological matrices by chiral liquid chromatography tandem mass spectrometry. Rapid communications in mass spectrometry. 1998; 12(23): 1899–1910. https://doi.org/10.1002/(SICI)1097-0231(19981215)12:23%3C1899::AID-RCM417%3E3.0.CO;2-I/

5. Liu J., Chen X., Hu Y., Cheng G., Zhong D. Quantification of the major metabolites of bromhexine in human plasma using RRLC–MS/MS and its application to pharmacokinetics. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. 2010; 51(5): 1134–1141. Doi.org/10.1016/j.jpba.2009.11.024.

6. Kim H., Yoo J. Y., Han S. B., Lee H. J., Lee K. R. Determination of ambroxol in human plasma using LC-MS/MS. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. (2003); 32(2): 209–216. Ddoi.org/10.1016/S0731-7085(03)00059-1.

7. Wen A., Hang T., Chen S., Wang Z., Ding L., Tian, Y., Xu X. Simultaneous determination of amoxicillin and ambroxol in human plasma by LC– MS/MS: Validation and application to pharmacokinetic study. Journal of pharmaceutical and biomedical analysis. 2008; 48(3): 829–834. Doi. org/10.1016/j.jpba.2008.05.032.

8. Su F., Wang F., Gao W., Li H. Determination of ambroxol in human plasma by high performance liquid chromatography – electrospray ionization mass spectrometry (HPLC–MS/ESI). Journal of Chromatography B. 2007; 853(1-2): 364–368. Doi.org/10.1016/j.jchromb.2007.03.015.

9. Hang T. J., Zhang M., Song M., Shen J. P. Simultaneous determination and pharmacokinetic study of roxithromycin and ambroxol hydrochloride in human plasma by LC-MS/MS. Clinica chimica acta. (2007); 382(1-2): 20–24. Doi.org/10.1016/j.cca.2007.03.015.

10. Dong X., Ding L., Cao X., Jiang L., Zhong S. A sensitive LC-MS/MS method for the simultaneous determination of amoxicillin and ambroxol in human plasma with segmental monitoring. Biomedical Chromatography. (2013); 27(4): 520–526. Doi.org/10.1002/bmc.2824.

11. Eichhold T. H., McCauley-Myers D. L., Khambe D. A., Thompson, G. A., Hoke S. H. (II). Simultaneous determination of dextromethorphan, dextrorphan, and guaifenesin in human plasma using semi-automated liquid/liquid extraction and gradient liquid chromatography tandem mass spectrometry. Journal of pharmaceutical and biomedic alanalysis. 2007; 43(2): 586–600. Doi.org/10.1016/j.jpba.2006.07.018.

12. Wen J., Zhang H., Xia C., Hu X., Xu W., Cheng X., Xiong Y. A sensitive liquid chromatography – electrospray ionization – mass spectrometry method for the simultaneous determination of pentoxyverine citrate and guaifenesin in human plasma – application to pharmacokinetic and bioequivalence studies. Biomedical chromatography. 2010; 24(4): 351–357. Doi.org/10.1002/bmc.1298.

13. Chen X., Huang J., Kong Z., Zhong D. Sensitive liquid chromatography – tandem mass spectrometry method for the simultaneous determination of paracetamol and guaifenesin in human plasma. Journal of Chromatography B. 2005; 817(2): 263– 269. Doi.org/10.1016/j.jchromb.2004.12.011.

14. Pubchem. Available at: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/2083#section=Solubility; https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/2442#section=Chemical-and-Physical-Properties; https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/2132#section=Experimental-Properties.

15. Миронов А. Н. Руководство по экспертизе лекарственных средств. Т. II. М.: Гриф и К. 2013: 280.

16. Food and Drug Administration. Available at: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/bioanalytical-method-validation-guidance-industry.

17. European Medicines Agency. Available at: https://www.ema.europa.eu/en/bioanalytical-method-validation.